Pour commencer, retirez de l’incubateur la plaque de culture Transwell contenant la monocouche d’entéroïde iléal bovin 2D. Laissez la plaque s’équilibrer à température ambiante dans l’enceinte de sécurité biologique pendant quelques minutes. Assurez-vous que les électrodes STX2 ont été préconditionnées et que le voltomètre est calibré à 1000 ohms, conformément aux instructions du fabricant.
Insérez l’extrémité la plus longue de la sonde dans le compartiment basolatéral et l’extrémité la plus courte dans le compartiment apical de la culture de cellules épithéliales Transwell. Une fois l’installation stabilisée, effectuez trois mesures de résistance électrique transépithéliale par insert Transwell, y compris l’insert dépourvu de cellules. Calculez la moyenne des mesures pour chaque insert respectif.
Soustrayez la mesure moyenne des puits vides de l’expérimental, puis multipliez-la par la surface de l’insert pour déterminer la résistance de la barrière épithéliale. Des monocouches 2D confluentes ont été observées en moins d’une semaine de culture. Les mesures TEER ont montré une augmentation constante des valeurs sur sept jours avant de diminuer au jour 12.
La microscopie confocale de la monocouche 2D colorée démontre la localisation de la coloration nucléaire DAPI, de l’E-cadhérine et de la F-actine. Les cellules semblent être différenciées avec des cellules entéroendocrines, des cellules de Paneth et des lignées de cellules entérocytaires. La stimulation apicale de la monocouche a entraîné une augmentation de la production de cytokines.
