Cette étude a été financée en partie par la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), le projet PI GZ 771/1-1; SFB 656 &quot;Imagerie moléculaire cardiovasculaire», Münster, Allemagne (projets C6, Z2, B3 et PM3); UE NoE «Diagnostic Molecular Imaging-DIMI &quot;(WP 11.1 et 11.2). L&#39;étude a également été financé en partie par la British Heart Foundation, Royaume-Uni.

1. Préparer le modificateur contrainte de cisaillement (manchette) <ol><li> Le modificateur de la contrainte de cisaillement se compose de deux moitiés longitudinales d&#39;un cylindre avec une lumière en forme de cône. Les demi-coques sont faites de polyéthercétone thermoplastique produit par un procédé de coulée en plastique. Les éléments de fonte sont envoyés tout relié à la roue. Ainsi, les demi-coquilles doivent être coupés avant l&#39;utilisation. Chaque fonte contient des demi-coquilles de différentes tailles allant de 150 um - 300 um (diamètre intérieur plus bas à la fin de l&#39;aval). </li><li> La préparation brassard doit être réalisée sous un microscope chirurgical. </li><li> Tenez la demi-coquille coiffe avec une pince émoussée et doucement le couper de la fonte en utilisant un scalpel tranchant. Cette procédure conduira à la moitié des précurseurs shell qui doivent être traitées ultérieurement. </li><li> Placez le précurseur demi-coquille sur une plaque de même les non-glissantes, de la fixer avec une pince émoussée et le couper exactement le long de l&#39;incision préformée pour remOve l&#39;extrémité fermée. Cela donnera la demi-coquille coiffe prêt à l&#39;emploi. </li><li> Contrôle de la demi-coquilles sous le microscope et retirez délicatement les bords restent vifs. La lumière interne conique est essentielle pour induire différentes qualités de la contrainte de cisaillement à l&#39;intérieur, en amont et en aval de la coiffe implanté. Une rainure sur la surface extérieure des demi-coquilles perpendiculaire à la lumière interne sert de guide pour le fil qui colle enfin les demi-coquilles pour former le brassard fonctionnel. </li><li> Stocker les demi-coquilles manchette, classées selon leur taille, dans de l&#39;éthanol à 70%. </li></ol> 2. Implanter le brassard autour de l&#39;artère carotide droite <ol><li> Souris knockout ApoE devrait être autour de 10 semaines d&#39;âge et à un poids d&#39;au moins 20 grammes. Si le développement des plaques doit être étudié sous régime riche en cholestérol, en commençant par exemple un régime de type occidental 4 semaines avant l&#39;implantation brassard est recommandée. </li><li> L&#39;ensemble de la procédure chirurgicale doitêtre effectuée au moins sous conditions semi-stériles: Porter une blouse chirurgicale, masque et chapeau et gants stériles. Stériliser les instruments pendant 30 secondes dans un stérilisateur à billes instruments et les placer sur une feuille stérile opaque. Méfiez-vous! Des instruments ont pour refroidir avant de l&#39;utiliser! </li><li> Placez la souris dans une chambre d&#39;induction anesthésique remplie avec 3% d&#39;isoflurane jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit complètement anesthésiés. Vérifiez la profondeur de l&#39;anesthésie avec la réponse à pincement de l&#39;orteil. Sinon, une anesthésie peut être réalisée avec intrapéritonéale (IP) d&#39;injection de kétamine (80 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg) ou autre anesthésiques approuvés par le IACUC. Pour une injection ip, maintenez la souris en position couchée et injecter l&#39;anesthésique dans le quadrant inférieur gauche de l&#39;abdomen. </li><li> Placez la souris sur une plaque chauffée chirurgicale, en position couchée. Afin d&#39;éviter les yeux de la marche à sec les humidifier avec collyre (par exemple, Bepanthen yeux et du nez lotion). Fais l&#39;avant-et pattes arrière et les bandes en bas de la plaque. Si vous effectuez l&#39;isoflurane, le débit de gaz narcotiques (2% d&#39;isoflurane) doit être alimenté via un masque de petit rongeur. </li><li> Enlever les poils entre la mandibule et le sternum soit par l&#39;agent appliquant dépilatoires (par exemple Pilca Med) ou en utilisant une amende rasoirs électriques (par exemple, Wella Contura). Rasage doit être effectuée avec prudence afin d&#39;éviter d&#39;irriter la peau. Si vous utilisez un agent dépilatoire, donner 1-2 min pour pénétrer les cheveux, par la suite, frottez doucement jusqu&#39;à ce que tous les cheveux et agent dépilatoire est supprimé. </li><li> Avez prêts préalablement préparé demi-coquilles coiffe de différentes tailles (deux de chaque taille) et un 2,5 cm de long morceau de 6-0 suture de soie pour interconnecter les demi-coquilles sur le site de l&#39;occlusion carotidienne. </li><li> Désinfecter le champ opératoire avec une quantité libérale de Betadine. Utilisez de petits ciseaux pointus pour ouvrir la peau et le fascia