Pour commencer, extraire l’ADN d’échantillons de tissus formels et fixés inclus dans la paraffine. Ensuite, centrifugez la poudre sèche d’amorce à 5, 400 à 8, 400 G pendant deux à trois minutes, et ajoutez le volume approprié d’eau double distillée le long de la paroi du tube d’amorce. Ajoutez cinq microlitres de l’amorce avant et de l’amorce inverse à 50 microlitres d’amorce de type sauvage et 40 microlitres d’eau distillée doublement.
Après avoir mélangé deux à trois fois, agitez le tube et centrifugez-le brièvement. Pour la procédure de réaction en chaîne par polymérase ou PCR, ajoutez les réactifs requis dans chaque tube de réaction. Vortex pour mélanger et centrifuger brièvement.
Placez le tube PCR dans l’instrument PCR pour l’amplification. Définissez le programme de cycle thermique et exécutez-le. Effectuez ensuite une électrophorèse sur gel sur le produit PCR à l’aide d’Agarose à 2 % pour vérifier si le fragment cible est amplifié.
Pour purifier les produits PCR, centrifugez brièvement le purificase un et le purificase deux qui ont été amenés à température ambiante et préparez le mélange de réaction de purification. Placez le tube PCR dans l’instrument PCR et faites fonctionner la machine avec les paramètres prédéfinis.
