Merci à Jessica Ottmar des suggestions protocole et contributions à des données représentatives. Un merci spécial à Sabrina Blackledge, Lauren Kohoutek et Kerisa Shelton pour démontrer ce protocole.

1. Set Up <ol><li> Toutes les recherches doivent être approuvés par l&#39;Institutional Review Board approprié ou humaine comité d&#39;examen des sujets avant la collecte des données. </li><li> Idéalement, deux chambres devraient être disponibles pour effectuer les TSST. Une salle d&#39;attente confortable devrait être disponible aux participants avant le début du TSST et pendant les périodes de récupération. Une salle d&#39;entrevue distinct doit être utilisé lors de la préparation de discours, la performance de la parole et des portions de mathématiques de l&#39;TSST d&#39;introduire la nouveauté et uncontrolability. </li><li> Disposer la salle d&#39;entrevue afin que le participant devra faire face à des intervieweurs confédérées et vidéo de position ou de l&#39;équipement d&#39;enregistrement audio dans le champ visuel du participant. Sarraus devraient être disponibles pour les enquêteurs à porter pendant la TSST pour augmenter le stress durant la TSST. Demandez aux enquêteurs de maintenir un contact visuel avec les participants et s&#39;abstenir de faire des expressions faciales émotionnelles pendant la TSST. </li><li> Examiner attentivement èmequestion de recherche électronique (s) lors de la sélection des mesures dépendantes. Directives pour l&#39;analyse et la publication de diverses mesures de la réponse au stress sont fournies par plusieurs sources (lignes directrices pour la publication et l&#39;analyse des mesures psychophysiologiques sont fournis par la Société pour la recherche psychophysiologique: <a href="http://www.sprweb.org/journal/index.cfm#guidelines" target="_blank">http://www.sprweb.org/journal/index. CFM # guidelines</a> ). 5 Consultation de ces ressources lors de la conception d&#39;expériences est recommandée. </li><li> Mettre en place tous les équipements nécessaires à l&#39;enregistrement réactions physiologiques, psychologiques ou endocriniennes de la TSST. Cet équipement peut comprendre (mais n&#39;est pas limité à) des électrodes et équipements électroniques et / ou un logiciel pour enregistrer le rythme cardiaque, la réactivité cardiovasculaire, conductance de la peau ou la réponse, clin d&#39;œil, la contraction musculaire / ton, le rythme respiratoire, le papier et un crayon ou des versions électroniques de instruments psychologiques tels que l&#39;anxiété Trait d&#39;État inventory; 6 tubes et matériaux autre collection d&#39;échantillons d&#39;urine, de sang ou de salive;. ou de l&#39;équipement d&#39;enregistrement vidéo Pour cette démonstration, nous allons utiliser trois conducteurs électrocardiogramme (ECG) électrodes pour mesurer la fréquence cardiaque pendant la TSST, et l&#39;administration répétée de la Trait Anxiety Inventory Etat pour mesurer la réaction psychologique avant et après le stress. Nous utilisons un système d&#39;enregistrement de base destinés à mesurer les réponses physiologiques (système BIOPAC MP36) pour enregistrer le rythme cardiaque. </li><li> Si des échantillons de sang (plutôt que de la salive) seront collectés pendant l&#39;expérience, les efforts pour minimiser la douleur et la détresse lors de la collecte doit être faite. Procédures de collecte de sang peut introduire d&#39;autres stress physique ou psychologique, la réponse à la confusion TSST. </li><li> Lorsque le participant arrive, les accueillir au sein du laboratoire. Obtenir le consentement éclairé et le siège du participant confortablement. </li><li> Collecter des informations démographiques, les renseignements de dépistage ou additiomesures arrivée NAL qui sont requises par votre expérience. Vérifiez que le participant n&#39;a pas consommé la nourriture ou des boissons (autres que l&#39;eau) dans la dernière heure, si la collecte de mesures de cortisol. Une courte période de jeûne est recommandée si vous serez la collecte d&#39;échantillons de salive pour analyse. Les changements de pH associées à des aliments acides ou de boire ou de la contamination visible peuvent interférer avec la mesure précise de marqueurs salivaires. Le dépistage toxicologique de l&#39;urine peut être nécessaire si des mesures d&#39;intérêt peuvent être contaminés par des médicaments ou d&#39;autres métabolites. Informations sur les facteurs qui peuvent affecter la réponse au stress (médicaments par exemple, la maladie, le sommeil, les récents événements stressants, la phobie sociale) devrait également être envisagée lorsque les participants de dépistage. </li></ol> 2. Pré-stress Mesures <ol><li> Demandez au participant d&#39;attendre confortablement pendant 45 minutes dans la salle d&#39;attente. Vous pouvez choisir de fournir aux participants des documents à lire, comme les magazines contenant emonellement neutre contenu, ou une autre activité émotionnellement neutre pendant cette période. </li><li> Après la période de 45 minutes d&#39;attente, d&#39;administrer l&#39;inventaire d&#39;anxiété Trait d&#39;État pour évaluer l&#39;anxiété pré-contrainte. 6 Alternativement, d&#39;autres instruments qui sont conçus pour évaluer les changements d&#39;état de stress, d&#39;anxiété ou de relaxation peut être administré (par exemple une échelle visuelle analogique). </li><li> Recueillir un «pré-stress&quot; échantillon de salive. Demandez aux participants de se rincer la bouche avec de l&#39;eau. Donnez au participant une section 5-10 cm de paille et d&#39;un nettoyage, un flacon jetable en polypropylène 2,0 ml. Demandez aux participants de pencher la tête vers l&#39;avant pour permettre à la salive à la piscine sur le plancher de la bouche puis passer la salive dans la paille dans le flacon. Prélever environ de 1,5 à 2,0 ml de salive par le participant. Alternativement, la salive peuvent être recueillies en utilisant la mèche absorbante dentaire (ou matériau similaire) et d&#39;instruire les participants à mâcher ou de saturer le matériau avec de la salive. Si possible, quitter la salle pour fournir aux participants des renseignements personnels. Étiquette et de stocker tous les échantillons de salive à -20 ° C dès que possible. </li><li> Record 5 minutes de pré-contrainte des mesures physiologiques. </li></ol> 3. La TSST <ol><li> Si vous comptez utiliser une salle d&#39;entrevue séparées (pour augmenter les effets du stress de la TSST), amener le participant de la salle d&#39;attente dans la salle d&#39;entrevue. </li><li> Pour commencer la période de préparation de TSST discours, lu le script suivant pour le participant: «C&#39;est la partie préparation de discours de la tâche, vous êtes mentalement préparer un discours de cinq minutes décrivant pourquoi vous seriez un bon candidat pour votre emploi idéal. Votre discours sera filmé et examinées par un panel de juges formés à parler en public. Vous avez dix minutes pour préparer et votre temps commence maintenant. &quot; </li><li> Enregistrement des mesures physiologiques pendant la période de 10 minutes le discours de préparation. Réglez une minuterie numérique de 10 minutes et quitter la pièce. </li&gt; <li> Après 10 minutes, retourner à la salle vêtu d&#39;un sarrau de laboratoire. Lire le script suivant pour le participant: «C&#39;est la partie discours de la tâche que vous pour prononcer un discours décrivant pourquoi vous seriez un bon candidat pour votre emploi idéal Vous devriez en parler pour l&#39;ensemble de la période de cinq minutes... Votre temps commence maintenant. &quot; La caméra vidéo prop doit être activé présent, pour augmenter évaluative / performances du stress. </li><li> Enregistrement des mesures physiologiques pendant la période de cinq minutes le discours de performance. Si le participant cesse de parler pendant le discours, lui permettre de rester silencieux pendant 20 secondes. Si il ou elle ne reprend pas parler, prompte au participant de continuer à parler en leur ordonnant: «Vous avez encore le temps restant.