sous-jacent de la nuque par une incision médiane 4-5mm à partir du haut du sternum (manubrium). </li><li> Développer l&#39;ouverture, shift l&#39;glande parotide droite de côté et insérez un épandeur chirurgicale. Puis décortiquer carrément dans l&#39;abîme, juste à gauche de la trachée (du point de vue des chirurgiens), où le muscle sternomastoideus droite traverse le muscle droit omohyoïdien, jusqu&#39;à ce que vous êtes capable d&#39;identifier la pulsation carotidienne droit commun. </li><li> L&#39;utilisation très fine pince coudée ou courbée (par exemple, Dumont # 5 / 45), disséquer le artère carotide commune droite en enlevant doucement le tissu conjonctif environnant. Séparez les carotides du nerf vague - le blanc, objet filandreuse exécuter directement le long de la carotide - que cette étape est nécessaire pour complètement exposer le navire. Soyez prudent, ni de nuire le nerf vague, ni une branche de la veine jugulaire interne gauche, qui est également en relation étroite à la carotide. </li><li> Afin de choisir la taille qu&#39;il vous faut, comparer le diamètre de la carotide exposée avec le diamètre intérieur des demi-coquilles brassard: La plus grande largeur de la lumière devrait répondre aux poignets, le diamètre extérieur de la carotide. </li&gt; <li> Maintenant, soigneusement mis le bout de la pince sous la carotide, ouvrez la pince, fil de la pièce de 6-0 suture de soie sous la carotide et former une boucle. Entre la boucle et le lieu de la carotide une demi-coquille coiffe sous la carotide. Le côté du plus grand resserrement doit être en aval. </li><li> Placez la coquille coiffe seconde moitié dans la boucle sur le dessus de la carotide. </li><li> Serrer doucement la boucle de suture à l&#39;aide des pinces suture et le nœud du fil. En faisant cela, le modificateur de stress fonctionnement de cisaillement est formé. Pour l&#39;ajustement précis de la coiffe, il est essentiel que la suture est en marche exactement dans la rainure préformée sur la surface externe de la coiffe. </li><li> Déplacez le glande parotide droite de retour à sa position initiale, approximative et proche de la peau soit en utilisant une petite quantité de 6-0 suture Prolène ou, alternativement, vous pouvez utiliser des clips plaie. </li><li> Injecter une dose unique de 5 mg / kg carprofène (par exemple Rimadyl) sous-cutanée à fournir un traitement prophylactique des douleurs et le lieula souris dans une chambre de réchauffement jusqu&#39;à ce qu&#39;il récupère. Normalement, cela prend 30-60 minutes lors de l&#39;utilisation d&#39;anesthésie kétamine / xylazine. Lorsque vous utilisez l&#39;isoflurane anesthésie par inhalation de la période de récupération est sensiblement plus courte (10-20 min). </li><li> Dans notre expérience, les animaux retrouver une activité normale atones dans les 24 premières heures après l&#39;implantation brassard avec l&#39;intervention étant effectuée par un chirurgien expérimenté. Toutefois, si l&#39;animal semble être en difficulté même un jour post-opératoire, répéter le traitement antalgique et consulter le personnel vétérinaire. </li></ol> 3. Explantation de la manchette et les artères carotides <ol><li> Pour l&#39;analyse histologique des artères carotides doivent être récoltés à la fin de la période d&#39;observation. Avant de commencer l&#39;explantation, l&#39;animal doit être tué selon les directives du IACUC. </li><li> Si les demi-coquilles brassard sont destinées à être réutilisées, retirez soigneusement tous les fragments de tissus et de la suture connectant à partir des éléments en plastique, DISsecting des artères carotides, laver et stocker les demi-coquilles dans une solution d&#39;alcool à 70%. Il convient de garder à l&#39;esprit que le brassard est ancrée dans le tissu conjonctif adhérences après plusieurs semaines d&#39;implantation et que l&#39;on a de disséquer le brassard avec prudence afin de ne pas nuire à la paroi des vaisseaux. </li><li> Alternativement, le brassard peut être explantés et intégrés en collaboration avec l&#39;artère carotide. La matière plastique de la coiffe est résistant à des solutions de fixation normale et les solvants utilisés pour l&#39;enrobage de paraffine. En outre, les échantillons embarqués peuvent être coupés à l&#39;aide d&#39;un microtome normale équipée de lames normales. