¿Qué eventos ocurren dentro de las meninges que contribuyen al dolor de cabeza en ausencia de lesión tisular? A diferencia del uso previo de modelos de estimulación dural en ratas, permite el uso del extenso catálogo de ratones modificados genéticamente. La lucha principal sería localizar la intersección de las suturas lambdoidal y sagital palpando el cráneo con el inyector.
Para comenzar, cree los infusores de ratón modificando una cánula interna y un infusor disponibles comercialmente con una tapa de plástico de sílice fundida que es ajustable y se inserta en una cánula guía de calibre 28. Use una pinza para ajustar la tapa de plástico de sílice fundido en el infusor sin doblar el infusor. Ajuste el infusor a una longitud de 6 milímetros medidos desde la punta del infusor hasta el borde de la tapa de plástico de sílice.
Realice inyecciones piloto para otras cepas de ratón y ajuste la longitud para inyectar con precisión en la duramadre. Luego, conecte el extremo largo del infusor a un tubo de plástico de ocho pulgadas o más para contener el volumen de cinco microlitros. Inserte el tubo mientras garantiza la cobertura completa de la parte metálica y la parte superior del tapón de plástico ubicado en el infusor para evitar que las burbujas de aire se acumulen en la línea.
A continuación, llene la microjeringa y conecte el otro extremo del tubo a una microjeringa de vidrio de 10 microlitros, asegurando un sellado hermético sobre la parte metálica de la jeringa. Luego, llene la jeringa con cinco microlitros de PBS o líquido intersticial sintético u otros vehículos de elección para evitar la formación de burbujas de aire. Si es necesario, inunde la línea con el vehículo para disipar las burbujas preformadas.
Alternativamente, llene previamente la jeringa y, después de conectarla, empuje el fluido a través de la línea conectada. Una vez que la línea llena del vehículo esté funcionando de manera eficiente, cargue cinco microlitros de la solución en la jeringa Hamilton. Una vez que el ratón esté completamente anestesiado, aplique ungüento oftálmico estéril en los ojos y afeite la cabeza del animal, luego desinfecte la piel con povidona yodada y etanol.
Sostenga la cabeza del animal con una mano y sostenga el infusor con la jeringa cargada de drogas en la otra. Luego, usando un infusor, sondee cuidadosamente, localice y verifique la unión de las suturas sagital y lambdoidal en el cráneo del ratón. Una vez que la sutura esté ubicada y el infusor esté en su lugar, mueva lenta y suavemente el infusor hacia adelante y hacia atrás hasta que el infusor penetre a través de la piel y caiga hacia abajo en la unión hasta el tapón de plástico, asegurando la inserción de toda la punta del infusor de 6 milímetros en la unión.
Luego, empuje lentamente el émbolo de la jeringa para expulsar los cinco microlitros de líquido en la duramadre. En el día de la prueba, después de la aclimatación a la habitación, retire un mouse junto con la taza de la cámara respectiva. Mantenga la copa en posición horizontal para distribuir uniformemente el peso corporal, ya que la distribución desigual del peso puede alterar o impedir la respuesta de los animales.
Coloque la taza con el ratón en una almohadilla absorbente que se mantiene en la mesa debajo del bastidor de pruebas. Luego, para las pruebas periorbitarias de von Frey, coloque el filamento von Frey de 07 gramos en el centro de la cara entre los ojos y aplique suficiente presión sobre el filamento para hacer que el cabello von Frey se doble en una formación en forma de C. Mantenga el contacto del filamento durante unos tres a cinco segundos o hasta que el ratón deslice el filamento con la cabeza o las patas.
Para seguir el método Dixon arriba-abajo, aplique el siguiente filamento de menor peso si el ratón responde al filamento, de lo contrario, aplique filamento de mayor peso. El procedimiento se utilizó para examinar los efectos de la prolactina dural en la hipersensibilidad facial evocada mecánicamente. Los resultados del estudio demostraron una reducción significativa de los umbrales de abstinencia facial en ratones ICR hembra en respuesta a cinco microgramos de prolactina dural.
Una dosis diez veces menor de 5 microgramos de prolactina también mostró umbrales de abstinencia facial reducidos, similar a una dosis alta de prolactina. Las inyecciones de prolactina produjeron comportamientos espontáneos relacionados con el dolor, que se evaluaron a través de una mueca. Dural 5 microgramos de prolactina causaron muecas significativas en ratones hembra y demostraron además un papel claro de la prolactina dural en comportamientos similares a la migraña femenina Pruebas de comportamiento utilizando filamentos von Frey o muecas faciales para determinar si el estímulo, en ausencia de lesión, causa una respuesta de dolor de cabeza.
Esta técnica ahora se puede utilizar para investigar los mecanismos inflamatorios en las meninges sin preocuparse por las advertencias causadas por las craneotomías y la inflamación posterior.