&quot; </li><li> A la fin de la période de cinq minutes le discours des performances, de lire le script suivant pour le participant: «Pendant la partie des mathématiques de cinq minutes finales de cette tâche vous sera demandé de manière séquentielle soustraire le nombre 13 de 1022 Vous verbale.Ly rapport de vos réponses à haute voix, et être invité à recommencer à partir de 1022, si une erreur est faite. . Votre temps commence maintenant &quot;Si le participant fait une erreur, posez-leur avec:&quot; Ce n&#39;est pas correct, s&#39;il vous plaît recommencer à partir de 1022 «Définir une minuterie numérique pendant 5 minutes.. </li><li> Enregistrement des mesures physiologiques pendant la période de 5 minutes maths performances. </li><li> A la fin de la période de rendement en mathématiques de l&#39;TSST, de recueillir un «post-stress&quot; échantillon de salive. </li><li> Administrer de stress post-Trait Anxiety Inventory Etat. </li></ol> 4. Mesures de réveil post-stress <ol><li> Retour aux participants de la salle d&#39;attente d&#39;origine. Pendant la période de récupération d&#39;abord, demander au participant d&#39;attendre confortablement pendant 20 minutes. Réglez une minuterie numérique de 20 minutes et quitter la salle. </li><li> Retourner à la salle d&#39;attente après 20 minutes et recueillir une «reprise 1&quot; échantillon de salive. </li><li> Durant la seconde période de récupération, d&#39;instruire le participant à nouveau attendre confortablement pour 20 minutes. Réglez une minuterie numérique de 20 minutes et quitter la salle. </li><li> Retourner à la salle d&#39;attente après 20 minutes et recueillir une «reprise 2&quot; échantillon de salive. </li><li> Demandez au participant de remplir le «rétablissement» Trait Anxiety Inventory Etat. </li><li> Compte rendu du participant quant à la vraie nature de l&#39;expérience. Informer le participant que leur performance n&#39;a pas été enregistré et qu&#39;aucune analyse de leurs discours ou les performances en mathématiques seront menées. Expliquez aux participants que les tâches qui leur ont été présentés étaient excessivement difficiles et ne pas réfléchir à l&#39;aptitude du participant ou de la capacité. </li></ol> 5. Analyse des données <ol><li> Pour analyser les mesures psychologiques, le score de chaque Etat Trait Anxiety Inventory de la pré-contrainte, de post-stress et le temps de récupération des points 6. </li><li> Pour analyser les mesures physiologiques, calculer un score cardiaque moyenne de taux pour chacune des cinq minutes &quot;stress pré», «préparation de discours», «la performance la parole&quot; et &quot;mATH &quot;périodes de l&#39;TSST. Alternativement, calculer des scores moyens pour chaque minute de la fréquence cardiaque ou de TSST mesure en temps discret des points lors de la TSST. </li><li> Pour analyser les mesures neuroendocrines, des échantillons d&#39;essai pour la concentration d&#39;hormones salivaires utilisant des kits EIA disponibles commercialement. </li></ol> 6. Facultatif: Renseignements supplémentaires salivaires de cortisol protocole d&#39;essai (reproduit à partir de Salimetrics cortisol salivaire insérez kit de dosage) <ol><li> Amener tous les réactifs salivaires kit de dosage de la température ambiante. </li><li> Préparer le tampon de lavage selon les instructions du kit. </li><li> Déterminer disposition de la plaque et la pipette de 25 uL de normes et de contrôles dans les puits appropriés, en double exemplaire. </li><li> Dégel des échantillons de salive, vortex et centrifuger à 1500 XG (@ 3000 RPM) pendant 15 minutes. </li><li> Pipeter 25 uL de liquide clair à partir d&#39;échantillons centrifugés dans les puits appropriés de la plaque (en double). </li><li> Préparer conjugué enzyme et la pipette 200 ul dans tous les puits. </li&gt; <li> Mélanger la plaque pendant 5 minutes à 500 rpm et incuber pendant une 55 minutes supplémentaires. </li><li> Lavez et épongez la plaque 4 fois avec un tampon de lavage. </li><li> Ajouter 200 uL tétraméthylbenzidine (TMB) à chaque puits en utilisant une pipette multicanaux. </li><li> Mélanger la plaque pendant 5 minutes à 500 rpm et incuber dans l&#39;obscurité pendant 25 minutes supplémentaires. </li><li> Ajouter 50 uL de solution d&#39;arrêt dans chaque puits et mélanger pendant 3 minutes à 500 rpm pour arrêter les réactions. </li><li> Essuyez la plaque de fond propre et lire la plaque dans un lecteur de plaque à 450 nm dans les 10 minutes de l&#39;ajout de solution d&#39;arrêt. </li><li> Pour calculer la concentration de cortisol, de calculer la densité optique moyenne pour tous les puits en double. Soustraire la densité optique moyenne des puits de fixation non spécifique de la densité optique moyenne du zéro, standard, de contrôle et des puits d&#39;échantillon. </li><li> Calculer le pour cent liée (B / Bo) pour chaque norme, le contrôle et l&#39;échantillon en divisant la densité optique moyenne de ces puits (B) par la moyennela densité optique de l&#39;âge de puits zéro (Bo). Déterminer la concentration des contrôles et des échantillons par interpolation en utilisant un logiciel capable de logistique. </li></ol> 7. Les résultats représentatifs: Les données présentées ici représentatives est compilé à partir d&#39;un examen de la littérature et de deux études qui ont été menées dans notre laboratoire de l&#39;après-midi avec des participants adultes sains de sexe masculin. Ces données sont destinées à environ représentent les résultats qui pourraient être trouvés en utilisant le protocole présenté dans cet article. Ce protocole TSST (figure 1) induit une augmentation de l&#39;anxiété auto-déclaré (tel que mesuré par l&#39;inventaire d&#39;anxiété Trait d&#39;État; figure 2), la fréquence cardiaque (figure 3), et les concentrations de cortisol salivaire (figure 4). Le protocole expérimental illustre la figure 1 est destiné à fournir un exemple de comment les différentes mesures pourraient être faites lors d&#39;une session de collecte de données avec la TSST. Le calendrier des MESURESts et l&#39;inclusion des différentes mesures sera dicté par la question de recherche spécifique. Si vous utilisez une intervention qui vise à réduire l&#39;anxiété et / ou la réponse au stress, augmente émoussé ou atténué dans ces mesures sont prévues. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3238/3238fig1.jpg" /> Figure 1. Protocole expérimental Remarque: Test de stress social Trèves (TSST); Trait Anxiety Inventory Etat (STAI); période de 5 minutes de stress pré (PS); période de 10 minutes de stress anticipatoire (préparation de la parole) (AS); période de discours de 5 minutes. (S); période de 5 minutes Math (M). <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3238/3238fig2.jpg" /> Figure 2. Représentant les scores d&#39;anxiété état. Remarque: score d&#39;anxiété Etat calculée à partir de 20 Iten mesure de l&#39;anxiété état ​​de l&#39;inventaire d&#39;anxiété Etat Trait (STAI) les scores reflètent Représentant données recueillies dans notre laboratoire et publiés dans la littérature.. Figure 3. Représentant données de fréquence cardiaque Remarque:.. Fréquence cardiaque en battements par minute (BPM) Valeurs représentatives reflètent les données recueillies dans notre laboratoire et publiés dans la littérature. <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/3238/3238fig4.jpg" /> Figure 4. Représentant des données de cortisol salivaire Note:.. Les valeurs représentant la concentration de cortisol dans les UL / DL refléter les données recueillies dans notre laboratoire et publiés dans la littérature.

