Pour commencer, mélangez 0,1 molaire d’acétate de sodium et 0,1 molaire d’acide acétique dans de l’eau désionisée à pH 4,5. Préparez ensuite un tampon de sulfate de sodium de 100 millimolaires dans de l’eau désionisée à température ambiante. Pesez le chitosane commercialisé pour préparer une solution à 0,02 % en poids par volume et dissolvez-le dans le tampon préparé de 100 millimolaires d’acétate de sodium.
Dissoudre ensuite 20 microgrammes d’ARN double brin ou d’ARNdb dans 50 microlitres d’eau sans nucléases. Ajoutez cette solution à 50 microlitres de tampon de sulfate de sodium pour obtenir une solution d’ARNdb de 100 microlitres. Ensuite, ajoutez 100 microlitres de la solution de chitosane préparée à 100 microlitres chacun de la solution d’ARNdb et 50 millimolaires de sulfate de sodium.
Après le mélange, chauffez les solutions à 55 degrés Celsius pendant une minute. Agitez immédiatement le mélange à grande vitesse pendant 30 secondes pour faciliter la formation de nanoparticules. Centrifuger le mélange à 13 000 G à température ambiante pendant 10 minutes pour obtenir une pastille blanche.
Transférez le surnageant dans un tube frais de 1,5 millilitre et laissez sécher la pastille à l’air libre à température ambiante pendant 10 minutes. À l’aide d’un spectrophotomètre de microvolume, déterminez la concentration d’ARNdb dans le surnageant. Pour calculer le pourcentage d’ARNdb encapsulé, divisez la quantité restante dans le surnageant par la quantité initiale d’ARNdb.