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs Le brassard doit être placé toujours autour de l&#39;une des deux artères carotides communes d&#39;un animal (fig. 1A, 1B) - du côté controlatéral sert de contrôle. Sur l&#39;image présentant les deux demi-coquilles de la coiffe (Fig. 1B) la forme conique de la lumière interne est visible. Cette forme conique est essentiel pour establishing les trois régions où la dynamique des flux distincts. Typiques motifs contrainte de cisaillement induite par la fonte calculée à partir de mesures Doppler 11 et les vitesses d&#39;écoulement correspondant basé sur la vitesse à contraste de phase IRM 12 sont donnés dans la Figure 2. Lorsque le brassard est implanté dans des souris knockout ApoE nourris avec un régime de type occidental de la modification du débit dynamique de provoquer un stress de cisaillement induite dépôt plaque d&#39;athérome (Fig. 3): En amont de la constriction faible contrainte de cisaillement laminaire coniques conduit à un développement massif des plaques d&#39;athérosclérose d&#39;une plus phénotype vulnérables, caractérisées par des noyaux de lipides proche de la lumière centrale couverte que par une chape fibreuse mince (Fig. 3A1). La lumière intérieure conique du poignet conduit à une augmentation de la vitesse d&#39;écoulement. Presque pas de dépôt de plaque est observée dans ce domaine. Directement en aval du site du goulot d&#39;étranglement de l&#39;élargissement immédiat des résultats artère dans une zone de tourbillons et oscillatoire floparamètres w, ce qui provoque le développement des plaques moins étendu d&#39;un phénotype plus stable (noyaux à savoir lipides, qui sont moins localisées plus près aux médias). <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3308/3308fig1.jpg" /> Figure 1 Le modificateur contrainte de cisaillement - d&#39;assemblage et de placement (A) Représentation schématique de la coiffe implanté:.. Le brassard est placé autour de l&#39;artère carotide commune droite (CRAC) - du côté controlatéral (LCCA = artère carotide commune gauche) sert de contrôle . (B) In vivo l&#39;angio-IRM dans une souris: Dans la projection d&#39;intensité maximale d&#39;un en trois dimensions du temps de vol angiographie MR de la constriction induite par la forme conique exprimés (flèche blanche) est visible (pour plus de détails voir 12). (H = la tête, F = pieds, R = droite, L = gauche). Dans le coin supérieur droit d&#39;une vue macroscopique sur la lumière intérieure et la surface extérieure des demi-coquilles brassard est donné. Une fois assemblé, deux demi-coquilles former un cylindre conique qui modifiela dynamique d&#39;écoulement dans la cuve d&#39;une manière définie. Pour assurer le bon ajustement, une rainure sur la surface externe de la coiffe (flèche jaune) sert de guide pour la suture reliant. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3308/3308fig2.jpg" /> Figure 2. Régions de la dynamique des flux différents et des contraintes de cisaillement. Implantation de la dynamique de la coiffe le flux et le stress altère la suite de cisaillement dans l&#39;artère carotide dans constriction d&#39;une manière définie. Dans la représentation schématique supérieure les propriétés d&#39;écoulement différentes sont indiquées et les valeurs locales approximatif pour des contraintes de cisaillement sont donnés (basé sur les mesures Doppler 11). Ci-dessous, les vitesses d&#39;écoulement correspondantes pour un seul animal mesurée par IRM en amont de la coiffe des implantés sont présentés dans un pondérées en T1 transversale IRM image de la nuque (imagerie par contraste de phase de vitesse, pour plus de détails voir 12). Figure 3. La contrainte de cisaillement induit le développement des plaques chez les souris KO ApoE. Le coin supérieur gauche montre la vue macroscopique sur le cou ouvert et exposé les artères carotides d&#39;une souris KO ApoE sous haute teneur en graisses (type occidental) alimentation 8 semaines après l&#39;implantation d&#39;une contrainte de cisaillement modificateur autour de l&#39;artère carotide commune droite (CRAC). La région blanc opaque sur le navire (*) en amont de la coiffe correspond à un site de dépôt de la plaque d&#39;athérosclérose étendue. La flèche jaune indique le thread qui combine les deux moitiés du brassard. En revanche, il n&#39;ya aucun signe de dépôt de plaque dans l&#39;artère coronaire gauche commune (ACCV). (A) - (C) représentant Il a taché les sections de l&#39;artère carotide commune droite d&#39;une souris KO ApoE sous régime de type occidental 8 semaines après l&#39;implantation de la manchette. La représentation schématique donne les avions correspondants (lignes pointillées) Where les sections ont été localisés. (A) en amont de l&#39;athérosclérose coiffe conduit au dépôt de plaque massive. Noyaux lipidiques Grande (flèches rouges), qui sont en partie situé à proximité de la lumière centrale (détail A1) de caractériser le caractère vulnérable de ces plaques. (B) Au plan de la coiffe le goulot d&#39;étranglement presque pas le développement des plaques est évident, alors que directement en aval de la coiffe (C) écoulement oscillatoire conduit à modérer le développement des plaques d&#39;un type plus stable (c&#39;est à dire des noyaux lipidiques moins ou pas). (C1, C2 = demi-coquilles de la coiffe, P = plaques, astérisque = navire de lumière)