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Reviewing determinants of human salivary cortisol responses to challenge.</a> Psychoneuroendocrinology. 34, 2-18 (2009).</li><li>Buske-Kirschbaum, A., Jobst, S., Wustmans, A., Kirschbaum, C., Rauh, W., Hellhammer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuated+free+cortisol+response+to+psychosocial+stress+in+children+with+atopic+dermatitis.">Attenuated free cortisol response to psychosocial stress in children with atopic dermatitis.</a> Psychosom. Med. 59, 419-426 (1997).</li></ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Dans cet article, nous avons démontré la façon de mener le test de stress Trèves social dans un volontaire sain. La TSST est un facteur de stress de laboratoire normalisées sociale qui induit une augmentation robuste et fiable à psychologiques, des mesures physiologiques et neuro-endocrinien. La TSST est une alternative utile aux facteurs de stress physiques comme lors du test presseur froid ou la marche sur tapis roulant, et reproduit le stress psychologique, plus naturaliste de la performance dans la présence d...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom de l&#39;équipement / Alimentation </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th></tr><tr><td> BSL Psychophysiologie du système, y compris Mac OS MP36 unité d&#39;acquisition de données et trois électrodes électrocardiogramme </td><td> Systèmes BIOPAC Inc </td><td> BSLPSY-M </td></tr><tr><td> Trait Anxiety Inventory Etat </td><td> Esprit Jardin, Inc </td><td> Guindé-B </td></tr><tr><td> Enzyme salivaire de cortisol dosage immuno Kit </td><td> Salimetrics </td><td> 1-3002 </td></tr><tr><td> 2,0 ml des flacons en polypropylène </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05 146 40B </td></tr><tr><td> Lecteur de microplaques BioRad, modèle 680, avec logiciel de gestion de microplaques </td><td> BioRad </td><td> Plate Reader: 168 1000 Logiciel: 1706800 </td></tr></tbody></table>

