Ce travail a été financé par l&#39;American Diabetes Association (ADA), Grant JF1-10-14 (MDiF). Nous tenons à remercier le personnel du Laboratoire des ressources animales au WSU. Auteurs tiennent à remercier l&#39;assistance à l&#39;analyse statistique des données de Neil Paton, Ph.D.

TNTs de souris et les rats sont déterminés en utilisant le différentiel de la plaque chaude analgésie mètre [iHPAM, IITC Life Science Inc (Woodland Hills, CA)]. L&#39;équipement se compose de plusieurs composantes: une plaque d&#39;aluminium (10 x 20 cm) avec le système de chauffage en dessous et une chambre d&#39;observation en plexiglas au-dessus, une unité de contrôle de la chaleur, le logiciel d&#39;acquisition de données (série Partie IITC # souple 8), un PC (personal ordinateur) et une pédale pour le démarrage à distance, arrêter ou réinitialiser le contrôle de l&#39;unité. Le système de chauffage permet également de démarrage / arrêt / remise à zéro de l&#39;opération de chauffage manuellement par le biais d&#39;un clavier en face de l&#39;équipement. Le iHPAM peut être réglé pour des vitesses de chauffage différentes, veille / coupure températures. 1. Equipement Set-up <ol><li> Avant animaux d&#39;essai, inspecter visuellement l&#39;unité afin de corroborer les taux de chauffage choisi (par exemple, 6 ° C / min), les premiers secours températures et Final Cut-off (par exemple, 28 ° C et 55 ° C, respectivement). </li><li> Vérifiez toutes les connexions. Pour conserver une copie électronique des résultats, l&#39;appareil doit être connecté à un ordinateur exécutant la série 8 du logiciel. Alternativement, des copies papier des résultats peuvent être imprimés via le port série de l&#39;unité. </li><li> Testez le matériel. Appuyez sur la pédale une fois pour s&#39;assurer que le Logiciel de la Série 8 enregistre les données initiales: en veille, les températures de coupure final et le temps en secondes, nécessaire pour atteindre la température de coupure. </li><li> Comme un test de contrôle en outre, les enquêteurs impliqués dans les expériences peuvent avoir besoin de faire l&#39;expérience du dispositif sur eux-mêmes. Le retrait de la main de la plaque de métal au moment de la perception de la douleur (46-48 ° C) ne doit ni nuire à la peau, ni de produire un malaise plus tard. </li><li> Une fois que l&#39;unité a été définie et les résultats des étapes 1.3 et 1.4 enregistrées, elles peuvent être comparées. Ceci est utile pour détecter les problèmes potentiels qui pourraient invalider l&#39;utilisation de l&#39;appareil. Par exemple, les écarts entre la formation initiale veille / Final Cut-off Temperatures et de la lecture effective de l&#39;unité, et / ou différences entre les températures affichées par l&#39;unité et la température réelle de la plaque requise pour le retrait de la main. </li></ol> 2. Test animaux normaux Soit, jeune ou adulte chez le rat Wistar [post-natal (p) l&#39;âge 21-25 jours], ou souris (p21-25) de n&#39;importe quel fond génétique ou le sexe peut être utilisé. Les souris utilisées dans nos expériences sont de la souche C57BL/6J. <ol><li> La nuit avant que les expériences à réaliser, acclimater les animaux en plaçant leurs cages sur le banc où l&#39;iHPAM est placé. Deux heures avant d&#39;effectuer les essais, tournez sur la iHPAM de familiariser les animaux avec le bruit de fond de l&#39;appareil. À ce stade, le iHPAM peut être mis en place et testé afin de vérifier le bon fonctionnement (voir les étapes 1). L&#39;alimentation et l&#39;eau est fournie ad libitum durant tout l&#39;essai, sauf si l&#39;animal est dans la chambre d&#39;observation (voir l&#39;étape 2.1). Remarque: Il est important de ne pas présumer que les conditions de laboratoire à des expériences comportementales sont contrôlées par défaut. Une attention particulière devrait être accordée à des facteurs génétiques et environnementaux qui peuvent influencer le résultat des études comportementales (revue dans 7). </li><li> Placez délicatement une souris normale / rat dans la chambre d&#39;observation en plexiglass sur le dessus de la plaque chauffante de l&#39;appareil. Permettre aux animaux de s&#39;acclimater à la surface chauffée (fixée à 28 ° C) jusqu&#39;à ce que l&#39;animal présente un comportement confortable. Remarque: En vertu de ces conditions chez des rats adultes normaux montrent un comportement exploratoire initiale, à l&#39;occasion debout vers le couvercle de la chambre