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Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Afin de minimiser les variations expérimentales, il est recommandé de travailler avec les animaux de près le même âge et avec l&#39;histoire même régime alimentaire. Une enquête publiée récemment démontre que le modificateur contrainte de cisaillement appliquée chez les souris de type sauvage pourrait être un bon modèle pour l&#39;enquête de la dysfonction endothéliale et au début des réactions inflammatoires induites par la modification du débit dynamique de 13. Cependant, pour l&#39;enqu?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom </td><td> Société </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Modificateur de la contrainte de cisaillement (polyéthercétone) </td><td> Promolding BV <a href="http://promolding.nl">http://promolding.nl</a> </td><td> Les moulages sont envoyés tout relié à la roue. Ainsi, les éléments simples doivent être coupés avant l&#39;utilisation. </td></tr></tbody></table>

implantation of a carotid cuff for triggering shear-stress induced atherosclerosis in mice

Il est largement admis que les altérations de la contrainte de cisaillement vasculaires déclencher l&#39;expression de gènes inflammatoires dans les cellules endothéliales et induire ainsi l&#39;athérosclérose (revue en 1 et 2). Le rôle de la contrainte de cisaillement a été largement étudiées in vitro d&#39;étudier l&#39;influence de la dynamique de l&#39;écoulement sur ​​les cellules endothéliales en culture 1,3,4 et in vivo dans les grands animaux et les humains 1,5,6,7,8. Cependant, hautement reproductible de petits modèles animaux permettant l&#39;investigation systématique de l&#39;influence des contraintes de cisaillement sur le développement des plaques sont rares. Récemment, Nam et al. 9 introduit un modèle de souris dans lequel la ligature des branches de l&#39;artère carotide crée une région de faible débit et oscillatoire. Bien que ce modèle entraîne une dysfonction endothéliale et la formation rapide de lésions athéroscléreuses chez les souris hyperlipidémiques, il ne peut pas être exclu que la réponse inflammatoire est observée, du moins en partie, une conséquence of endothéliales et / ou des dommages aux vaisseaux due à la ligature. Afin d&#39;éviter de telles limitations, un brassard de la contrainte de cisaillement modification a été développé basé sur la dynamique des fluides calculés, en forme de cône dont la lumière interne a été choisi pour créer des régions définies du bas, des contraintes de cisaillement élevées et oscillatoires au sein de l&#39;artère carotide commune 10. En appliquant ce modèle chez la souris knockout apolipoprotéine E (apoE) nourris avec un régime riche en cholestérol de type occidental, les lésions vasculaires développer en amont et en aval du brassard. Leur phénotype est corrélé à la dynamique des flux régionaux 11 comme le confirme in vivo en imagerie par résonance magnétique (IRM) 12: contrainte de cisaillement faible et laminaire en amont de la coiffe des causes de la formation de plaques étendues d&#39;un phénotype plus vulnérables, alors que oscillatoires aval de la contrainte de cisaillement le brassard induit des lésions athérosclérotiques stables 11. Dans ces régions de la contrainte de cisaillement élevé et à flux laminaire élevé au sein de la coiffe,généralement pas de plaques d&#39;athérosclérose sont observées. En conclusion, la procédure de la coiffe des contraintes de cisaillement modificateur est une approche fiable pour produire chirurgicale phénotypiquement différentes lésions athérosclérotiques dans les souris déficientes en ApoE.

