Mesure de temps de survie dans<em&gt; Brachionus</em&gt; Rotifères: Synchronisation des conditions maternelles

Résumé

Rotifers are microscopic zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies. Here we provide a protocol for powerful and reproducible measurement of survival time in Brachionus rotifers. Synchronization of culture conditions over several generations is of particular importance because maternal condition affects life history of offspring.

Résumé

Rotifers are microscopic cosmopolitan zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies due to their several advantages such as short lifespan, ease of culture, and parthenogenesis that enables clonal culture. However, caution is required when measuring their survival time as it is affected by maternal age and maternal feeding conditions. Here we provide a protocol for powerful and reproducible measurement of the survival time in Brachionus rotifers following a careful synchronization of culture conditions over several generations. Empirically, poor synchronization results in early mortality and a gradual decrease in survival rate, thus resulting in weak statistical power. Indeed, under such conditions, calorie restriction (CR) failed to significantly extend the lifespan of B. plicatilis although CR-induced longevity has been demonstrated with well-synchronized rotifer samples in past and present studies. This protocol is probably useful for other invertebrate models, including the fruitfly Drosophila melanogaster and the nematode Caenorhabditis elegans, because maternal age effects have also been reported in these species.

Introduction

Les rotifères sont microscopiques zooplancton cosmopolite (<1 mm) qui constituent le phylum rotifères ^1. Ils ont un plan de corps simple composé d'environ 1000 cellules somatiques, ainsi qu'un appareil de ciliaire de roue comme caractéristique appelée la couronne, qui est utilisé pour la locomotion et l'alimentation. La plupart des rotifères appartiennent à des classes Monogononta ou Bdelloidea, qui contiennent environ 1.600 et 500 espèces, respectivement ^2. Rotifères Monogonont ont généralement deux phases de la reproduction sexuée et asexuée (parthénogenèse cyclique), tandis que les rotifères bdelloides reproduisent par parthénogen....

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Protocole

1. Préparation des milieux

Remarque: Utilisez la moitié diluée Brujewicz eau de mer artificielle de la salinité de 16,5 ppt (PSU). Autres seawaters artificiels sont aussi fréquemment utilisés pour la culture Brachionus rotifères ^25,26.

1. Ajouter du NaCl 454 mM, 26 mM de _MgCl2, 27 mM _MgSO4, 10 mM de KCl et 10 mM de _CaCl2 à 4,5 litres d' eau distillée (volume final sera de 5 L). Vous pouvez également utiliser l'eau de dilution désionisée au lieu de l'eau distillée. Ajouter CaCl ₂ après dissolution de tous les autres sels.
2. Préparer le M _NaHCO3....

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Résultats

La figure 1 montre les courbes de survie représentatives des populations mal synchronisées (sur deux répétitions). Dans cette expérience, les rotifères étaient soit tous les jours nourris [groupe ad libitum (AL)] ou tous les autres jours (IF groupe). La médiane de survie était de 13 et de 18 jours dans l'AL et si des groupes, respectivement. Bien qu'il soit bien connu que IF prolonge la durée de vie du rotifères, cette expérience n'.......

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Discussion

Le protocole actuel décrit un procédé pour mesurer le temps de survie chez les rotifères Brachionus. L'étape critique est la synchronisation des conditions de rotifères sur plusieurs générations. Lorsque rotifères expérimentaux sont bien synchronisés, une courbe I de survie de type typique est observé avec très peu de mortalité précoce comme rapporté dans plusieurs études antérieures ^18,24,37,38. Les écarts-types de leur temps de survie deviennent donc plus petit par rapport à.......

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matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sodium chloride	Wako	190-13921
Magnesium chloride	Wako	136-03995
Magnesium sulfate	Wako	131-00427
Potassium chloride	Wako	168-22111
Calcium chloride	Wako	035-00455
Sodium bicarbonate	Wako	199-05985
Sodium bromide	Wako	190-01515
Membrane filter (0.45 µm pore size)	Millipore	HAWP04700
Culture plate, 6-well, non-treated	Thomas Scientific	6902D01	Flat bottom
Culture plate, 48-well, non-treated	Thomas Scientific	6902D07	Flat bottom
Tetraselmis, Living	Carolina Biological Supply Company	152610
PRISM 6	GraphPad Software	Version 6.0d