d&#39;observation tout en reniflant. Après quelques minutes, les rats peuvent montrer des épisodes occasionnels de toilettage et un comportement détendu. Parfois, les rats coucha avec une posture détendue (extension sujets), tandis que par hasard reniflant les environs. Les souris normales sont généralement plus actifs que les rats. Cependant, les souris présentent un comportement exploratoire détendue après quelques minutes in la chambre d&#39;observation. Il est exceptionnellement rare d&#39;observer des comportements soit Évasion (par exemple, en sautant, en essayant de s&#39;échapper de la chambre d&#39;observation) ou des attitudes défensives (par exemple, crissement). Il est également important de noter que les souris peuvent transmettre la douleur d&#39;une souris à un autre 8. Par conséquent, il peut être important de souris de l&#39;essai placés dans des cages séparées. </li><li> Lieu dans le miroir arrière de la chambre d&#39;observation, afin de permettre à tous les angles des observations. Un trépied la tenue d&#39;une caméra vidéo numérique peut être d&#39;une aide pour déterminer le moment exact où nocifensive (éviter la douleur) le comportement a eu lieu. </li><li> Une fois que l&#39;animal est à l&#39;aise dans la chaleur de chambre d&#39;observation de la plaque en appuyant sur la pédale. Lorsque la température de la plaque se réchauffe à un rythme de 6 ° C / minute, les animaux normaux présentent un comportement nocifensive impliquant soit la patte arrière-* habituellement des températures qui font rage de 46 à 48 ° C 3,5,9,10. Ainsi, l&#39;animal est typique sous forme retiré le observableschambre ation après environ 3 minutes. Remarque: L&#39;observation de la réponse typique d&#39;un nocifensive c.-à-rat ou la souris, biche-patte à lécher, tout en agitant et / ou de levage, est suffisant pour résilier le stimulus thermique. Ce résultat est obtenu en appuyant sur la pédale. En ce moment, le logiciel enregistre la température de la plaque et la plaque se refroidit immédiatement jusqu&#39;à ce que la température de veille (28 ° C) est atteint (~ 0,5 min). Ce savoir la température, celle qui évoque une réaction nocifensive est considérée comme le seuil de la chaleur nocive (TNT) de la normale (contrôle) des animaux. * Parfois, en particulier chez la souris, le comportement à la température nocifensive nocif peut d&#39;abord être observée dans un ou deux pattes de devant (par exemple, lécher tout en restant assis), les quelques secondes avant pattes arrière. Toutefois, avant-patte à lécher est un composant normal du comportement de toilettage. Ainsi, seuls les arrières-patte réactions sont évaluées. Dans reprises souris peut toiletter leurs pattes postérieures ainsi. Toutefois, le toilettage normal, ne not durent plus de quelques secondes, n&#39;implique pas intensive lécher et se termine généralement après le nettoyage de ses griffes. </li><li> Retirez délicatement l&#39;animal de la plaque et placez-le dans sa cage respective. La mesure du seuil de chaleur est ensuite répété pour un autre contrôle (normal) des animaux. Note: TNTs peut être déterminée dans un seul animal à des intervalles de 1-2 minutes sans retirer l&#39;animal de la chambre d&#39;observation. Déterminations TNT chez le rat ou la souris peut être répété plusieurs fois pendant plusieurs jours. Ceci est particulièrement utile pour déterminer la moyenne TNT d&#39;un animal individuel ainsi que sa variation avec l&#39;âge. </li><li> La TNT sur les animaux de contrôle est exprimé comme la moyenne des trois ou plusieurs seuils ± SEM. </li><li> L&#39;analyse statistique des données obtenues est réalisée afin de comparer différents groupes de traitement de souris ou des rats. Procédures paramétriques, y compris l&#39;analyse de la variance peut être utilisé de façon appropriée lorsque les données sont normalement distribuées et où les groupes de traitement sont des homoskedastic; lorsque ces conditions ont été remplies les approches suivantes peuvent être appliquées. L&#39;analyse de variance suivie par le test de Newman-Keuls pour détecter des différences dans de multiples mesures, répétées à savoir TNTs individuels avec / sans traitement ou à des moments différents (par exemple, les données de la figure 3). Le t de Student apparié-test peut être utilisé pour comparer deux groupes de données à savoir les TNTs avant vs après traitement de la toxicomanie, le test t non apparié peut être utilisée pour déterminer