the trier social stress test protocol for inducing psychological stress

Cet article montre un protocole de stress psychologique pour une utilisation dans un environnement de laboratoire. Les protocoles qui permettent aux chercheurs d&#39;étudier les mécanismes biologiques de la réponse au stress dans la santé et la maladie sont fondamentaux pour le progrès de la recherche dans le stress et l&#39;anxiété. 1 Bien que de nombreux protocoles existent pour induire la réponse au stress dans le laboratoire, la négligence de nombreux de fournir un contexte naturel ou d&#39;intégrer les aspects du stress social et psychologique. Des protocoles de stress psychologique, la méta-analyse suggère que le test de stress social Trèves (TSST) est le protocole le plus utile et approprié pour des études standardisées de réactivité hormone du stress. 2 Dans la description originale de la TSST, les chercheurs ont cherché à concevoir et évaluer une procédure capable d&#39;induire une réponse au stress fiable dans la majorité des volontaires sains. 3 Ces chercheurs ont constaté une élévation du rythme cardiaque, pression artérielle et le stress endocrinien plusieurs markers en réponse à la TSST (un facteur de stress psychologique) par rapport à une injection de sérum physiologique (un stresseur physique). 3 Bien que la TSST a été modifié pour répondre aux besoins des divers groupes de recherche, il se compose généralement d&#39;une période d&#39;attente à l&#39;arrivée, le discours d&#39;anticipation les périodes de préparation, de la parole de performance, la performance et verbale arithmétique, suivie par une ou plusieurs périodes de récupération. La TSST exige que les participants à préparer et à livrer un discours, et verbalement répondre à un problème arithmétique difficiles dans la présence d&#39;un public socialement évaluative. 3 Evaluation sociale et incontrôlable ont été identifiés comme des éléments clés de l&#39;induction de stress par le TSST. 4 Lors de l&#39;utilisation des plus d&#39;une décennie, l&#39;objectif de la TSST est systématiquement induire une réponse de stress, afin de mesurer les différences de réactivité, d&#39;anxiété et d&#39;activation de l&#39;axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien (HHS) ou sympathique-surrénalien-médullaire (SAM), l&#39;axe lors de la tâche 1. Researcsien général d&#39;évaluer les changements dans les auto-déclarés d&#39;anxiété, des mesures physiologiques (rythme cardiaque, par exemple), et / ou indices neuroendocrines (par exemple l&#39;hormone de stress cortisol) en réponse à la TSST. De nombreux chercheurs ont adopté l&#39;échantillonnage salivaires pour les marqueurs de stress comme le cortisol et l&#39;alpha-amylase (un marqueur de l&#39;activation du système nerveux autonome) comme une alternative au prélèvement de sang afin de réduire le stress de confusion de collecte de sang techniques. En plus des changements vécus par une personne qui remplit le TSST, les chercheurs peuvent comparer les changements entre les différents groupes de traitement (par exemple des échantillons cliniques versus contrôle en bonne santé) ou l&#39;efficacité des interventions de réduction du stress. 1

