Sources de financement: ce travail soutenu par les National Institutes of Health des subventions, des HL067177 HL096845 et P01AI084853 à DSW

1. Procédure des donateurs <ol><li> Toutes les interventions chirurgicales ont été effectuées en utilisant une technique stérile. Pas d&#39;antibiotiques sont donnés à la fois les donateurs et les souris receveuses. </li><li> L&#39;induction de l&#39;anesthésie de la souris donneuse est initiée avec 5% isoflurane. </li><li> La souris est orotracheally intubé avec un cathéter de calibre 20 par voie intraveineuse, puis placé sur un ventilateur de rongeurs, en utilisant 100% d&#39;oxygène à un débit de 125 respirations par minute et environ 0,5 ml de volume de marée (2% de son poids corporel). </li><li> L&#39;anesthésie est maintenue avec l&#39;isoflurane 1-2% par inhalation. </li><li> La souris donneuse est placé dans une position couchée, préparée avec de l&#39;alcool 70%. </li><li> Laparosternotomy est effectuée comme une ligne médiane et incision transversale combinée. </li><li> Héparine à 100 u / kg est injecté dans la veine cave inférieure (VCI), juste en dessous du foie. </li><li> Le diaphragme est coupée le long de la côtière d&#39;attache ventral vers la colonne vertébrale, et la cavité thoracique est exposée en coupant les deux côtés de la poitrinemur pour le cou. </li><li> Après incision de la veine cave inférieure au niveau de la membrane, l&#39;appendice auriculaire droit est coupé et les poumons rincée avec 2 ml de refroidissement (4 ° C) lactate de Ringer pour l&#39;injection et 0,1 ml d&#39;héparine par une incision transversale au niveau de la racine de l&#39;artère pulmonaire ( PA) du tronc. </li><li> Arrêter la ventilation moins les deux tiers de l&#39;inflation en fin d&#39;expiration, le bloc cœur-poumon est excisé et stocké sur de la glace (4 ° C). </li><li> Le poumon gauche du donneur est préparé pour le destinataire par l&#39;attachement des poignets. Le ligament pulmonaire est incisé jusqu&#39;à la veine pulmonaire (PV). Le hile est mis en évidence en enlevant l&#39;œsophage et l&#39;aorte. </li><li> Identifier l&#39;Autorité palestinienne, situé à l&#39;aspect le plus crânienne du hile, ainsi que les bronches principales ci-jointes (Br). Disséquer soigneusement l&#39;Autorité palestinienne de la bronche. </li><li> Manchette PA est faite à partir d&#39;un de calibre 24 par voie intraveineuse (IV) du cathéter et couper à 0,5 mm de longueur avec une extension de 0,7 mm. </li><li> Toute la surface de la manchette est ensuite abrasée pour faciliter anastomosetoxoplasmose. </li><li> La manchette pour la bronche est dérivé d&#39;un cathéter de calibre 20 IV, et couper une longueur de 1,0 mm avec une extension de 0,7 mm. </li><li> En utilisant les mêmes matériaux, le brassard PV varie avec le poids de la souris donneuse. Plus précisément, pour les souris 24-27 grammes de la taille du brassard est de calibre 22, 0,7 mm de longueur avec une extension de 0,7 mm. Pour les souris pesant 27-32 grammes, les études ont utilisé un cathéter de calibre 20 qui est de 0,7 mm de longueur avec une extension de 0,7 mm. </li><li> Les poignets sont insérées dans les extrémités distales de la PA, PV et Br et fixé avec un fil de suture 9-0. </li><li> Le poumon d&#39;un donneur est vidé et lavé avec une solution saline stérile avec de l&#39;héparine stérile avant l&#39;entreposage. Le poumon d&#39;un donneur est ensuite enveloppé de gaze stérile trempée dans une solution saline stérile sur la glace (4 ° C), qui maintient le poumon très propre et stérile. </li><li> Dispositif de serrage microvaisseaux est placé sur la bronche pour empêcher l&#39;entrée lactate de Ringer dans les voies respiratoires. </li></ol> 2. Procédure bénéficiaire <ol><li> Induction de l&#39;anesthésieanesthésie et de ventilation mécanique sont les mêmes que celles décrites ci-dessus pour le donateur. </li><li> La paroi thoracique gauche est rasée et avec de l&#39;alcool 70% et le champ opératoire