les différences dans les changements TNT dans la drogue traitées vs véhicule chez les animaux traités (par exemple , des données dans la figure 4). </li></ol> 3. Test des animaux diabétiques Le rat diabétique par streptozotocine (STZ) induite par le modèle animal le plus couramment utilisé pour étudier les mécanismes de PDN et pour évaluer les médicaments et les thérapies analgésiques 11,12. Les rats rendus diabétiques par une dose unique intrapéritonéale de STZ (60 mg / kg) peut be test de dépistage du hyperalgésie thermique au cours de la 3 ème semaine après l&#39;apparition du diabète 11. Il est important de noter que tous les rats diabétiques développent PDN. Toutefois, les animaux qui ne développent une hyperalgésie (~ 50%) peuvent être facilement identifiés. En effet, leurs TNTs sont inférieurs à la normale *. * Pour déterminer TNTs de STZ-rats diabétiques, une température de la plaque de départ de 15 ° C au lieu de 28 ° C est utilisée. La raison de ces changements est que la plupart des animaux diabétiques avec PDN devraient être 2,11 hyperalgésique. Par conséquent, ils sont inférieurs à la normale seuils de chaleur nocives (par exemple, &lt;45 ° C). <ol><li> Un rat diabétique est placé dans la chambre d&#39;observation sur le dessus de l&#39;appareil de test. L&#39;animal est autorisé à s&#39;acclimater à la surface de la plaque jusqu&#39;à ce que l&#39;animal présente un comportement confortable. Remarque: En règle générale, un rat diabétique ne montre pas beaucoup du comportement normal. Les rats diabétiques sont généralement hypoactif, léthargique; montrant souventmouvements restreints et toilettage lente. Il est rare d&#39;observer le classement vers le couvercle de la chambre d&#39;observation. Après quelques minutes, les rats diabétiques peuvent tranquillement rester dans un coin de la chambre avec occasionnel reniflant de l&#39;environnement. </li><li> Une fois l&#39;animal diabétique est à l&#39;aise dans la chambre d&#39;observation, la plaque est chauffée jusqu&#39;à comme à l&#39;étape 2.3, le rat diabétique peut présenter un comportement nocifensive impliquant soit derrière / avant-patte. Cela se produit généralement à des températures de la plaque non-nocives (par exemple, &lt;45 ° C), ou au plus tard après 5 minutes dans la chambre avec l&#39;augmentation de température 6 ° C / min. Remarque: La réponse nocifensive d&#39;un rat diabétique jeune adulte ne diffère pas de celle d&#39;un rat normal. Toutefois, la température la plus basse évoquant un tel comportement est considérablement réduit. </li><li> Voir étape 2.4 </li><li> La moyenne de plus de trois seuils dans le jour de l&#39;expérience exprimée en ° C ± SEM est considéré comme le seuil de la chaleur nocive de l&#39;diabetianimaux c. Remarque: Un paradigme similaire à celle expliquée pour les rats normaux ou diabétiques peuvent être suivies pour déterminer la thermique anti-nocifensive effet des analgésiques sur les seuils de chaleur. </li></ol> 4. Test analgésie Les propriétés anti-nociceptifs de médicaments (par exemple, analgésiques), ainsi que la détermination des paramètres pharmacologiques tels que la dose minimale efficace peut être obtenu facilement en utilisant les étapes expliquées ci-dessus. Il est prévu que les doses adéquates d&#39;un analgésique administré à des rats et les souris pourrait accroître considérablement leurs TNTs. Ceci est particulièrement sensible chez les animaux atteints thermique hyperalgésie 3. Toutefois, pour éviter les biais dans l&#39;interprétation des résultats, les chercheurs impliqués dans l&#39;observation du comportement d&#39;un groupe d&#39;animaux ne doit pas savoir ou être conscient que si les animaux avaient été traités ou non. En outre, les médicaments doivent être injectés par l&#39;observateur peut être préparé par un autre enquêteur et étiquetésA, B, C, etc Posologie est fourni dans un imprimé, énumérant les doses individuelles par animal identifié. Selon le médicament à l&#39;essai, des doses différentes d&#39;un analgésique potentiel peut être administré à des animaux normaux ou diabétiques 5-15 min avant des tests de comportement. Des contrôles appropriés doivent être inclus (c.-à-appariés selon l&#39;âge des animaux injectés avec le véhicule seul et / ou les rats diabétiques sans PDN) et testés en utilisant des conditions identiques (par exemple, même température de départ de la plaque). Les effets chroniques de médicaments peuvent être testés ainsi. 