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The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

Cet article décrit un protocole pour induire un stress psychologique chez les participants, ce qui permet aux chercheurs de mesurer psychologiques, physiologiques et neuroendocriniennes au stress au sein des participants ou entre les groupes.

Le protocole social Trèves Stress Test pour induire un stress psychologique

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

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55.6K vues.  Northern Arizona University. Cet article décrit un protocole pour induire un stress psychologique chez les participants, ce qui permet aux chercheurs de mesurer psychologiques, physiologiques et neuroendocriniennes au stress au sein des participants ou entre les groupes.

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Using Visual and Narrative Methods to Achieve Fair Process in Clinical Care

The Institute of Medicine has targeted patient-centeredness as an important area of quality improvement. A major dimension of patient-centeredness is respect for patient's values, preferences, and expressed needs. Yet specific approaches to gaining this understanding and translating it to quality care in the clinical setting are lacking. From a patient perspective quality is not a simple concept but is best understood in terms of five dimensions: technical outcomes; decision-making efficiency; amenities and convenience; information and emotional support; and overall patient satisfaction. Failure to consider quality from this five-pronged perspective results in a focus on medical outcomes, without considering the processes central to quality from the patient's perspective and vital to achieving good outcomes. In this paper, we argue for applying the concept of fair process in clinical settings. Fair process involves using a collaborative approach to exploring diagnostic issues and treatments with patients, explaining the rationale for decisions, setting expectations about roles and responsibilities, and implementing a core plan and ongoing evaluation. Fair process opens the door to bringing patient expertise into the clinical setting and the work of developing health care goals and strategies. This paper provides a step by step illustration of an innovative visual approach, called photovoice or photo-elicitation, to achieve fair process in clinical work with acquired brain injury survivors and others living with chronic health conditions. Applying this visual tool and methodology in the clinical setting will enhance patient-provider communication; engage patients as partners in identifying challenges, strengths, goals, and strategies; and support evaluation of progress over time. Asking patients to bring visuals of their lives into the clinical interaction can help to illuminate gaps in clinical knowledge, forge better therapeutic relationships with patients living with chronic conditions such as brain injury, and identify patient-centered goals and possibilities for healing. The process illustrated here can be used by clinicians, (primary care physicians, rehabilitation therapists, neurologists, neuropsychologists, psychologists, and others) working with people living with chronic conditions such as acquired brain injury, mental illness, physical disabilities, HIV/AIDS, substance abuse, or post-traumatic stress, and by leaders of support groups for the types of patients described above and their family members or caregivers.

This paper illustrates an innovative visual approach (photovoice or photo-elicitation) to achieve fair process in clinical care for patients living with chronic health conditions, illuminate gaps in clinical knowledge, forge better therapeutic relationships, and identify patient-centered goals and possibilities for healing.

Utilisant des méthodes visuelles et narratives pour réaliser un processus équitable dans les soins cliniques

The Institute of Medicine has targeted patient-centeredness as an important area of quality improvement. A major dimension of patient-centeredness is ...