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Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

Le brassard de constriction présentés dans cet article est conçu pour induire l&#39;athérosclérose dans l&#39;artère carotide commune murin. Grâce à la forme conique de sa lumière intérieure de la coiffe des implantée génère régions bien définies de la basse, la contrainte de cisaillement élevées et oscillatoires déclenchant le développement des lésions athérosclérotiques des différents phénotypes inflammatoires.

Implantation d&#39;une manchette carotidienne pour le déclenchement de cisaillement-stress athérosclérose induite chez la souris

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

implantation-carotid-cuff-for-triggering-shear-stress-induced

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20.0K vues.  Westfälische Wilhelms-University Münster. Le brassard de constriction présentés dans cet article est conçu pour induire l'athérosclérose dans l'artère carotide commune murin. Grâce à la forme conique de sa lumière intérieure de la coiffe des implantée génère régions bien définies de la basse, la contrainte de cisaillement élevées et oscillatoires déclenchant le développement des lésions athérosclérotiques des différents phénotypes inflammatoires.

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A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified version of carotid partial ligation methods [1,2] to show that it acutely induces low and oscillatory flow conditions, two key characteristics of disturbed flow, in the mouse common carotid artery. Using this model, we have provided direct evidence that disturbed flow indeed leads to rapid and robust atherosclerosis development in Apolipoprotein E knockout mouse [3]. We also developed a method of endothelial RNA preparation with high purity from the mouse carotid intima [3]. Using this mouse model and method, we found that partial ligation causes endothelial dysfunction in a week, followed by robust and rapid atheroma formation in two weeks in a hyperlipidemic mouse model along with features of complex lesion formation such as intraplaque neovascularization by four weeks. This rapid in vivo model and the endothelial RNA preparation method could be used to determine molecular mechanisms underlying flow-dependent regulation of vascular biology and diseases. Also, it could be used to test various therapeutic interventions targeting endothelial dysfunction and atherosclerosis in considerably reduced study duration.

This describes a partial carotid ligation surgery, which causes disturbed flow conditions and subsequent atherosclerosis development (in two weeks) with intraplaque neo-vascularization (in four weeks) in the mouse common carotid artery. We also describe a novel method of RNA isolation from the carotid intima, providing high purity endothelial RNA.

Un modèle de Disturbed flux athérosclérose induite chez la souris artère carotide par ligature partielle et une méthode simple d&#39;isolement d&#39;ARN de l&#39;endothélium carotidienne

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

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Médecine

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Despite the considerable progress made in the stent development in the last decades, cardiovascular diseases remain the main cause of death in western countries. Beside the benefits offered by the development of different drug-eluting stents, the coronary revascularization bears also the life-threatening risks of in-stent thrombosis and restenosis. Research on new therapeutic strategies is impaired by the lack of appropriate methods to study stent implantation and restenosis processes. Here, we describe a rapid and accessible procedure of stent implantation in mouse carotid artery, which offers the possibility to study in a convenient way the molecular mechanisms of vessel remodeling and the effects of different drug coatings.

A model of stent implantation in mouse carotid artery is described. Compared to other similar methods, this procedure is very rapid, simple and accessible, offering the possibility to study in a convenient way the vascular wall reaction to different drug-eluting stents and the molecular mechanisms of restenosis.

Un modèle murin d&#39;implantation d&#39;une endoprothèse dans l&#39;artère carotide pour l&#39;étude de la resténose

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. Although originally developed and used extensively in the rat due to its larger size, the tibial nerve in mice is big enough that it can be easily manipulated with either crush or transection, leaving the peroneal and sural nerve branches of the sciatic nerve intact and thereby preserving their target muscles. Thus, this model offers the advantages of inducing less morbidity and impediment of ambulation than the sciatic nerve transection model and also allows investigators to study the physiologic, cellular and molecular biologic mechanisms regulating the process of muscle atrophy in genetically engineered mice. The tibial nerve supplies the gastrocnemius, soleus and plantaris muscles, so its transection permits the study of denervated skeletal muscle composed of fast twitch type II fibers and/or slow twitch type I fibers. Here we demonstrate the tibial nerve transection model in the C57Black6 mouse. We assess the atrophy of the gastrocnemius muscle, as a representative muscle, at 1, 2, and 4 weeks post-denervation by measuring muscle weights and fiber type specific cross-sectional area on paraffin-embedded histologic sections immunostained for fast twitch myosin.