5. Les résultats représentatifs La température la plus basse plaque évoquant des réactions nocifensive soit patte arrière de jeunes adultes normaux non traités rats ou les souris ont été déterminés comme suit 2-1 à 2-6. Comme le montre la figure 1, TNT normales chez des rats adultes jeunes et les souris étaient de 47,2 ± 0,2 ° C et 47,5 ± 0,5 ° C, respectivement. Nous avons observed ni de variation significative quotidienne de TNTs individuelles (figure 2A), ni des changements importants de TNTs entre les individus du même âge (figure 2B). Différences TNT raison de leur sexe n&#39;ont pas été observées (non représentée). TNTs de jeunes adultes STZ-diabétiques des rats ont été déterminés d&#39;une manière similaire à celle de rats normaux (étapes 3.1 à 3.3). Toutefois, la température de la plaque de départ a été fixé à 15 ° C au lieu de 28 ° C. Le comportement nocifensive de STZ-rats diabétiques a été évalué au moins trois fois chez un individu et d&#39;une façon quotidienne à partir onze jours post-injection de STZ. Comme le montre la figure 3, une baisse significative (p &lt;0,01) dans la TNT de STZ-diabétiques rats devient évident deux semaines après l&#39;injection de STZ. La moyenne TNT de STZ-rats diabétiques était de 45,6 ± 0,1 ° C (n = 16, les valeurs mises en commun de quelques jours 14-23). Les rats diabétiques présentant significativement plus faible que Norma TNTl ont été considérées comme PDN. Ces rats ont été utilisés pour tester les aigus anti-nociceptifs propriétés d&#39;un analgésique (composé A). TNTs ont été déterminées chez des rats normaux et diabétiques injectés avec une dose unique du composé ou du véhicule seul cinq minutes avant le test. Comme le montre la figure 4, une seule voie intra-péritonéale dose du composé augmenté de façon significative TNTs des rats diabétiques lorsque comparés à des rats traités avec le véhicule seul (45,6 ° C contre 47,6 ° C, respectivement). L&#39;effet anti-nocifensive du composé A a également été observée chez des rats normaux, bien que significative (p &lt;0,01), il a été moins prononcée (47,4 ° C contre 48,0 ° C, respectivement). <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig1.jpg" /> Figure 1. Détermination de la TNTs de jeunes rats adultes normaux ou souris: Les TNTs de jeunes rats adultes (p21-24) ou la souris (p20-21) ont été testés dans le iHPAM suivant les étapes décrites above. Un total de 12 rats et les souris 25 ont été testés. Mesures ont été effectuées pendant plusieurs jours et les résultats ont été regroupés. Les résultats sont exprimés en moyenne ± SEM. La valeurs minimales et maximales enregistrées dans ces TNT rats étaient 46,2 ° C et 48,6 ° C respectivement. Dans le cas des souris, les valeurs maximales et minimales enregistrées TNT étaient à 48,8 ° C et 44,9 ° C, respectivement. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig2.jpg" /> Figure 2. Âge-dépendance de TNTs chez les rats et les souris: Un Plotted) sont les TNTs de quatre rats normaux (n = 4) de 21 jours d&#39;âge déterminées au moins trois fois par jour pendant 5 jours B) TNTs de souris compagnons de portée déterminée une fois à indiqué. les âges. Les numéros sur le dessus de chaque point de détermination représente le nombre de littermates utilisés. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig3.jpg" /> Figure 3. Les rats diabétiques deviennent 3 hyperalgésique nouseks après l&#39;apparition du diabète: TNTs de six (n = 6) ans assortis jeunes adultes STZ-diabétiques rats ont été déterminés tous les jours à partir 11 jours après l&#39;induction du diabète. Montré sont quotidiennes moyennes TNT (moyenne ± SEM). TNTs diabétiques fixées entre 11-13 jours post-injection de STZ situaient dans la fourchette normale (ligne rouge). Deux semaines après injection de STZ TNTs diminué de façon significative à 45,1 ± 0,4 ° C, (p &lt;0,05). <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig4.jpg" /> Figure 4. Aigus anti-nocifensive effets de composé B à la STZ-rats diabétiques. Jeunes adultes rats normaux (bleu groupe n = 12) et appariés pour l&#39;âge des rats STZ-diabétiques hyperalgiques (groupe vert n = 6) ont été testés dans le iHPAM après une injection intrapéritonéale de véhicule (barres noires) ou composé A. (barres claires) La moyenne ± SEM TNT pour chaque traitement (contrôle du véhicule ou d&#39;un composé A-traité) sont présentés. Les astérisques indiquent les différences statistiques(P &lt;0,05).