Recherche

Médecine

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our understanding of the mechanisms underlying parkinsonian symptoms, since it recapitulates the changes in basal ganglia circuitry and pharmacology observed in parkinsonian patients1-4. However, the precise cellular and molecular changes occurring at cortico-striatal synapses of the output pathways within the striatum, which is the major input region of the basal ganglia remain elusive, and this is believed to be site where pathological abnormalities underlying parkinsonian symptoms arise3,5.
In PD, understanding the mechanisms underlying changes in basal ganglia circuitry following degeneration of the nigro-striatal pathway has been greatly advanced by the development of bacterial artificial chromosome (BAC) mice over-expressing green fluorescent proteins driven by promoters specific for the two striatal output pathways (direct pathway: eGFP-D1; indirect pathway: eGFP-D2 and eGFP-A2a)8, allowing them to be studied in isolation. For example, recent studies have suggested that there are pathological changes in synaptic plasticity in parkinsonian mice9,10. However, these studies utilised juvenile mice and acute models of parkinsonism. It is unclear whether the changes described in adult rats with stable 6-OHDA lesions also occur in these models. Other groups have attempted to generate a stable unilaterally-lesioned 6-OHDA adult mouse model of PD by lesioning the medial forebrain bundle (MFB), unfortunately, the mortality rate in this study was extremely high, with only 14% surviving the surgery for 21 days or longer11. More recent studies have generated intra-nigral lesions with both a low mortality rate &gt;80% loss of dopaminergic neurons, however expression of L-DOPA induced dyskinesia11,12,13,14 was variable in these studies. Another well established mouse model of PD is the MPTP-lesioned mouse15. Whilst this model has proven useful in the assessment of potential neuroprotective agents16, it is less suitable for understanding mechanisms underlying symptoms of PD, as this model often fails to induce motor deficits, and shows a wide variability in the extent of lesion17, 18.
Here we have developed a stable unilateral 6-OHDA-lesioned mouse model of PD by direct administration of 6-OHDA into the MFB, which consistently causes &gt;95% loss of striatal dopamine (as measured by HPLC), as well as producing the behavioural imbalances observed in the well characterised unilateral 6-OHDA-lesioned rat model of PD. This newly developed mouse model of PD will prove a valuable tool in understanding the mechanisms underlying generation of parkinsonian symptoms.

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson&#039;s Disease

A protocol for performing unilateral 6-OHDA lesions of the medial forebrain bundle in mice is described. This method has a low mortality rate (13.3 %) with 89% of the surviving animals showing &#62;95% loss of striatal dopamine and 90.63&#177;-4.02 % ipsiversive rotational bias towards the side of the lesion.

Développement d&#39;une manière unilatérale-lésés 6-OHDA modèle murin de la maladie de Parkinson

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce atherosclerosis (reviewed in 1 and 2). The role of shear stress has been extensively studied in vitro investigating the influence of flow dynamics on cultured endothelial cells 1,3,4 and in vivo in larger animals and humans 1,5,6,7,8. However, highly reproducible small animal models allowing systematic investigation of the influence of shear stress on plaque development are rare. Recently, Nam et al. 9 introduced a mouse model in which the ligation of branches of the carotid artery creates a region of low and oscillatory flow. Although this model causes endothelial dysfunction and rapid formation of atherosclerotic lesions in hyperlipidemic mice, it cannot be excluded that the observed inflammatory response is, at least in part, a consequence of endothelial and/or vessel damage due to ligation.
In order to avoid such limitations, a shear stress modifying cuff has been developed based upon calculated fluid dynamics, whose cone shaped inner lumen was selected to create defined regions of low, high and oscillatory shear stress within the common carotid artery 10. By applying this model in Apolipoprotein E (ApoE) knockout mice fed a high cholesterol western type diet, vascular lesions develop upstream and downstream from the cuff. Their phenotype is correlated with the regional flow dynamics 11 as confirmed by in vivo Magnetic Resonance Imaging (MRI) 12: Low and laminar shear stress upstream of the cuff causes the formation of extensive plaques of a more vulnerable phenotype, whereas oscillatory shear stress downstream of the cuff induces stable atherosclerotic lesions 11. In those regions of high shear stress and high laminar flow within the cuff, typically no atherosclerotic plaques are observed.
 
In conclusion, the shear stress-modifying cuff procedure is a reliable surgical approach to produce phenotypically different atherosclerotic lesions in ApoE-deficient mice.

The constricting cuff presented in this article is designed to induce atherosclerosis in the murine common carotid artery. Due to the conical shape of its inner lumen the implanted cuff generates well-defined regions of low, high and oscillatory shear stress triggering the development of atherosclerotic lesions of different inflammatory phenotypes.

Implantation d&#39;une manchette carotidienne pour le déclenchement de cisaillement-stress athérosclérose induite chez la souris

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

Biomarqueurs dans un modèle animal pour Révéler Corrélats neuronaux, hématologiques et du comportement de stress post-traumatique

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the arteries (&beta;2). When systemically administered, it increases cardiac demand. Thus, dobutamine unmasks abnormal rhythm or ischemic areas potentially at risk of infarction. 
Monitoring of heart function during a cardiac stress test can be performed by either ecocardiography or cardiac catheterization. The latter is an invasive but more accurate and informative technique that the former.
Cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization accomplished as described here allows, in a single experiment, the measurement of the following hemodynamic parameters: heart rate (HR), systolic pressure, diastolic pressure, end-diastolic pressure, maximal positive pressure development (dP/dtmax) and maximal negative pressure development (dP/dtmin), at baseline conditions and under increasing doses of dobutamine.
As expected, in normal mice we observed a dobutamine dose-related increase in HR, dP/dtmax and dP/dtmin. Moreover, at the highest dose tested (12 ng/g/min) the cardiac decompensation of high fat diet-induced obese mice was unmasked.

