Pour commencer, placez les morceaux d’accise des échantillons placentaires dans PBS. Jetez la plaque choriale, la caduque maternelle et tous les infarctus visibles du spécimen. Disséquer le spécimen de tissu restant en explants villeux d’un diamètre de section transversale d’environ 0,5 centimètre.
Transférez les explants dans une boîte de Pétri remplie de PBS frais. À l’aide d’une pince, secouez chaque explant dans le PBS pour enlever tout le sang. Sous une hotte stérile, utilisez des verrous Luer pour connecter cinq chambres au flacon-réservoir.
Retournez les chambres à l’envers et retirez le fond. Maintenant, utilisez une pince pour placer les plaques métalliques au centre dans les parties supérieures des chambres avec les goupilles pointant vers le haut. Remplissez la moitié des chambres avec un millilitre de milieu de culture préchauffé.
Ajoutez 20 millilitres supplémentaires de milieu dans le réservoir. À l’aide d’une pince, placez délicatement l’explant villeux sur les aiguilles de la plaque métallique dans la chambre. Placez quatre explants dans une seule chambre.
Rattachez le fond des chambres pour le fermer. Ensuite, connectez le tube de la pompe à la pompe pour connecter le circuit d’écoulement avec la pompe péristaltique à l’intérieur du bioréacteur. Fixez-le à la quatrième étape.
Dans le menu Pompes, choisissez le mode Manuel. Ajustez la vitesse de la pompe à un millilitre par minute et cliquez sur Exécuter pour commencer à pomper. Tenez les chambres à un angle pendant le remplissage pour assurer un remplissage complet.
Lorsque le processus de remplissage est terminé, inversez à nouveau la chambre. Confirmez que les chambres sont sécurisées et fermez les deux couvercles du bioréacteur. Une fois l’incubation tissulaire terminée, cliquez sur Abandonner pour arrêter la pompe.
À la fois, ouvrez deux couvercles de bioréacteur et une chambre d’écoulement. Utilisez une pince pour retirer soigneusement les explants de la plaque métallique pour une analyse plus approfondie. Les explants colorés immunohistochimiquement ont montré une présentation visuelle bien structurée et organisée du cytosquelette dans les tissus frais et en culture en flux.
Au fil du temps, l’agrégation de microfilaments a été de plus en plus observée dans les explants statiques, ce qui signifie une dégradation de la structure du cytosquelette. La diminution de l’intégrité des tissus au cours du temps de culture a été confirmée par l’hématoxyline et l’éosine. Les tissus frais présentaient un stroma dense et serré.
Après 48 heures de culture en flux, des fragments partiellement détachés du syncytiotrophoblaste ont été observés. L’intégrité des tissus n’a pas été préservée de manière adéquate après 24 heures dans des conditions de culture statiques, qui se sont encore détériorées après 48 heures. La coloration des cellules endothéliales a montré des cellules distinctement organisées dans le tissu frais.
L’intégrité morphologique a été largement maintenue même après 48 heures dans les cultures en flux. L’explant statique, cependant, présentait un effondrement partiel même après 24 heures, qui s’est encore détérioré après 48 heures.