<ol>
	<li>Baron, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+neuropathic+pain:+From+mechanisms+to+symptoms.">Peripheral neuropathic pain: From mechanisms to symptoms.</a> Clin. J. Pain. 16, S12-S20 (2000).</li><li>Calcutt, N. A., Jorge, M. C., Yaksh, T. L., Chaplan, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tactile+allodynia+and+formalin+hyperalgesia+in+streptozotocin-diabetic+rats:+Effects+of+insulin,+aldose+reductase+inhibition+and+lidocaine.">Tactile allodynia and formalin hyperalgesia in streptozotocin-diabetic rats: Effects of insulin, aldose reductase inhibition and lidocaine.</a> Pain. 68, 293-299 (1996).</li><li>Bolcskei, K., Petho, G., Szolcsanyi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noxious+heat+threshold+measured+with+slowly+increasing+temperatures:+Novel+rat+thermal+hyperalgesia+models.">Noxious heat threshold measured with slowly increasing temperatures: Novel rat thermal hyperalgesia models.</a> Methods Mol. Biol. 617, 57-66 (2010).</li><li>Ankier, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+hot+plate+tests+to+quantify+antinociceptive+and+narcotic+antagonist+activities.">New hot plate tests to quantify antinociceptive and narcotic antagonist activities.</a> Eur. J. Pharmacol. 27, 1-4 (1974).</li><li>Almasi, R., Petho, G., Bolcskei, K., Szolcsanyi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+resiniferatoxin+on+the+noxious+heat+threshold+temperature+in+the+rat:+A+novel+heat+allodynia+model+sensitive+to+analgesics.">Effect of resiniferatoxin on the noxious heat threshold temperature in the rat: A novel heat allodynia model sensitive to analgesics.</a> Br. J. Pharmacol. 139, 49-58 (2003).</li><li>Bolcskei, K., Horvath, D., Szolcsanyi, J., Petho, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+injury-induced+drop+of+the+noxious+heat+threshold+measured+with+an+increasing-temperature+water+bath:+A+novel+rat+thermal+hyperalgesia+model.">Heat injury-induced drop of the noxious heat threshold measured with an increasing-temperature water bath: A novel rat thermal hyperalgesia model.</a> Eur. J. Pharmacol. 564, 80-87 (2007).</li><li>Chesler, E. J., Wilson, S. G., Lariviere, W. R., Rodriguez-Zas, S. L., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+ranking+of+genetic+and+laboratory+environment+factors+influencing+a+behavioral+trait,+thermal+nociception,+via+computational+analysis+of+a+large+data+archive.">Identification and ranking of genetic and laboratory environment factors influencing a behavioral trait, thermal nociception, via computational analysis of a large data archive.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 26, 907-923 (2002).</li><li>Langford, D. J., Crager, S. E., Shehzad, Z., Smith, S. B., Sotocinal, S. G., Levenstadt, J. S., Chanda, M. L., Levitin, D. J., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+modulation+of+pain+as+evidence+for+empathy+in+mice.">Social modulation of pain as evidence for empathy in mice.</a> Science. 312, 1967-1970 (2006).</li><li>Hunt, S. P., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The neurobiology of pain. , (2005).</li><li>Willis, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The pain system : The neural basis of nociceptive transmission in the mammalian nervous system. , (1985).</li><li>Calcutt, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Modeling diabetic sensory neuropathy in rats. In: Methods in molecular medicine. Pain research: Methods and protocols. , (2004).</li><li>Bars, D. L. e., Gozariu, M., Cadden, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+nociception.">Animal models of nociception.</a> Pharmacol. Rev. 53, 597-652 (2001).</li><li>Shaikh, A. S., Somani, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+and+biomarkers+of+neuropathy+in+diabetic+rodents.">Animal models and biomarkers of neuropathy in diabetic rodents.</a> Indian J. Pharmacol. 42, 129-134 (2010).</li><li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32, 77-88 (1988).</li><li>Hardy, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+the+rapid+measurement+of+skin+temperature+during+exposure+to+intense+thermal+radiation.">Method for the rapid measurement of skin temperature during exposure to intense thermal radiation.</a> J. Appl. Physiol. 5, 559-566 (1953).</li><li>Sumino, R., Dubner, R., Starkman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+small+myelinated+&amp;quot;warm&amp;quot;+fibers+to+noxious+heat+stimuli+applied+to+the+monkey's+face.">Responses of small myelinated &amp;quot;warm&amp;quot; fibers to noxious heat stimuli applied to the monkey's face.</a> Brain Res. 62, 260-263 (1973).</li><li>Hammond, D. L., Ruda, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+alterations+in+thermal+nociceptive+threshold+and+the+distribution+of+immunoreactive+calcitonin+gene-related+peptide+and+substance+p+after+neonatal+administration+of+capsaicin+in+the+rat.">Developmental alterations in thermal nociceptive threshold and the distribution of immunoreactive calcitonin gene-related peptide and substance p after neonatal administration of capsaicin in the rat.</a> Neurosci. Lett. 97, 57-62 (1989).</li></ol>