We describe the protocol to perform a cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization in normal mice. Also we show its application to unmask subclinical cardiac disease in high fat diet-induced obese mice.

Test de stress cardiaque induite par la dobutamine et surveillé par cathétérisme cardiaque chez la souris

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the ...

Reduction in Left Ventricular Wall Stress and Improvement in Function in Failing Hearts using Algisyl-LVR

Injection of Algisyl-LVR, a treatment under clinical development, is intended to treat patients with dilated cardiomyopathy. This treatment was recently used for the first time in patients who had symptomatic heart failure. In all patients, cardiac function of the left ventricle (LV) improved significantly, as manifested by consistent reduction of the LV volume and wall stress. Here we describe this novel treatment procedure and the methods used to quantify its effects on LV wall stress and function.
Algisyl-LVR is a biopolymer gel consisting of Na+-Alginate and Ca2+-Alginate. The treatment procedure was carried out by mixing these two components and then combining them into one syringe for intramyocardial injections. This mixture was injected at 10 to 19 locations mid-way between the base and apex of the LV free wall in patients.
Magnetic resonance imaging (MRI), together with mathematical modeling, was used to quantify the effects of this treatment in patients before treatment and at various time points during recovery. The epicardial and endocardial surfaces were first digitized from the MR images to reconstruct the LV geometry at end-systole and at end-diastole. Left ventricular cavity volumes were then measured from these reconstructed surfaces.
Mathematical models of the LV were created from these MRI-reconstructed surfaces to calculate regional myofiber stress. Each LV model was constructed so that 1) it deforms according to a previously validated stress-strain relationship of the myocardium, and 2) the predicted LV cavity volume from these models matches the corresponding MRI-measured volume at end-diastole and end-systole. Diastolic filling was simulated by loading the LV endocardial surface with a prescribed end-diastolic pressure. Systolic contraction was simulated by concurrently loading the endocardial surface with a prescribed end-systolic pressure and adding active contraction in the myofiber direction. Regional myofiber stress at end-diastole and end-systole was computed from the deformed LV based on the stress-strain relationship.

This article describes procedures for implanting a novel hydrogel in failing hearts and quantifying its effect on left ventricular wall stress and function. These procedures have been successfully applied in dogs and humans.

Réduction du ventricule gauche Stress mur et amélioration de la fonction dans les coeurs défaillants utilisant Algisyl-LVR

Injection of  Algisyl-LVR, a treatment under clinical development, is intended to treat  patients with dilated cardiomyopathy. This treatment was recently ...

A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to the development of metastatic disease in animal models and in cancer patients. Preclinical work from our group and others has demonstrated a profound suppression of innate immune function, specifically NK cells in the postoperative period and this plays a major role in the enhanced development of metastases following surgery. Relatively few animal studies and clinical trials have focused on characterizing and reversing the detrimental effects of cancer surgery. Using a rigorous animal model of spontaneously metastasizing tumors and surgical stress, the enhancement of cancer surgery on the development of lung metastases was demonstrated. In this model, 4T1 breast cancer cells are implanted in the mouse mammary fat pad. At day 14 post tumor implantation, a complete resection of the primary mammary tumor is performed in all animals. A subset of animals receives additional surgical stress in the form of an abdominal nephrectomy. At day 28, lung tumor nodules are quantified. When immunotherapy was given immediately preoperatively, a profound activation of immune cells which prevented the development of metastases following surgery was detected. While the 4T1 breast tumor surgery model allows for the simulation of the effects of abdominal surgical stress on tumor metastases, its applicability to other tumor types needs to be tested. The current challenge is to identify safe and promising immunotherapies in preclinical mouse models and to translate them into viable perioperative therapies to be given to cancer surgery patients to prevent the recurrence of metastatic disease.

A mouse tumor model of surgical stress is used to explore how postoperative immune suppression promotes metastatic disease and to evaluate immunostimulatory perioperative therapies.

Une tumeur modèle murin de stress chirurgical à explorer les mécanismes de l&#39;immunosuppression postopératoire et évaluer de nouvelles immunothérapies périopératoires

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to ...

