Pour commencer, procurez-vous les bandelettes rétiniennes de souris et lavez-les cinq fois dans un tampon de cacodylate de sodium de 0,1 molaire pendant 15 minutes. Ensuite, incubez les bandelettes avec une solution de ferrocyanure de potassium et de tétroxyde d’osmium dans l’obscurité sur de la glace pendant 1,5 heure. Lavez les bandes trois fois dans de l’eau distillée double et incubez-les avec 1% de thio-carbo-hydrazide.
Après le rinçage à l’eau distillée double, traitez séquentiellement les bandelettes rétiniennes avec du tétroxyde d’osmium, de l’acétate d’uranyle et du nitrate de plomb. Déshydratez les bandelettes rétiniennes avec des concentrations croissantes d’éthanol. Ensuite, traitez les bandelettes rétiniennes avec une solution contenant à parts égales de l’éthanol et de l’acétone pendant 20 minutes, suivie de deux lavages à l’acétone pendant 20 minutes chacun.
Incuber séquentiellement les bandes rétiniennes dans des mélanges de résine d’acétone dans l’obscurité et à température ambiante. Infiltrer les bandelettes rétiniennes avec de la résine pure pendant 24 heures à 45 degrés Celsius, puis de la résine fraîche pendant 48 heures à 60 degrés Celsius. La microscopie électronique à balayage à faisceau d’ions focalisés des terminaisons photorétiniennes à l’aide de cette méthode préserve la structure de la membrane cellulaire et les contours des vésicules plus clairement que la méthode traditionnelle à double fixation.