Nous avons décidé de ne pas divulguer l&#39;identité de l&#39;analgésique utilisé dans ces expériences. Une partie des résultats présentés ici a été présenté dans les 71 sessions st scientifiques de l&#39;Association américaine du diabète (San Diego, CA) et la 47 e réunion annuelle de l&#39;Association européenne pour l&#39;étude du diabète (Lisbonne, Portugal).

De même à l&#39;épreuve plaque chauffante classique à quantifier thermique hyperalgésie 4,13, le dosage de la nociception décrit ici permet d&#39;une manière rapide et fiable pour quantifier le comportement nocifensive chez les rats et les souris. Toutefois, contrairement au test classique, le différentiel de la plaque chaude méthode est non invasive et pratiquement sans stress. Bien que certains retenir est nécessaire pour effectuer le test (c.-à-, l&#39;animal doit être dans la chambre ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Incrémental à chaud Plate analgésie compteur </td><td> IITC Life Science Inc </td><td> N ° de pièce PE34 </td></tr><tr><td> Série souple 8 </td><td> IITC Life Science Inc </td><td> N ° de pièce Series8 </td></tr><tr><td> Streptozotocine </td><td> Calbiochem </td><td> 572201 </td></tr></tbody></table>

rapid determination of the thermal nociceptive threshold in diabetic rats

Une neuropathie diabétique douloureuse (PDN) est caractérisé par l&#39;hyperalgésie dire, une sensibilité accrue à un stimulus nocif, et l&#39;allodynie dire, l&#39;hypersensibilité aux stimuli normalement inoffensifs 1. Hyperalgésie et l&#39;allodynie ont été étudiés dans de nombreux modèles de rongeurs de diabète sucré 2. Toutefois, comme indiqué par Bölcskei et al, la détermination de la «douleur» dans des modèles animaux est difficile en raison de sa nature subjective 3. En outre, les méthodes traditionnelles utilisées pour déterminer les réponses comportementales à des stimuli thermiques nocifs n&#39;ont généralement pas la reproductibilité et 3 de sensibilité pharmacologique. Par exemple, en utilisant la méthode de la plaque chaude de Ankier 4, bronche, le retrait et / ou de lécher soit postérieur et / ou pattes de devant est quantifiée comme latences des réflexes à des stimuli thermiques élevés constants (52-55 ° C). Toutefois, les animaux qui sont hyperalgésique à un stimulus thermique, ne pas reproductible montrent des différences dans rélatences Flex à l&#39;aide de ces températures supra-seuil de 3,5. Comme la méthode récemment décrite de Bölcskei et al. 6, les procédures décrites ici permet la détermination rapide, sensible et reproductible des seuils nociceptifs thermiques (TNTs) chez les souris et les rats. Procédé utilise augmente lentement stimulus thermique appliquée essentiellement sur la peau de rat / souris surface plantaire. La méthode est particulièrement sensible pour étudier anti-nociception pendant les états hyperalgiques comme PDN. Les procédures décrites ci-dessous sont basés sur ceux publiés en détail par Almasi et al 5 et Bölcskei et al 3. Les procédures décrites ici ont été approuvés le soin des animaux de laboratoire et le Comité d&#39;utilisation (LACUC), Wright State University.

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats at JoVE.com

Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

Ici, nous décrivons une procédure rapide simple et fiable pour déterminer la température minimale à laquelle des rats ou des souris montrent un comportement nocifensive,<em&gt; C.-à-</em&gt; L&#39;<em&gt; Seuil thermique nociceptive</em&gt; (TNT). Cette méthode s&#39;applique un stimulus augmente lentement thermique permettant une estimation précise et reproductible de TNTs avec un minimum, le cas échéant, le stress des animaux.

Détermination rapide du seuil thermique nociceptive chez les rats diabétiques

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity ...

rapid-determination-thermal-nociceptive-threshold-diabetic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

27.4K vues.  Wright State University. Ici, nous décrivons une procédure rapide simple et fiable pour déterminer la température minimale à laquelle des rats ou des souris montrent un comportement nocifensive, C.-à- L' Seuil thermique nociceptive (TNT). Cette méthode s'applique un stimulus augmente lentement thermique permettant une estimation précise et reproductible de TNTs avec un minimum, le cas échéant, le stress des animaux.

