바이오 조절제의 장기적인 연구 및 사용은 효과적이고 경제적 인 양육 기술의 가용성에 달려 있으며,이 프로토콜은이 기생충을 사육하는 데 효율적인 것으로 입증되었습니다. 현재 연구 또는 현장 방출을 위해이 기생충을 키우는 데 엄청난 관심이 있으며,이 프로토콜은이 유망한 바이오 조절제의 향후 장기 연구 및 사용에 도움이 될 것입니다. 첫 번째 사용자는 기사에 제공된 관련 참고 문헌과 방법의 몇 가지 관행을 읽음으로써 관련 곤충의 기본 생물학을 이해해야 할 수도 있습니다.
숙주 식단을 만들기 위해, 먼저, 원고에 설명 된대로식이 요법의 액체 부분을 준비하십시오. 그런 다음 25 ~ 30 그램의 으깬 블루 베리를 빈 250 밀리리터 플라스크에 넣으십시오. 그런 다음 으깬 블루 베리의 꼭대기를 덮고있는 액체로 플라스크에 액체를 붓습니다.
다음으로, 숙주 Drosophila 스즈키를 기르기 위해 먼저 흡수성 종이 타월 조각을 자르고 중앙에서 비틀어주십시오. 그런 다음 종이 타월의 꼬인 중간 부분을 다이어트 플라스크에 넣으십시오. 수분을 유지하려면 증류수를 사용하여 종이 타월과 식단을 적시십시오.
그런 다음 성적으로 성숙한 성인 파리를 옮기려면 파리 식민지 플라스크의 마개를 조심스럽게 제거하고 다이어트 플라스크에 뒤집습니다. 이 노출 후 일주일 후, 파리가 출현하기 위해 삼 주 동안 환경 챔버에서 파리를 잡으십시오. 숙주 유충을 기생충에 노출시키려면 먼저 성인 파리와 종이 타월을 플라스크에서 꺼내 파리 알과 애벌레를 남겨 둡니다.
유충의 번식 기질 역할을하려면 새로운 흡수성 종이 타월을 접어 플라스크에 넣으십시오. 그런 다음 기생충 G3 Ganaspis brasiliensis의 여섯 명의 여성과 남성 쌍을 플라스크에 넣고 거품 마개 바닥에 얇은 꿀 층을 줄이십시오. 기생충을 수집하고 저장하려면 오일 후에 성인을 제거하십시오.
그런 다음 플라스크를 앞에서 언급 한 조건 하에서 35 일 동안 환경 챔버에 보관하십시오. 성인 말벌의 출현과 함께, 일주일에 세 번 그들을 열망하십시오. 말벌을 잡으려면 먼저 2.5x9.5 평방 센티미터의 초파리 바이알 바닥에 젖었지만 증류수로 포화되지 않은 종이 타월을 놓습니다.
그런 다음 약 60 마리의 말벌을 바이알로 옮기고 출현 날짜를 표시하십시오. 바이알을 환경 챔버에 보관하십시오. 일주일에 두 번, 바이알의 거품 마개 바닥에 얇은 꿀 층을 줄무늬.
첫째, Drosophila 스즈키의 대규모 사육을 준비하여 1, 500 ~ 2, 000 성적으로 성숙한 성인 파리를 50:50 성비로 크고 뜨개질 된 메쉬로 덮인 케이지에 배치하십시오. 그런 다음 물에 적신 면화와 표준 초파리 배지가있는 네 개에서 여섯 개의 페트리 접시가있는 접시를 케이지에 넣으십시오. 매주 두 번, 노출 된 페트리 요리를 신선한 요리로 교체하십시오.
뚜껑이없는 각 페트리 접시를 800 밀리리터 플라스틱 컵에 넣고 컵을 미세한 메쉬로 덮으십시오. 그런 다음 컵을 섭씨 23도 및 75 % 상대 습도에서 12 ~ 15 일 동안 배양하십시오. 부화 후, 새로 부화 한 성인 Drosophila 스즈키를 양육 케이지로 옮깁니다.
