1. le programme d’installation et préparation du matériel

1. Obtenir un lipide total extrait (TLE) en utilisant une méthode d’extraction par solvant (Sonication, Soxhlet ou Accelerated Solvent Extraction (ASE)).
2. Préparer une solution de 2 N KOH à 5 % H₂O dans le méthanol.
   1. KOH et le méthanol peuvent être achetés auprès de détaillants de produits chimiques. Ces produits chimiques doivent être pure et libre d’hydrocarbures.
      1. La masse molaire du KOH est Amou ~ 56, ce qui donne 1 mol de OH^– pour chaque mole de KOH. Ainsi, pour atteindre une concentration de N 2, dissoudre 112 g de KOH à 0,95 L d’eau pure et 0,05 L de méthanol.
      2. Notez que la dissolution de KOH dans l’eau est exothermique et crée une grande quantité de chaleur. Prendre soin d’ajouter les boulettes KOH à l’eau lentement pour éviter une réaction violente.
   2. Dissoudre le 112 g de pastilles de KOH dans 0,95 L d’eau pure sur une plaque de remuer automatique.
   3. Ajouter 0,05 L de méthanol, une fois tous le KOH se dissout pour faciliter la dissolution des biomarqueurs organiques en solution aqueuse.
3. Préparer une solution d’acide chlorhydrique N (HCl) 6 H₂O.
   1. HCl peut être acheté auprès de revendeurs de produits chimiques. Ce produit chimique doit être pure et libre d’hydrocarbures.
   2. HCl est généralement concentré que 13 N. Ainsi, un mélange de 1:1 de HCl et de l’eau pure produit un mélange de 6,5 N de HCl, qui est assez proche de 6 N aux fins de cette expérience.
      1. N’oubliez pas d’ajouter le HCl à l’eau et non l’inverse, que l’ajout d’eau à HCl concentré est exothermique et génère de la chaleur. Cela peut provoquer des HCl éclabousse.
   3. Doucement et lentement verser 100 mL de HCl dans un bécher de 100 mL, eau pure, en agitant le mélange entre les ajouts de HCl.
4. Préparer une solution de 5 % NaCl (sel de table) en H₂O.
   1. NaCl peut être acheté auprès de revendeurs de produits chimiques. Ce produit chimique doit être pure et libre d’hydrocarbures.
   2. Calculer et pèsent la masse de sel nécessaire pour rendre ~ 1 L de solution à 5 % (p/p). 1 L d’eau pèse environ 1 kg ou 1 000 g. Ainsi, 50 g de NaCl dissous dans 950 mL donne une solution à 5 % (50 g + 950 g = 1 000 g ; 50 g / 1 000 g = 0.05 ou 5 %).
   3. Doucement, ajouter 50 g de NaCl à l’eau pure sur une plaque automatique remuer et attendre qu’il se dissoudre.
5. Obtenir les matériaux suivants : 2 propre et brûlé (550 ° c pendant 6 h) flacons en verre de borosilicate 40 mL avec capuchon doublé PTFE ; un réchaud ou blocs de chauffage ; pipettes de verre borosilicaté tible (550 ° c pendant 6 h) et d’ampoules ; bande de pH (acide gamme) ; Hexane (hexane peut être acheté auprès de revendeurs de produits chimiques. Ce produit chimique devrait être Optima Grade ou équivalent).

2. méthodes

1. Commencez avec la TLE séchée (contenant des esters) dans l’un des flacons verre borosilicaté 40 mL.
2. Ajouter environ 10 mL de 2 N KOH à la TLE et le cap.
3. Faire chauffer dans le four ou sur un bloc de chauffage à 60 ° c pendant 2,5 heures Cliver la liaison ester (Figure 3).
4. Retirer l’échantillon du feu et laisser refroidir à température ambiante.
5. Ajouter environ 10 mL de la solution de NaCl 5 % à la TLE (Figure 3). Cela permet de garder l’interface entre la phase aqueuse et organique (à ajouter) de moussage. Boucher et agiter brièvement.
6. Ajoutez 6 N HCl à la TLE salée goutte à goutte jusqu'à pH 2 de protoner la O^– et former le produit final, un acide carboxylique stable (Figure 3, utilisez du papier pH pour tester). Si l’ELT a été coloré, il peut y avoir un changement de couleur coïncidant avec pH 2.
7. Ajouter environ 20 mL d’hexane dans la solution acidifiée, qui est maintenant exempt d’ester. Boucher et agiter vigoureusement pendant 5 s pour extraire les composés organiques de l’eau.
8. Laisser pour reposer jusqu'à ce que les phases aqueuses et organiques complètement séparés. Sels, d’ions, l’eau et n’ayant pas réagi HCl restent dans la phase aqueuse. Composés organiques sont maintenant dans l’hexane.
9. Enlever environ 75 % de l’hexane de surnageant à l’aide d’une pipette et verser dans le flacon de verre de borosilicate autres 40 mL.
10. Répétez de 2,7 à 2,9 deux fois, ajouter environ 10 mL d’hexane chaque fois.
11. Jeter les reste mélange aqueux dans un conteneur à déchets approprié.
12. Étiqueter le flacon contenant l’hexane et exempt d’ester organics « TLE - saponifiée. »