Pour commencer, placez du collagène, de l’hydroxyde de sodium, de l’eau ultrapure stérile, 10 fois PBS, un micro tube à centrifuger, de l’acide hyaluronique méthacrylé et le photo-initiateur sur de la glace. Placez ensuite les inserts de culture tissulaire dans la plaque et étiquetez-la. Pour préparer une solution de collagène de trois milligrammes par millilitre, combinez du collagène à haute concentration, un hydroxyde de sodium normal, de l’eau ultrapure et 10 fois du PBS.
Ajoutez des composants dans le microtube à centrifuger et maintenez la pointe de la pipette immergée lors du mélange pour éviter la formation de bulles. Ensuite, centrifugez les cellules à 200 G pendant cinq minutes à température ambiante. Ensuite, retirez délicatement l’excès de milieu du haut de chaque solution d’état cellulaire, en laissant le volume de milieu requis pour l’état.
Placez ces solutions sur de la glace. Ajoutez le volume calculé de solution de collagène à chaque solution d’état cellulaire. Ensuite, ajoutez le volume calculé de 1 % d’acide hyaluronique méthacrylé, suivi de 17 milligrammes par millilitre de LAP dans chaque solution d’état cellulaire.
Mélangez chaque tube d’état un par un tout en gardant la pointe de la pipette immergée pour éviter la formation de bulles et ajoutez 100 à 150 microlitres à chaque insert de culture tissulaire. Allumez maintenant la lampe ultraviolette de 385 nanomètres à courant constant. Pour photo-relier chaque gel, exposez chaque puits à la lumière ultraviolette pendant 45 secondes, un à la fois.
Placez ensuite l’assiette à 37 degrés Celsius pendant 30 à 45 minutes pour relier le collagène. À l’aide d’un milieu astral basal avec 0,5 % et deux volume par volume et 1 % volume par volume B27 sans vitamine A, appliquez la tête de pression de fluide sur les gels. Ajoutez du milieu à la plaque de puits et des inserts de culture tissulaire pour un débit net zéro.
Placez l’assiette à 37 degrés Celsius, 5 % de dioxyde de carbone pendant au moins 18 heures ou jusqu’à cinq jours.