Vidéo: Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

Une méthode générale pour l&#39;évaluation d&#39;incubation du désir saccharose chez les rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Recherche

Neurosciences

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.
The Drosophila larva is an established model system to study thermal nociception, a sensory response to potentially harmful temperatures that is evolutionarily conserved across species1,2. The advantages of Drosophila for such studies are the relative simplicity of its nervous system and the sophistication of the genetic techniques that can be used to dissect the molecular basis of the underlying biology4-6 In Drosophila, as in all metazoans, the response to noxious thermal stimuli generally involves a "nocifensive" aversive withdrawal to the presented stimulus7. Such stimuli are detected through free nerve endings or nociceptors and the amplitude of the organismal response depends on the number of nociceptors receiving the noxious stimulus8. In Drosophila, it is the class IV dendritic arborization sensory neurons that detect noxious thermal and mechanical stimuli9 in addition to their recently discovered role as photoreceptors10. These neurons, which have been very well studied at the developmental level, arborize over the barrier epidermal sheet and make contacts with nearly all epidermal cells11,12. The single axon of each class IV neuron projects into the ventral nerve cord of the central nervous system11 where they may connect to second-order neurons that project to the brain.
Under baseline conditions, nociceptive sensory neurons will not fire until a relatively high threshold is reached. The assays described here allow the investigator to quantify baseline behavioral responses or, presumably, the sensitization that ensues following tissue damage. Each assay provokes distinct but related locomotory behavioral responses to noxious thermal stimuli and permits the researcher to visualize and quantify various aspects of thermal nociception in Drosophila larvae. The assays can be applied to larvae of desired genotypes or to larvae raised under different environmental conditions that might impact nociception. Since thermal nociception is conserved across species, the findings gleaned from genetic dissection in Drosophila will likely inform our understanding of thermal nociception in other species, including vertebrates.

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.

Méthodes locales et globales de l&#39;évaluation de nociception thermique dans<em&gt; Drosophila</em&gt; Les larves

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of ...

Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular mechanisms underlying both phenomena are not well understood and their elucidation should benefit from the study of animal models and from the design of appropriate experimental protocols. 
We describe here a methodological approach for inducing, recording and quantifying morphine-induced hyperalgesia as well as for evidencing analgesic tolerance, using the tail-immersion and tail pressure tests in wild-type mice. As shown in the video, the protocol is divided into five sequential steps. Handling and habituation phases allow a safe determination of the basal nociceptive response of the animals. Chronic morphine administration induces significant hyperalgesia as shown by an increase in both thermal and mechanical sensitivity, whereas the comparison of analgesia time-courses after acute or repeated morphine treatment clearly indicates the development of tolerance manifested by a decline in analgesic response amplitude. This protocol may be similarly adapted to genetically modified mice in order to evaluate the role of individual genes in the modulation of nociception and morphine analgesia. It also provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to improve opiate analgesic efficacy.

We describe a protocol to examine the development of opioid-induced hyperalgesia and tolerance in mice. Based on the measurement of thermal and mechanical nociceptive responses of na&#239;ve and morphine-treated animals, it allows to quantify the increase in pain sensitivity (hyperalgesia) and decrease in analgesia (tolerance) associated with chronic opiate administration.

L&#39;évaluation de la tolérance induite par la morphine hyperalgésie et analgésique chez la souris utilisant thermiques et mécaniques nociceptifs modalités

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

Détermination de l&#39;activité locomotrice spontanée,<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin (5-hydroxytryptamine; 5-HT) syndrome. This hypothesis can be tested using in situ hybridization to detect the serotonin 5-HT2A receptor gene htr2a. In the past, such procedures, utilizing radioactive riboprobe, were difficult because of the complicated workflow that needs several days to perform and the added difficulty that the technique required the use of fresh frozen tissues maintained in an RNase-free environment. Recently, the development of short oligonucleotide probes has simplified in situ hybridization procedures and allowed the use of paraformaldehyde-prefixed brain sections, which are more widely available in laboratories. Here, we describe a detailed protocol using non-radioactive oligonucleotide probes on the prefixed brain tissues. Hybridization probes used for this study include dapB (a bacterial gene coding for dihydrodipicolinate reductase), ppiB (a housekeeping gene coding for peptidylprolyl isomerase B), and htr2a (a serotonin gene coding for 5-HT2A receptors). This method is relatively simply, cheap, reproducible and requires less than two days to complete.

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

This protocol describes a rapid and simplified in situ hybridization method ideal forparaformaldehyde-prefixed brain, thus reducing the need for prolonged complex steps while using fresh frozen tissues. The method is validated using the identification of the serotonin 5-HT2A receptor gene htr2a in rats.

Rapid<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridation utilisant sondes oligonucléotidiques sur Brain Paraformaldéhyde préfixée de rats avec syndrome sérotoninergique

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Measurement &amp; Analysis of the Temporal Discrimination Threshold Applied to Cervical Dystonia

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being asynchronous (typically 30-50 ms). It has been shown to be abnormal (prolonged) in neurological disorders, including cervical dystonia, a phenotype of adult onset idiopathic isolated focal dystonia. The TDT is a quantitative measure of the ability to perceive rapid changes in the environment and is considered indicative of the behavior of the visual neurons in the superior colliculus, a key node in covert attentional orienting. This article sets out methods for measuring the TDT (including two hardware options and two modes of stimuli presentation). We also explore two approaches of data analysis and TDT calculation. The application of the assessment of temporal discrimination to the understanding of the pathogenesis of cervical dystonia and adult onset idiopathic isolated focal dystonia is also discussed.

