La investigación a largo plazo y el uso de un agente de biocontrol dependen de la disponibilidad de técnicas de cría efectivas y económicas, y este protocolo ha demostrado ser eficiente para la cría de este parasitoide. Actualmente existe un enorme interés en la cría de este parasitoide para investigación o liberación en campo, y el protocolo beneficiará la investigación futura a largo plazo y el uso de este prometedor agente de biocontrol. Los primeros usuarios pueden necesitar comprender algo de biología básica de los insectos involucrados a través de la lectura de las referencias relevantes proporcionadas en el artículo y algunas prácticas de los métodos.
Para hacer la dieta del huésped, primero, prepare la porción líquida de la dieta como se describe en el manuscrito. A continuación, agregue de 25 a 30 gramos de puré de arándanos a un matraz vacío de 250 mililitros. Luego, vierta el líquido en el matraz con el líquido simplemente cubriendo la parte superior del puré de arándanos.
A continuación, para criar al anfitrión Drosophila suzuki, primero corte un trozo de toalla de papel absorbente y gírelo en el centro. Luego, coloque la sección central retorcida de la toalla de papel en el matraz de dieta. Para retener la humedad, use agua destilada para mojar la toalla de papel y la dieta.
Luego, para transferir moscas adultas sexualmente maduras, retire cuidadosamente el tapón de un matraz de colonia de moscas e invierta en el matraz de dieta. Después de una semana de esta exposición, mantenga las moscas en una cámara ambiental durante tres semanas para la emergencia de moscas. Para exponer la larva huésped a los parasitoides, primero retire las moscas adultas y la toalla de papel del matraz, dejando los huevos y larvas de mosca.
Para servir como sustrato de pupación para las larvas, doble una nueva toalla de papel absorbente e insértela en el matraz. Luego aspire seis pares femeninos y masculinos del parasitoide G3 Ganaspis brasiliensis en el matraz y raye una fina capa de miel en la parte inferior del tapón de espuma. Para recolectar y almacenar los parasitoides, retire a los adultos después de cinco días.
Luego guarde el matraz en la cámara ambiental durante 35 días en las condiciones mencionadas anteriormente. Con la aparición de avispas adultas, aspirarlas tres veces por semana. Para sostener las avispas, primero coloque una toalla de papel humedecida pero no saturada con agua destilada en el fondo de un vial de Drosophila de 2.5 por 9.5 centímetros cuadrados.
Luego, transfiera alrededor de 60 avispas al vial y marque la fecha de emergencia. Guarde el vial en la cámara ambiental. Dos veces por semana, cubra una capa delgada de miel en la parte inferior del tapón de espuma de los viales.
Primero, organice la cría a gran escala de Drosophila suzuki colocando de 1, 500 a 2, 000 moscas adultas sexualmente maduras en una proporción de sexos de 50:50 en una jaula grande, tejida y cubierta de malla. Luego, coloque un plato con algodón empapado en agua y de cuatro a seis placas de Petri con el medio Drosophila estándar en la jaula. Dos veces por semana, reemplace las placas de Petri expuestas por otras frescas.
Coloque cada placa de Petri infestada sin la tapa en un vaso de plástico de 800 mililitros y cubra la taza con una malla fina. Luego, incuba las tazas a 23 grados centígrados y 75% de humedad relativa durante 12 a 15 días. Después de la incubación, transfiera el adulto Drosophila suzuki recién nacido a una jaula de cría.
A continuación, comience a preparar las larvas del huésped enjuagando los arándanos en agua fría durante un minuto y remoje las frutas en un recipiente lleno de una solución de lejía, diluida al 5% durante tres minutos. Luego, llene las placas de Petri de nueve centímetros con los arándanos lavados. En las últimas horas de la tarde, coloque las placas de Petri en la jaula de cría y déjelas durante la noche.
A la mañana siguiente, toque suavemente las placas de Petri para desalojar las moscas de las frutas y retire las frutas de la jaula de cría. Mientras tanto, prepare una jaula de parasitismo y una jaula de emergencia de avispa para el parasitoide G1 Ganaspis brasiliensis. Ambas jaulas deben tener una cuerda delgada debajo del techo para suspender uno o más comederos.
En cada jaula, suspenda un vial de Drosophila que contenga agua y selle con un tapón de acetato de celulosa boca abajo desde el techo cada cinco a siete días, dependiendo de la humedad relativa. Inmediatamente después de sacar los arándanos infestados de la jaula de Drosophila suzuki, colóquelos en la jaula de parasitismo con 1, 500 a 2, 000 avispas Ganaspis brasiliensis durante dos o tres días. A continuación, recoja las frutas en un vaso de plástico de 800 mililitros con papel absorbente en la parte inferior.
Incubar la copa abierta en la jaula de emergencia o eclosión a 21 grados centígrados y 65% de humedad relativa durante al menos 28 días. Durante la segunda y tercera semana de incubación, revise la jaula semanalmente para detectar la eclosión temprana del huésped. Para facilitar la recolección sucesiva de parasitoides, retire las moscas adultas.
Al final de la cuarta semana de incubación, proporcione un comedero y una fuente de agua a la jaula. Recolecte alrededor del 10 al 15% de las avispas adultas y transfiéralas a la jaula de parasitismo para reemplazar a las avispas viejas e improductivas. De las avispas restantes de la jaula de eclosión, almacene hasta 700 adultos en una proporción de sexos de 50:50 con un vaso de plástico de 800 mililitros que contenga un tubo de dos mililitros lleno de agua y sellado con un rollo de algodón dental en la parte inferior de la taza.
Guarde la taza con un marcado estado de emergencia en una cámara ambiental durante un máximo de un mes. Para el envío de parasitoides, coloque a unos 200 adultos en un tubo cónico de 50 mililitros. Luego, coloque todos los tubos en un contenedor de envío aislante junto con bolsas de hielo.
Este protocolo resultó en una cría exitosa a pequeña escala de G3 Ganaspis brasiliensis, un agente parasitoide, contra la plaga agrícola Drosophila suzuki en el laboratorio. La producción de descendencia no se vio afectada por las diferencias en la densidad de parasitoides y el tiempo de exposición. También se podría lograr la generación a gran escala de G1 Ganaspis brasiliensis, con la producción comenzando cinco semanas después de la exposición inicial al huésped Drosophila suzuki.
Desde la semana 8 hasta la semana 22, la producción de parasitoides se hizo proporcional a la cantidad de fruta expuesta a ellos. Es de vital importancia mantener una temperatura de cría adecuada, controlar la humedad y siempre proporcionar alimento para los insectos adultos. Los métodos podrían mejorarse aún más optimizando las densidades de cría del huésped y el parasitoide para maximizar la reproducción de las avispas y explorando la posibilidad de criar este parasitoide en huéspedes alternativos.
