Lesión por isquemia-reperfusión de órganos mediante la simulación de cambios hemodinámicos en el modelo de trasplante de hígado de rata. La lesión por isquemia y reperfusión es una aplicación común después del trasplante de hígado. Los pacientes con afectación extrahéptica de órganos tienden a permanecer más tiempo en el hospital, gastan más y tienen un peor pronóstico.
El desarrollo de la complicación está estrechamente relacionado con la duración de la fase anhepática del trasplante hepático. Sin embargo, la investigación básica sobre la lesión de isquemia-reperfusión después del trasplante de hígado ha demostrado que la tasa de supervivencia después del trasplante hepático está inversamente relacionada con el grado de lesión en los órganos extrahápticos. Basándonos en la definición de la fase anháptica, simulamos el cambio hemodinámico en el trasplante de hígado que resulta en lesiones por isquemia-reperfusión de órganos extrahápticos.
De este trabajo es proporcionar una descripción detallada de cómo construir un modelo animal de la fase anháptica en ratas, investigación básica sobre la lesión de isquemia-reperfusión después del trasplante de hígado. Yuan Yuan es responsable de todas las operaciones de video animales. Dos fórceps oftálmicos, rectos y doblados, y lente interocular, fórceps IOL, tijeras oftálmicas, uno a dos retractores, hisopos de algodón, suturas quirúrgicas 3-0, gasa iodoforme, agujas de sutura, Biosistemas cuando sea necesario, y lente interocular, fórceps IOL se utiliza para separar los vasos sanguíneos debido a cabezas redondas.
Máquina de anestesia animal, máquina de deshidratación, máquina de incrustación, cortadora patológica, máquina congelada, cortadora de tejidos, horno de secado de aire, microscopio óptico neural, escáner, enflurano para anestesia general, solución de 4% de paraformaldehído, etanol, xileno, cera de parafina de alta eficiencia, solución de tinte de hematoxilina-eosina, ácido clorhídrico, amoníaco, tobogán, vidrio de cubierta, goma neutra y reactivos moribundos, y materiales consumibles. Pipetas, centrífuga, analizador bioquímico automático, alanina amino transferasa, kit ALT, aspartato, aminotransasa, kit AST, kit de creatinina. Después de pesar, las ratas son anestesiadas con isoflurano por una máquina de anestesia animal.
Después de la desinfección abdominal, haga una incisión mediana de tres centímetros por debajo del proceso xifoide usando fórceps y tijeras. Abra la cavidad abdominal, exponga el hígado usando un retractor y movilice el ligamento hepatogástrico. Use hisopos de algodón para voltear suavemente el lóbulo medio del hígado y girarlo hacia arriba para exponer el porta habitis.
Identifique el conducto biliar, la vena del portal y la arteria hepática. Empuje el intestino delgado hacia la cavidad abdominal inferior izquierda usando intercambios de algodón y mueva el cava de vena inferior a la vena renal derecha, aísle la vena del portal, la arteria hepática y el cava vena inferior por encima de la vena renal derecha con una lente intraocular, IOL, fórceps marcados con hilo de seda 3-0 cada uno con un nudo deslizante. Abre la piel de la extremidad inferior izquierda y derecha y expone la vena femoral usando fórceps oftálmicos.
Inyectar lentamente heparina de bajo peso molecular 625 UI/kg a través de la vena femoral para heparinizar todo el cuerpo. Ligar la vena del portal, la arteria hepática y el cava de vena inferior por encima de la vena renal derecha con suturas número 3-0, que duran 45 minutos. Reemplace el intestino delgado en la cavidad abdominal y cúbralo con gasa.
La anestesia por inhalación se reduce durante estos períodos. Después de 45 minutos, libere la vena del portal, la arteria hepática y el cava de vena inferior por encima de la vena renal derecha. Suturar el músculo y la piel capa por capa y terminar la anestesia inhalacional.
Proporcionar analgesia postoperatoria utilizando morfina subcutánea de 5 mg/kg cada cuatro horas Observe la rata hasta que esté despierta y manténgase alimentada bajo una temperatura de 25 más o menos dos grados centígrados y se necesita humedad de 50 más o menos 10% Lámparas de calentamiento animal. En este modelo animal, las ratas se dividieron aleatoriamente en cinco grupos según isquemia durante 15 minutos, yo 15 grupo, 30 minutos, yo 30 grupo, 45 minutos, yo 45 grupo, 60 minutos, I 60, y un grupo sham con 10 ratas en cada grupo. Su tasa de supervivencia de cada grupo se observó 14 días después de la operación.
Todas las ratas sobrevivieron en los grupos I 15, I 30 y Sham. Ocho sobrevivieron durante 14 días en el grupo I 45 y sólo dos sobrevivieron en el grupo I 60. Los resultados sugirieron que las ratas podrían tolerar la fase anhepática durante 45 minutos como máximo.
Durante el experimento, Biosystems se utilizó para registrar los cambios en la frecuencia cardíaca y la presión arterial, intubación arterial carótida interna derecha antes y después de la fase anhepática. Encontramos que la frecuencia cardíaca y la presión arterial media, MAP de ratas, cambiaron drásticamente después de la ligadura vascular. Después de la ligadura, la isquemia hepática, la congestión y el edema en los intestinos, las várices gástricas y la esplenomegalia eran evidentes.
80 ratas se dividieron aleatoriamente en ocho grupos, incluyendo isquemia durante 45 minutos, T0, reperfusión durante seis horas, T6, 12 horas, T12, 24 horas, T24, 48 horas, T48, 72 horas, T72, siete días, T7, en 14 días, T14, respectivamente. Los tejidos renal, páncreas, intestino delgado, corazón y pulmón fueron tomados y manchados con HE después de que las ratas fueron sacrificadas. A excepción del corazón, las puntuaciones patológicas se dieron de acuerdo con las referencias, respectivamente.
Los resultados mostraron que el tiempo de máxima lesión de los órganos extrahápticos varió. Pasaron de seis a 24 horas después de la operación para el páncreas y de 24 a 48 horas para los pulmones. El tracto intestinal y el riñón resultaron más gravemente heridos después de 45 minutos de isquemia.
No hubo una anormalidad evidente de la mucosa intestinal 24 horas después de la operación y los riñones se recuperaron después de 48 horas. En cuanto al corazón, con el paso del tiempo después de la reperfusión, la narcosis de células miocárdicas locales, la fragmentación y disolución celular, la infiltración de células inflamatorias y la vasodilatación y congestión local se encontraron en el tejido entre 24 y 48 horas después de la operación. Se recogió el suero y los niveles de ALT, AST, creatinina y amilasa fueron detectados por un analizador bioquímico automático.
Todos los indicadores alcanzaron un máximo de 24 a 48 horas, a diferencia de los cambios patológicos. Aunque los niveles eran básicamente normales 48 horas después de la operación, los daños patológicos continuaban. En resumen, el modelo en ratas es simple y fácil de usar sin microcirugía y proporciona base para la investigación fundamental de la lesión de isquemia-reperfusión de órganos extrahápticos después de la isquemia hepática.
