Pour commencer, incubez des œufs de poule fécondés dans un incubateur humidifié. Ensuite, préparez deux fois une solution saline CMF avec un tampon EDTA à 0,25 %. Ensuite, retirez la peau des embryons de poulet dans une solution HBSS et incubez-les dans une solution CMF-EDTA en deux fois sur de la glace pendant 15 à 20 minutes.
À l’aide d’une pince d’horloger, séparez soigneusement l’épithélium et le mésenchyme. Transférez ensuite l’épithélium et le mésenchyme isolés dans une seule boîte propre contenant du HBSS. Pour la recombinaison, placez le mésenchyme sur une boîte de Pétri contenant du HBSS, puis placez l’épithélium dessus, en l’alignant le long de l’axe antéro-postérieur du mésenchyme.
Vous pouvez également faire pivoter l’épithélium de 90 degrés par rapport à l’axe mésenchymateux antérieur et postérieur. Ensuite, transférez les peaux recombinées dans les inserts de culture dans six boîtes de culture bien établies. Retirez tout excès de HBSS entourant la peau recombinée.
Après avoir ajouté du DMEM contenant 10 % de FBS dans le puits extérieur de l’insert, pipetez une fine couche de DMEM dans la chambre d’insertion, en veillant à ce que l’explant reste semi-hydraté. Enfin, placez les recombinants cutanés dans un incubateur à 37 degrés dans un environnement de 5% de dioxyde de carbone et 95% d’air. Surveillez les changements phénotypiques dans les phases initiales du développement de la peau à l’aide de photographies en accéléré, avec un microscope à dissection monté.
De nouvelles placodes sont apparues peu de temps après la recombinaison et se sont transformées en courts bourgeons de plumes deux jours après la recombinaison. De longs bourgeons de plumes se sont développés en quatre jours. Lorsque l’épithélium a été tourné de 90 degrés, l’orientation des nouveaux bourgeons a été déterminée par l’épithélium.
