Commencez par utiliser une technique d’étalement avec des ciseaux chirurgicaux pour exposer soigneusement les voies respiratoires du poumon de porc procuré. Tout d’abord, localisez la plus grande voie aérienne qui a généralement un diamètre de deux à quatre centimètres. Ensuite, utilisez une paire de pinces pour palper la longueur des voies respiratoires à une profondeur d’un pouce.
Enfin, tenez les ciseaux chirurgicaux parallèles aux voies respiratoires et insérez les extrémités fermées dans le tissu entourant les voies respiratoires invisibles. Ouvrez doucement les ciseaux chirurgicaux pour séparer la membrane environnante. Sortez les ciseaux et évitez de couper un mouchoir.
Répétez ce processus par intermittence pour continuer à exposer les voies respiratoires. À l’aide des ciseaux chirurgicaux, coupez les voies respiratoires aux points de ramification et disséquez indépendamment l’une ou l’autre branche. Couper les régions des voies respiratoires une fois confiant que les extrémités intactes resteront identifiables et faciles à localiser.
Placez les régions sectionnées des voies respiratoires dans le tube correspondant, la taille des régions sectionnées variant entre un et cinq centimètres de longueur, et la largeur variant en fonction de l’emplacement relatif le long de l’arbre des voies respiratoires. Appliquez doucement une pression sur le système vasculaire pour l’exposer et éloignez-le lentement des voies respiratoires. Laissez le système vasculaire s’étirer légèrement et utilisez des ciseaux chirurgicaux pour le séparer davantage des voies respiratoires.
Évitez d’appliquer trop de pression car cela pourrait déchirer le système vasculaire. Une fois que le point de ramification de l’arbre vasculaire a été exposé, insérez les extrémités fermées des ciseaux chirurgicaux juste en dessous du point de ramification et entre les deux régions vasculaires correspondantes. Ensuite, ouvrez lentement les ciseaux pour écarter les tissus sous-jacents.
Utilisez par intermittence une paire de pinces à épiler pour enlever le tissu écarté et tout autre tissu entourant directement le système vasculaire. Couper le système vasculaire à un point de ramification lorsqu’il couvre des régions des voies respiratoires ou devient encombrant à toute étape de dissection. Par la suite, disséquez l’une ou l’autre branche indépendamment.
Confirmer que les deux extrémités du système vasculaire restent identifiables et facilement localisées pour une dissection ultérieure. Puis coupez les régions du système vasculaire. Pour exciser le tissu alvéolaire, localisez une région du tissu qui n’est pas à proximité des voies respiratoires ou du système vasculaire.
Pincez une petite région du tissu qui semble être dépourvue de système vasculaire ou de voies respiratoires et déchirez le tissu pincé du poumon. Le tissu alvéolaire est largement présent dans les poumons et doit être enlevé tout au long du curage. Observez la région du tissu prélevé et confirmez s’il s’agit ou non de tissu alvéolaire.
Cette procédure a été appliquée à un modèle pulmonaire humain. Une analyse par spectrométrie de masse des tissus excisés a indiqué que la composition de la MEC varie entre les différentes régions des poumons décellularisés, y compris la MEC des poumons entiers, la MEC enrichie alvéolaire, la MEC des voies respiratoires et la MCE vasculaire. Dans les poumons décellularisés obtenus de patients sans antécédents de maladie pulmonaire, les protéines associées à la membrane basale ont augmenté dans l’ECM enrichie alvéolaire.
Dans le même temps, l’ECM des voies respiratoires a été enrichie en protéine ECM associée au cartilage telle que l’aggrecan. L’ECM vasculaire a été améliorée avec de la fibronectine et d’autres protéines ECM solubles associées aux vaisseaux sanguins.