Methods for the measurement and analysis of the temporal discrimination threshold are presented, and its application to the study of the pathogenesis of cervical dystonia are discussed.

De mesure et d’analyse de la Discrimination temporelle du seuil appliqué à la dystonie cervicale

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being ...

Rapid and Specific Immunomagnetic Isolation of Mouse Primary Oligodendrocytes

The efficient and robust isolation and culture of primary oligodendrocytes (OLs) is a valuable tool for the in vitro study of the development of oligodendroglia as well as the biology of demyelinating diseases such as multiple sclerosis and Pelizaeus-Merzbacher-like disease (PMLD). Here, we present a simple and efficient selection method for the immunomagnetic isolation of stage three O4+ preoligodendrocytes cells from neonatal mice pups. Since immature OL constitute more than 80% of the rodent-brain white matter at postnatal day 7 (P7) this isolation method not only ensures high cellular yield, but also the specific isolation of OLs already committed to the oligodendroglial lineage, decreasing the possibility of isolating contaminating cells such as astrocytes and other cells from the mouse brain. This method is a modification of the techniques reported previously, and provides oligodendrocyte preparation purity above 80% in about 4 h.

We describe the immunomagnetic isolation of primary mouse oligodendrocytes, which allows the rapid and specific isolation of the cells for in vitro culture.

Isolation de Immunomagnetic rapide et spécifique de souris primaire Oligodendrocytes

The efficient and robust isolation and culture of primary oligodendrocytes (OLs) is a valuable tool for the in vitro study of the development of ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided here is a protocol for successfully establishing a rat model of acute pontine infarction. Rats weighing about 250 g are used, and a probe with an insulated sheath is injected into the pons using a stereotaxic apparatus. A lesion is produced by the electrical stimulation with a single pulse. The Longa score, Berderson score, and beam balance test are used to assess neurological deficits. Additionally, the adhesive-removal somatosensory test is used to determine sensorimotor function, and the limb placement test is used to evaluate proprioception. MRI scans are then used to assess the infarction in vivo, and TTC staining is used to confirm the infarction in vitro. Here, a successful infarction is identified that is located in the anterolateral basis of the rostral pons. In conclusion, a new method is described to establish an acute pontine infarction rat model.

Presented here is a protocol for establishing acute pontine infarction in a rat model via electrical stimulation with a single pulse.

Établissement de l’infarctus aigu des pontines chez les rats par stimulation électrique

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) occlusion of the middle cerebral artery (MCA) using a catheter. This generally accepted technique, however, has some limitations, thereby limiting its extensive use. Stroke induction by this method is often characterized by high variability in the localization and size of the ischemic area, periodical occurrences of hemorrhage, and high death rates. Also, the successful completion of any of the transient or permanent procedures requires expertise and often lasts for about 30 minutes. In this protocol, a laser irradiation technique is presented that can serve as an alternative method for inducing and studying brain injury in rodent models.
When compared to rats in the control and MCAO groups, the brain injury by laser induction showed reduced variability in body temperature, infarct volume, brain edema, intracranial hemorrhage, and mortality. Furthermore, the use of a laser-induced injury caused damage to the brain tissues only in the motor cortex unlike in the MCAO experiments where destruction of both the motor cortex and striatal tissues is observed.
Findings from this investigation suggest that laser irradiation could serve as an alternative and effective technique for inducing brain injury in the motor cortex. The method also shortens the time for completing the procedure and does not require expert handlers.

The protocol presented here shows a technique to create a rodent model of brain injury. The method described here uses laser irradiation and targets motor cortex.

Lésion cérébrale induite au laser dans le cortex moteur des rats

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Induction of Diffuse Axonal Brain Injury in Rats Based on Rotational Acceleration

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large percentage of TBI patients requiring hospitalization. DAI involves widespread axonal damage from shaking, rotation or blast injury, leading to rapid axonal stretch injury and secondary axonal changes that are associated with a long-lasting impact on functional recovery. Historically, experimental models of DAI without focal injury have been difficult to design. Here we validate a simple, reproducible and reliable rodent model of DAI that causes widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

This protocol validates a reliable, easy-to-perform and reproducible rodent model of brain diffuse axonal injury (DAI) that induces widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

Induction de lésion diffuse du cerveau axonal chez les rats basés sur l’accélération rotationnelle

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large ...