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the actual molecules towards which the cells migrate remain elusive. This modified invasion assay has been developed to identify targets which drive cell migration and invasion. This technique compares the invasion index under three conditions to determine whether a specific hormone, growth factor, or cytokine plays a role in mediating the invasive potential of a cancer cell. These conditions include i) normal fetal bovine serum (FBS), ii) charcoal-stripped FBS (CS-FBS), which removes hormones, growth factors, and cytokines and iii) CS-FBS + molecule (denoted &#8220;X&#8221;). A significant change in cell invasion with CS-FBS as compared to FBS, indicates the involvement of hormones, cytokines or growth factors in mediating the change. Individual molecules can then be added back to CS-FBS to assay their ability to reverse or rescue the invasion phenotype. Furthermore, two or more factors can be combined to evaluate the additive or synergistic effects of multiple molecules in driving or inhibiting invasion. Overall, this method enables the investigator to determine whether hormones, cytokines, and/or growth factors play a role in cell invasion by serving as chemoattractants or inhibitors of invasion for a particular type of cancer cell or a specific mutant. By identifying specific chemoattractants and inhibitors, this modified invasion assay may help to elucidate signaling pathways that direct cancer cell invasion.

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

This video article describes a modified in vitro method to examine the role of hormones, cytokines and/or growth factors in driving cancer cell invasion.

Une modification<em&gt; In vitro</em&gt; Invasion Test pour déterminer le rôle potentiel des hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance dans le cancer Médiation invasion cellulaire

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the ...

Glutamate and Hypoxia as a Stress Model for the Isolated Perfused Vertebrate Retina

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal vascular occlusion, retinal detachment, and diabetic retinopathy. It was the object of this study to introduce a standardized stress model for future preclinical therapeutic testing.
Bovine retinas were prepared and perfused with an oxygen saturated standard solution, and the ERG was recorded. After recording stable b-waves, hypoxia (pure N2) or glutamate stress (250 &#181;m glutamate) was exerted for 45 min. To investigate the effects on photoreceptor function alone, 1 mM aspartate was added to obtain a-waves. ERG-recovery was monitored for 75 min.
For hypoxia, a decrease in a-wave amplitude of 87.0% was noted (p &#60;0.01) after an exposition time of 45 min (decrease of 36.5% after the end of the washout p = 0.03). Additionally, an initial decrease in b-wave amplitudes of 87.23% was recorded, that reached statistical significance (p &#60;0.01, decrease of 25.5% at the end of the washout, p = 0.03).
For 250 &#181;m glutamate, an initial 7.8% reduction of a-wave amplitudes (p &#62;0.05) followed by a reduction of 1.9% (p &#62;0.05). A reduction of 83.7% of b-wave amplitudes (p &#60;0.01) was noted; after a washout of 75 min the reduction was 2.3% (p = 0.62). In this study, a standardized stress model is presented that may be useful to identify possible neuroprotective effects in the future.

With this study, we introduce a standardized stress model for the isolated superfused bovine retina for future preclinical therapeutic testing. The effect of either hypoxia (pure N2) or glutamate stress (250 &#181;M glutamate) on retinal function represented by a- and b-wave amplitudes was evaluated.

Glutamate et hypoxie comme un modèle de stress pour la isolé perfusé vertébrés Retina

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal ...

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 million patients worldwide. It leads to a decrease in retinal pigment epithelium (RPE)-synthesized neuroprotective factors, e.g., pigment epithelium-derived factor (PEDF) and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), followed by the loss of RPE cells, and eventually photoreceptor and retinal ganglion cell (RGC) death. We hypothesize that the reconstitution of the neuroprotective and neurogenic retinal environment by the subretinal transplantation of transfected RPE cells overexpressing PEDF and GM-CSF has the potential to prevent retinal degeneration by mitigating the effects of oxidative stress, inhibiting inflammation, and supporting cell survival. Using the Sleeping Beauty transposon system (SB100X) human RPE cells have been transfected with the PEDF and GM-CSF genes and shown stable gene integration, long-term gene expression, and protein secretion using qPCR, western blot, ELISA, and immunofluorescence. To confirm the functionality and the potency of the PEDF and GM-CSF secreted by the transfected RPE cells, we have developed an in vitro assay to quantify the reduction of H2O2-induced oxidative stress on RPE cells in culture. Cell protection was evaluated by analyzing cell morphology, density, intracellular level of glutathione, UCP2 gene expression, and cell viability. Both, transfected RPE cells overexpressing PEDF and/or GM-CSF and cells non-transfected but pretreated with PEDF and/or GM-CSF (commercially available or purified from transfected cells) showed significant antioxidant cell protection compared to non-treated controls. The present H2O2-model is a simple and effective approach to evaluate the antioxidant effect of factors that may be effective to treat AMD or similar neurodegenerative diseases.

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

We present a protocol for the development and use ofan oxidative stress-model by treating retinal pigment epithelial cells with H2O2, analyzing cell morphology, viability, density, glutathione, and UCP-2 level. It is a useful model to investigate the antioxidant effect of proteins secreted by transposon-transfected cells to treat neuroretinal degeneration.

Induction et analyse du stress oxydatif dans les cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes transfectées par transposon de la belle endormie

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 ...