Cette méthode permet aux chercheurs d’évaluer les interactions tissulaires entre le cerveau antérieur basal et le visage. Le principal avantage de cette technique est qu’elle isole le cerveau antérieur basal pour l’évaluation et empêche la contamination par les cellules de la crête neurale, ce qui confondrait l’analyse. La partie difficile de cette technique est l’ablation du cerveau antérieur de l’hôte et son remplacement par le tissu donneur.
Diane Hu, chercheuse scientifique du laboratoire du Dr Ralph Marcucio, fera la démonstration de la procédure. Pour commencer, préparez des supports DMEM avec du rouge neutre, une pipette de transfert en verre et du tungstène affûté. À l’aide d’une seringue de 10 millilitres et d’une aiguille de calibre 18, retirez 0,5 millilitre d’albumine de l’extrémité pointue de la coquille d’œuf.
Faites un petit trou sur le dessus de la coquille à l’aide de la pointe des ciseaux. Ensuite, placez un morceau de ruban adhésif sur le trou et coupez une ouverture circulaire pour exposer l’embryon. Colorer l’embryon avec du rouge neutre.
Prélever des greffes de tissus du côté gauche du cerveau antérieur basal des embryons de stade sept ou huit. Utilisez des aiguilles de tungstène aiguisées incurvées pour inciser doucement un morceau du cerveau antérieur. Afin de ne pas inclure l’endoderme sous-jacent, glissez l’aiguille sous le cerveau antérieur et parallèlement à l’axe du tube neural.
Prélevez le greffon de l’embryon donneur à l’aide de la pipette de transfert en verre et transférez-le dans du DMEM contenant du rouge neutre pendant deux minutes pour le colorer. Ensuite, placez le greffon coloré dans le DMEM qui ne contient pas de rouge neutre jusqu’à ce qu’il soit prêt pour la greffe. Incuber les œufs fécondés du poulet blanc Livourne à 37 degrés Celsius dans une chambre humidifiée jusqu’aux stades sept à huit de Hamburger-Hamilton.
Exposer les embryons comme démontré précédemment. À l’aide d’aiguilles de tungstène aiguisées, préparer le site du greffon en coupant puis en retirant un morceau de cerveau antérieur basal de 0,3 par 0,2 millimètre pour accueillir le greffon. Évitez une perturbation excessive de l’endoderme sous-jacent, qui sera évidente lorsque les granules vitellins commenceront à couler à travers toute déchirure qui est faite.
Après avoir transféré le greffon à l’hôte, positionner le greffon pour remplacer le cerveau antérieur basal extirpé de l’hôte. Placez du ruban adhésif hermétiquement sur le trou et remettez les embryons dans l’incubateur à 37 degrés Celsius jusqu’à ce qu’ils soient prêts pour l’analyse. Initialement, les chimères ont été créées en transplantant des tissus de caille dans des embryons de poussins.
À l’aide de l’anticorps QCPN, les cellules de caille ont été visualisées et distinguées des tissus hôtes. Le système caille-poussin a confirmé que toute la greffe était composée uniquement de tissu neural et n’était pas contaminée par d’autres types de cellules. La transplantation de tissus de caille en embryons de canard a conduit à des chimères gravement déformées en raison d’un cerveau de caille en développement plus rapide.
Par conséquent, la transplantation de tissus de canard dans des embryons de poulet a été effectuée. Les chimères canard-poussin qui en résultent suggèrent que le cerveau participe à la régulation de la morphologie. L’hybridation C2 de montagne entière a été utilisée pour évaluer l’expression du hérisson Sonic dans les chimères.
Semblable à la morphologie, l’expression du hérisson sonique du côté canard de la chimère ressemblait davantage à celle d’un canard. La préparation du site hôte demande de la pratique. Un grand nombre d’embryons ne survivent pas, de sorte que la création d’un grand nombre de chimères peut aider à garantir des échantillons appropriés pour l’analyse.
Cette méthode a permis d’évaluer comment les signaux du cerveau façonnent le domaine d’expression du hérisson Sonic dans la zone ectodermique frontonasale.