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of skeletal muscle atrophy. The model surgical protocol is described and demonstrated in C57Black6 mice. &#160;

Tibial Nerve Transection - un modèle standardisé pour dénervation induit l&#39;atrophie musculaire chez les souris

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque formation and stenosis, as observed for example in ischemic heart disease. Two highly reproducible mouse models&#160;&#8211;&#160;both resulting in artery stenosis but each underlying a different pathway of development&#160;&#8211; are introduced here. The models represent the two most common causes of artery stenosis; namely one mouse model for each myointimal hyperplasia, and atherosclerosis are shown. To induce myointimal hyperplasia, a balloon catheter injury of the abdominal aorta is performed. For the development of atherosclerotic plaque, the ApoE -/- mouse model in combination with western fatty diet is used. Different model-adapted options for the measurement and evaluation of the results are named and described in this manuscript. The introduction and comparison of these two models provides information for scientists to choose the appropriate artery stenosis model in accordance to the scientific question asked.

This video shows two models of intimal plaque development in murine arteries and emphasizes the differences in myointimal hyperplasia and atherosclerosis.

Induisant myointimale hyperplasie Versus athérosclérose chez la souris: An Introduction de deux modèles valides

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

Infusions de l&#39;artère carotide pour pharmacocinétiques et pharmacodynamiques Analyse des taxanes chez la souris

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Triggering Reactive Gliosis In Vivo by a Forebrain Stab Injury

Following injury to the CNS, astrocytes undergo a broad range of biochemical, morphological, and molecular changes collectively referred to as reactive astrogliosis. Reactive astrocytes exert both inflammatory and protective effects that inhibit and promote, respectively, neural repair. The mechanisms underlying the diverse functional properties of reactive astrogliosis are not well understood. Achieving a greater understanding of these mechanisms is critical to developing therapeutic strategies to treat the injured CNS. Here we demonstrate a method to trigger reactive astrogliosis in the adult mouse forebrain using a forebrain stab lesion. This lesion model is simple, reliable, and requires only a stereotaxic device and a scalpel blade to produce the injury. The use of stab lesions as an injury model in the forebrain is well established and amenable to studies addressing a broad range of neuropathological outcomes, such as neuronal degeneration, neuroinflammation, and disruptions in the blood brain barrier (BBB). Thus, the forebrain stab injury model serves as a powerful tool that can be applied for a broad range of studies on the CNS response to trauma.

Triggering Reactive Gliosis In Vivo by a Forebrain Stab Injury

This article describes a detailed protocol to produce a forebrain stab injury in adult mice. The stab injury induces severe reactive gliosis and glial scar formation which can be subsequently examined by standard immunohistochemistry methods.

Déclenchement réactive Gliose<em&gt; In Vivo</em&gt; Par un cerveau antérieur Stab blessures

Following injury to the CNS, astrocytes undergo a broad range of biochemical, morphological, and molecular changes collectively referred to as reactive ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

Approche chirurgicale pour Occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne et reperfusion induite par des maladies chez les souris

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Induction de l’athérosclérose accélérée chez les souris : le modèle « Wire-Injury »

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

Modèle de souris pour une Transplantation du pancréas en utilisant une Technique mis à jour le brassard

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Ferric Chloride-induced Canine Carotid Artery Thrombosis: A Large Animal Model of Vascular Injury

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, we have translated a vascular injury model from a small animal into a large animal (canine), with slight modifications that can be used for pre-clinical screening of prophylactic and thrombolytic agents. In addition to the surgical methods, the modified protocol describes the step-by-step methods to assess carotid artery canalization by angiography, detailed instructions to process both the brain and carotid artery for histological analysis to verify carotid canalization and cerebral hemorrhage, and specific parameters to complete an assessment of downstream thromboembolic events by utilizing magnetic resonance imaging (MRI). In addition, specific procedural changes from the previously well-established small animal model necessary to translate into a large animal (canine) vascular injury are discussed.

Here, we present the modifications necessary to a well characterized and commonly used small animal ferric chloride-induced (FeCl3) carotid artery injury model for use in a large animal vascular injury model. The resulting model can be utilized for pre-clinical trial assessment of both prophylactic and thrombolytic pharmacological and mechanical interventions.

Thrombose de l’artère carotide Canine induite par le chlorure ferrique : Un grand modèle Animal de lésion vasculaire

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, ...