다음으로, 블루 베리를 찬물에 한 분 동안 헹구고 표백제로 채워진 분지에 과일을 담그고 3 분 동안 5 %로 희석하여 숙주 유충을 준비하십시오. 그런 다음 아홉 센티미터의 페트리 접시에 씻은 블루 베리를 채 웁니다. 늦은 오후 시간에는 Petri 접시를 양육 케이지에 넣고 밤새 두십시오.
다음날 아침, 페트리 요리를 부드럽게 탭하여 과일에서 파리를 제거하고 사육 케이지에서 과일을 제거하십시오. 한편, 기생 G1 Ganaspis brasiliensis를위한 기생 케이지와 말벌 출현 케이지를 준비하십시오. 두 케이지 모두 하나 이상의 피더를 일시 중단하기 위해 천장 아래에 얇은 끈이 있어야합니다.
각 케이지에서 물이 들어있는 초파리 바이알을 현탁하고 상대 습도에 따라 다섯 일에서 칠일마다 셀룰로오스 아세테이트 플러그를 천장에서 거꾸로 밀봉하십시오. Drosophila 스즈키 케이지에서 감염된 블루 베리를 꺼내 자마자 1, 500에서 2, 000 Ganaspis brasiliensis 말벌과 함께 기생 케이지에 2 ~ 3 일 동안 넣으십시오. 다음으로, 바닥에 흡수성 종이가있는 800 밀리리터 플라스틱 컵에 과일을 모으십시오.
열린 컵을 적어도 28 일 동안 섭씨 21도 및 65 % 상대 습도의 출현 또는 망막 케이지에서 배양하십시오. 배양의 두 번째 및 세 번째 주 동안, 조기 숙주 eclosion에 대한 케이지를 매주 확인하십시오. 연속적인 기생충 수집을 용이하게하려면 성인 파리를 제거하십시오.
배양의 네 번째 주가 끝나면 케이지에 피더와 수원을 제공하십시오. 성인 말벌의 약 10-15 %를 수집하고 오래되고 비생산적인 말벌을 대체하기 위해 기생 케이지로 옮깁니다. eclosion 케이지의 나머지 말벌에서 최대 700 명의 성인을 50:50 성비로 보관하고 물로 채워진 두 밀리리터 튜브가 들어있는 800 밀리리터 플라스틱 컵을 컵으로 보관하고 컵 바닥에 치과용 면봉으로 밀봉하십시오.
뚜렷한 출현 상태가있는 컵을 최대 한 달 동안 환경 챔버에 보관하십시오. 기생충을 운송하려면 약 200 명의 성인을 50 밀리리터 원뿔형 튜브에 넣으십시오. 그런 다음 모든 튜브를 얼음 팩과 함께 절연 운송 용기에 넣으십시오.
이 프로토콜은 실험실의 농업 해충 Drosophila suzuki에 대한 기생충 에이전트 인 G3 Ganaspis brasiliensis의 소규모 사육을 성공적으로 가져 왔습니다. 자손 생산은 기생충 밀도와 노출 시간의 차이에 영향을받지 않았습니다. G1 Ganaspis brasiliensis의 대규모 생성도 달성 될 수 있으며, 숙주 Drosophila 스즈키에 처음 노출 된 후 5 주 후에 생산이 시작됩니다.
8 주에서 22 주까지, 기생충 생산은 그들에게 노출 된 과일의 양에 비례하게되었습니다. 적절한 사육 온도를 유지하고 습도를 조절하며 항상 성인 곤충에게 음식을 제공하는 것이 매우 중요합니다. 이 방법은 말벌의 번식을 극대화하기 위해 숙주와 기생충의 사육 밀도를 최적화하고 대체 숙주에서이 기생충을 사육 할 가능성을 모색함으로써 더욱 개선 될 수 있습니다.
