Este protocolo describe todos los pasos clave para establecer con éxito un modelo de auto-trasplante renal ortotópico porcino utilizando un tiempo de preservación de órganos de 24 horas y monitoreo telemétrico perioperatorio. La principal ventaja de este gran modelo de auto-trasplante animal sobre estudios ex-vivos sobre modelos animales pequeños son un anatómico quirúrgico y las similitudes fisiopatológicas con el entorno clínico. Nuestro equipo en el hospital universitario RWTH Aachen estará demostrando los procedimientos.
Después de confirmar el nivel adecuado de sedación en un cerdo hembra adulto ayunado durante la noche, haga una incisión de tres a cinco centímetros en la ingle y dessecte la arteria femoral de una manera de 360 grados. Utilice un bisturí número 11 para hacer una arteriotomía e inserte el sensor arterial del dispositivo de telemetría. Después de hacer una bolsa subcutánea en el flanco izquierdo, haga un túnel del transpondedor de telemetría en el flanco y fije el transpondedor a la fascia muscular con una sutura de nudo único de polipropileno de 3O.
A continuación, haga dos pequeñas incisiones en el lado izquierdo y derecho del tórax y haga un túnel de los electrodos ECG rojos y blancos a su ubicación designada. Cuando los electrodos hayan sido asegurados, comience el registro de los datos de telemetría. Tras la adquisición de la señal estable, cierre la incisión de la ingle con suturas y el apósito de película en aerosol y coloque una chaqueta de porcino de tamaño adecuado sobre el animal.
14 días después de la primera cirugía, haga una incisión de cuatro a cinco centímetros en la ranura yugular en el lado derecho del animal anestesiado y diseccione el tejido subcutáneo y muscular para exponer la vena malabarista. Utilice un introductor de láminas o el método Seldinger para insertar el catéter yugular. Asegure el catéter con una sutura de polipropileno 5-0 y cierre la incisión en dos capas.
Después de la desinfección quirúrgica y el drapeado estéril, realizar una laparotomía media para abrir el abdomen y utilizar un retractor abdominal estándar para exponer el campo quirúrgico. Abra la capa peritoneal y utilice un cauterio monopolar, fórceps bipolares y tijeras finas para diseccionar el riñón izquierdo y el uréter de cualquier tejido adherente. Luego usa una sutura de 3-0 Polyglactin para ligar y dividir el uréter izquierdo al menos 10 centímetros distal al hilio renal.
Para recuperar el riñón del injerto, utilice abrazaderas vasculares para cerrar la arteria renal y la vena cerca de la aorta y la vena cava. Y corta los vasos por encima de las almejas. Luego entregue el riñón al equipo de la mesa posterior para su preparación adicional y use una sutura de polipropileno 5-0 para cerrar el muñón de la arteria renal y la vena renal.
Inmediatamente después de la recuperación, utilice un catéter periférico estándar de calibre 14 para cannular la arteria renal y lavar el riñón con al menos 500 mililitros de solución de preservación de órganos fríos con hielo. Después del lavado, envuelva el injerto en bolsas de órganos estériles para su almacenamiento en solución de preservación de órganos con un tiempo isquémico frío objetivo de 24 horas a cuatro grados Centígrados utilizando un circuito de enfriamiento controlado por computadora. De dos a cinco minutos antes de la sujeción vascular, inyectar por vía intravenosa 100 unidades internacionales por kilogramo de heparina natrium y posteriormente extraer el riñón derecho contralateral como se ha demostrado y volver a abrir la laparotomía mediana.
De dos a cinco minutos antes de la sujeción vascular, inyectar por vía intravenosa 100 unidades internacionales por kilogramo de natrium heparina y, posteriormente, extraer el riñón derecho contralateral como se ha demostrado. Coloque el riñón de injerto preservado en el campo quirúrgico e inicie la administración de 0,1 a 1 microgramos por kilogramo por minuto de norepinefrina como perfusión continua utilizando la presión arterial media y la frecuencia cardíaca para controlar la eficiencia. Para la anastomosis de extremo a extremo de la vena renal, utilice polipropileno 5-0 para colocar dos puntadas de esquina y suturar la pared posterior de forma continua.
Después de completar la pared posterior, utilice un extremo de la puntada de esquina craneal para suturar la pared frontal en una dirección craneocaudal y lavar la vena con una unidad internacional de 100 por mililitro de solución salina heparinizada. Para la anastomosis de extremo a extremo de la arteria renal, utilice una puntada de esquina craneal de polipropileno 6-0 antes de usar la técnica de paracaídas para suturar la pared posterior de una manera continua como se ha demostrado. Suturar la pared frontal con el otro extremo de la sutura de polipropileno 6-0 doble armada y lavar la arteria con 100 unidades internacionales por mililitro de solución salina heparinizada.
Después de la finalización de la anastomosis, ate los dos hilos en la esquina caudal y abra secuencialmente las abrazaderas vasculares y arteriales venosas para permitir la reperfusión del riñón. Después de la reperfusión, administrar tópicamente cinco mililitros de papaverina a la pared exterior de la arteria renal y administrar por vía intravenosa 250 mililitros de 20%solución de glucosa en una sola dosis de 80 miligramos de furosemida. A continuación, pase un catéter de orina pediátrica francés de 12 a través de la pared abdominal y la piel y use ligaduras para fijar el catéter al uréter.
Cierre la capa peritoneal sobre el riñón para evitar la dislocación del injerto y la torcedura de la anastomosis vascular. Y cierra el abdomen en cuatro capas como se demuestra. Por último, utilice ultrasonido Doppler de color para asegurar una perfusión arterial y venosa adecuada del injerto renal antes de devolver el animal completamente reclinado a la instalación de la vivienda.
En este conjunto representativo de cinco experimentos de auto-trasplante de riñón ortotópico porcino, la implantación del transpondedor y los procedimientos de auto-trasplante tuvieron éxito en cada animal con suficientes señales de telemetría registradas durante el período de observación. Después del cierre abdominal, la ecografía Doppler de color reveló una perfusión arterial y venosa satisfactoria del riñón en todos los casos. Los valores séricos de potasio y creatina alcanzaron su punto máximo en los días postoperatorios de tres a cuatro y mostraron una recuperación gradual después.
El pH de la sangre se mantuvo dentro del rango normal y la salida de orina se recuperó a valores normales durante los primeros cuatro días postoperatorios. Este protocolo se puede utilizar para responder a varias preguntas sobre los efectos de las técnicas de preservación de órganos o terapias ex-vivo o in-vivo en un modelo animal grande clínicamente significativo.
