Commencez par configurer le poste de travail d’automatisation. Intégrez un dispositif d’éclairage de microplaque, tel qu’une optoPlate, qui permet un accès pratique au bras de préhension du robot. Ensuite, traitez une feuille de calcul avec le script MATLAB disponible pour programmer l’optoPlate.
Exécutez le programme de stimulation lumineuse en clignotant sur l’optoPlate. Pour programmer le robot, dépannez toute erreur potentielle afin de vous assurer du bon fonctionnement du support et des définitions LabWare. Faites passer une plaque vide dans la boucle de script plusieurs fois pour vérifier la capacité du bras de préhension du robot à saisir et à placer la plaque avec précision.
Ensuite, sélectionnez les colonies dans les plaques pour configurer la plaque d’échantillonnage. Ensuite, inoculez-les dans trois millilitres de milieu synthétique complet dans des tubes de culture en verre. Incubez ces cultures pendant la nuit à 30 degrés Celsius sur un tambour à rouleaux dans l’obscurité.
Dans une cuvette, diluer 200 microlitres de culture dans un millilitre de milieu synthétique complet. Enregistrez sa densité optique à l’aide d’un spectrophotomètre. Ensuite, diluez chaque culture de nuit à une densité optique de 0,1 dans des tubes de culture en verre.
Pipeter les cultures diluées dans une plaque à 96 puits. Inclure les puits avec des milieux vides et des cellules non fluorescentes comme témoins négatifs. Incuber la plaque d’échantillon dans un incubateur à agitation à 30 degrés Celsius pendant cinq heures.
Maintenant, placez la plaque d’échantillon sur le secoueur de chauffage. Lancez le script d’automatisation en cliquant sur Exécuter. Une fois la mesure initiale enregistrée sur le lecteur de plaques, lancez le programme de stimulation lumineuse en allumant la multiprise de l’appareil d’éclairage.
Les valeurs de fluorescence au fil du temps pour une souche optogénétique ont montré que le niveau de fluorescence global était proportionnel au facteur de marche de la stimulation lumineuse. Les valeurs de densité optique correspondantes étaient cohérentes, ce qui suggère que la croissance n’a pas été affectée par des conditions d’éclairage variables. Différentes souches optogénétiques ont utilisé des réponses différentes aux variations de l’intensité des impulsions lumineuses, de la période et du cycle de service.
