Extraction d’ADN à partir d’échantillons de mouches nécrophiles

Pour commencer, placez les échantillons de thorax de mouche coupée dans un tube à centrifuger de deux millilitres. Ajoutez 180 microlitres de tampon de lyse tissulaire dans le tube, suivi de 20 microlitres de Proteinase K.Vortex à fond à 3 000 tr/min pendant 10 secondes et incubez à 56 degrés Celsius jusqu’à ce que les tissus soient lysés. Après l’incubation, agitez à nouveau les échantillons pendant 15 secondes.

Ajouter 200 microlitres de tampon de lyse, et bien mélanger par vortex. Ajoutez ensuite 200 microlitres d’éthanol et vortex à nouveau pendant 15 secondes. Ensuite, placez une colonne d’absorption d’ADN dans un tube de collecte de deux millilitres et pipetez le mélange dans la colonne.

Centrifuger à 6 000 G pendant une minute. Jetez l’écoulement et le tube de collecte. Placez la colonne dans un nouveau tube et ajoutez 500 microlitres de tampon d’élimination des protéines.

Centrifugez pendant une minute et jetez le flux. Transférez la colonne dans un nouveau tube. Ajouter 500 microlitres de tampon de dessalement et centrifuger à 20 000 G pendant trois minutes pour sécher la membrane.

Ajoutez ensuite 100 microlitres de tampon d’élution d’ADN sur la membrane. Incuber à température ambiante pendant une minute, puis centrifuger à 6 000 G pendant une minute pour éluer l’ADN. Conservez les échantillons d’ADN au besoin.