Este modelo proporciona un protocolo estándar para establecer modelos animales de enfermedad coronaria del injerto. El procedimiento de modelo animal establecido por este método es estándar y el resultado es estable. Para comenzar, divida los minicerdos machos de tres meses de edad que pesen de 30 a 35 kilogramos en los grupos de enfermedad de injerto venoso y simulado de cinco animales cada uno.
Después de anestesiar al animal, establezca el acceso al oído insertando un catéter venoso permanente en la vena marginal del oído. Ahora, transfiera el cerdo a la mesa de operaciones en posición supina. Realice la intubación traqueal con un tubo de calibre francés de 7.0 a 7.5 y conéctelo al circuito de respiración de anestesia.
Inmovilice las extremidades con vendajes y eleve la cabeza con una cortina estéril. Después de inyectar bromuro de vecuronio por vía intravenosa para la relajación muscular, controle la frecuencia cardíaca, los niveles de oxígeno en la sangre y la temperatura corporal mediante un electrocardiograma. Después de afeitarse y esterilizar el área quirúrgica, coloque una cortina quirúrgica estéril a su alrededor.
Después de hacer la incisión y exponer la vena mamaria interna como se describe en el texto, localice la vena mamaria interna y la arteria mamaria interna izquierda en el lado izquierdo del esternón, y realice una disección roma de la vena mamaria interna con fórceps vasculares. Realizar hemostasia por electrocoagulación de las ramas de la vena mamaria interna izquierda con un cuchillo eléctrico. Si la hemostasia es incompleta, usando hilo de algodón, ligar y marcar los dos extremos de la vena mientras se cosecha.
Una vez que se retira la vena, inyecte heparina, solución salina normal en la vena para el tratamiento previo. Luego, coloque la vena en la solución salina normal, guárdela como respaldo y, de manera similar, incise la vena mamaria interna del grupo simulado. Luego, abra el pericardio, cierre la pared torácica y use la vena mamaria interna para el control patológico sin injerto de derivación de la arteria coronaria.
Haga una incisión de aproximadamente siete centímetros con un cuchillo eléctrico en el pericardio para exponer el tronco de la arteria coronaria derecha. Suspenda el pericardio y cose la piel del lado ipsilateral con suturas quirúrgicas 1-0. Ahora, separe el tronco de la arteria coronaria derecha de los tejidos circundantes.
Luego, usando un gancho de alambre, evite la banda de bloqueo debajo del extremo proximal de la arteria coronaria derecha aislada cerca de la aorta. Luego, trate el miocardio con tres ciclos de isquemia de dos minutos y cinco minutos de reperfusión apretando y relajando la banda de bloqueo. Además, controle la actividad eléctrica del corazón con el electrocardiograma durante el preacondicionamiento de la isquemia de reperfusión.
Luego, corte el epicardio que cubre los vasos sanguíneos después de apretar la banda para bloquear el flujo sanguíneo coronario derecho. Exponer la pared de la arteria coronaria, cortada longitudinalmente con la punta de una cuchilla quirúrgica contra el centro de la pared anterior de los vasos sanguíneos. Después de cortar la luz y agrandar la incisión y colocar una derivación coronaria, inserte un extremo de la derivación con una bobina en la arteria coronaria distal a través del desgarro.
Ahora, desvíe la sangre en las arterias coronarias hacia la derivación coronaria hueca para garantizar un campo quirúrgico despejado, y realice una sutura continua de extremo a lado entre la vena mamaria interna y la pared aórtica con la sutura de polipropileno 6-0. En el centro de la aorta ascendente, ocluya la pared anterolateral izquierda de la aorta ascendente con una pinza de semioclusión. Después de hacer una pequeña incisión con la cuchilla quirúrgica en la pared aórtica donde se ha cortado la adventicia, inserte el extremo de la cabeza del eje deslizante en el extremo de la cabeza del punzón en la cavidad aórtica a través de esta incisión.
Luego, contrae el eje deslizante hacia afuera y el cuchillo circular corta un pedazo de la pared arterial. Una vez que se extrae la derivación, realice una sutura continua de extremo a lado entre la vena mamaria interna y la arteria coronaria derecha con la sutura de polipropileno 6-0. Después de abrir la pinza de semioclusión, registre el flujo de derivación del tronco de la arteria coronaria derecha proximal al sitio de anastomosis mediante ultrasonido.
Prepare al animal para la cirugía como se demostró anteriormente. Y con un cuchillo eléctrico, haga una incisión esternal mediana de 10 centímetros para dividir el esternón y cosechar la vena 30 días después de la cirugía. Durante la separación, evite los vasos sanguíneos principales, el corazón y separe los vasos sanguíneos injertados capa por capa.
Corte rápidamente los vasos sanguíneos grandes que se conectan al corazón y coloque el corazón y la aorta ascendente en trozos de hielo. Una vez que se eliminan el puente vascular del injerto, la aorta conectada y la arteria coronaria derecha, enjuague todas las muestras con solución salina normal a cuatro grados centígrados. Después de tomar todo el recipiente de injerto de aproximadamente tres a cuatro centímetros y dividirlo en cuatro o cinco partes iguales, transfiéralo a CryoTubes para congelarlo rápidamente en nitrógeno líquido.
Para el análisis, fije el injerto helado y enjuagado con solución salina en solución de paraformaldehído al 4%. Después de 12 horas de fijación del tejido, tiñe las secciones en 50 mililitros de una solución acuosa de hematoxilina durante tres minutos. Luego, separe las secciones lavando con 50 mililitros de ácido clorhídrico-etanol al 0,5% y agua con 0,2% de amoníaco durante 10 segundos cada una.
Una vez que las secciones se enjuagen durante una hora con agua corriente, límpielas remojándolas en agua destilada durante tres minutos. Después de deshidratar las secciones en etanol al 70% y 90% durante 10 minutos, colóquelas en 50 mililitros de solución de tinción de eosina al 0,5% de alcohol durante dos o tres minutos. Una vez que las secciones teñidas estén deshidratadas en etanol puro, remoje las muestras en xileno puro durante 10 minutos para hacerlas transparentes.
Finalmente, gotee las secciones transparentes con pegamento neutro antes de cubrirlas con un cubreobjetos. Observe secciones patológicas bajo un microscopio óptico a 40 veces el aumento. El examen ultrasónico mostró que la dirección general del flujo sanguíneo era normal en el extremo proximal, la cavidad vascular y el extremo distal del vaso del injerto.
Sin embargo, los extremos proximal y distal del vaso del injerto mostraron algún flujo retrógrado de sangre. El análisis histológico de la vena mamaria interna reveló que en el grupo simulado la túnica íntima, la túnica media y la pared venosa del injerto venoso parecían normales. Sin embargo, 30 días después del trasplante de arteria coronaria, la íntima del vaso se engrosó y la luz se estrechó.
Entre los grupos de enfermedad de injerto simulado y venoso, cuatro índices bioquímicos, aspartato aminotransferasa, bilirrubina sérica, bilirrubina total y creatinina, mostraron cambios estadísticamente significativos. El cirujano debe exponer completamente la vena mamaria interna y asegurarse de que no esté unida al tejido circundante. La técnica proporciona un proceso de modelado estandarizado para estudiar enfermedades de injertos venosos en modelos animales.