est drapée. </li><li> Une incision de thoracotomie est faite dans l&#39;espace intercostal gauche troisième, qui s&#39;étend de l&#39;incision dorsale près de la colonne vertébrale, et une pince microvaisseaux placé sur les vaisseaux pulmonaires gauches et des bronches adjacentes au cœur. Vous pouvez voir PA à l&#39;aspect du crâne, PV à l&#39;extrémité caudale du hile et Br entre eux. </li><li> En utilisant une légère traction sur la pince hémostatique de provoquer des tensions doux sur la PA, Br et PV, le poumon gauche est sorti de la cavité thoracique, tout en laissant les structures hilaires centrales serré. </li><li> Le PA, PV et Br sont isolés par dissection suivie en plaçant un fil de suture 9-0 positionné de façon lâche autour du PA, PV et Br. </li><li> Après dissection de la PA complètement de sa gaine adventice, une petite incision transversale d&#39;environ un quart de la circonférence de la cuve estfaite dans la paroi antérieure, laissant la poursuite de la partie dorsale de l&#39;artère intacte. </li><li> Le poumon d&#39;un donneur, enveloppé dans le froid, la gaze de coton imbibé de lactate de Ringer et préparé comme décrit ci-dessus, est ensuite placé dans la cavité thoracique, et les poignets inséré dans le récipient PA, PV et Br et sécurisé avec 9-0 suture. </li><li> Le clampage hilaire est supprimé permettant de reperfusion et de ventilation. </li><li> Après avoir positionné le poumon greffé de nouveau dans le thorax du destinataire, l&#39;incision de thoracotomie est fermée à l&#39;aide d&#39;une suture 5-0. </li><li> La souris est autorisé à remettre de l&#39;anesthésie. La buprénorphine (de 0,05 à 0,15 mg / kg) est administré immédiatement après la chirurgie, et pour toutes les 8 heures pour 2-3 jours post-opératoires. </li></ol> 3. Les résultats représentatifs Notre expérience nous a appris qu&#39;il nécessite plusieurs mois de pratique répétée pour devenir compétent dans le modèle de transplantation de la souris du poumon. Après de compétence est atteint, nous achieved un taux de survie de 96% (96/100 chirurgies consécutives) périopératoire avec les décès survenus dans les sept jours après l&#39;opération. Deux décès étaient dus à une hémorragie qui a commencé pendant l&#39;opération, et pneumothraces étaient la cause du décès dans les deux autres souris. Pour toutes les procédures, le temps d&#39;ischémie chaude était 14,32 ± 3,14 minutes, et le temps d&#39;ischémie froide était 58,51 ± 18,06 minutes. Trois groupes de orthotopiques greffe de poumon ont été étudiés: isograft: C57BL / 6 → C57BL / 6, allogreffe: C57BL/10 → C57BL / 6 et C57BL / 6 → C57BL/10. Nous avons utilisé uniquement chez les souris mâles, mais notre technique peut aussi être appliqué à des souris femelles, car il n&#39;y a pas de différence significative anatomique entre les sexes. Classement de rejet autopsie n&#39;a été pratiquée en aveugle en utilisant des critères standard pour la transplantation du poumon clinique 7 (Tableau 1). Alors que nous avons observé le rejet légère ou pas isograft (C57BL / 6 → C57BL / 6), les deux combinaisons d&#39;allogreffes développé sociétésrable rejet aigu ou chronique (figure 1). En revanche, OB était significativement plus fréquente dans le C57BL/10 → C57BL / 6 que C57BL / 6 → C57BL/10 groupe par day28 (tableau 1). <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> C57BL / 6 → C57BL / 6 </td><td> C57BL/10 → C57BL / 6 </td><td> C57BL / 6 → C57BL/10 </td><td> Valeur de P </td></tr><tr><td> Rejet pathologie &quot;A&quot; note au jour 28 </td><td> 0,67 ± 0,89 </td><td> * 3,33 ± 0,82 </td><td> * 3,29 ± 0,76 </td><td> * P&gt; 0,05 </td></tr><tr><td> OB / souris au jour Total des 21 et 28 </td><td> 0/24 (0%) </td><td> ** 14/34 (42,1%) </td><td> ** 2/16 (12,5%) </td><td> ** P &lt;0,05 </td></tr></tbody></table> Tableau 1. Scores histologiques de rejet aigu et la prévalence de la greffe de la bronchiolite oblitérante après. Notation de rejet aigu (&quot;A&quot; Scores) par la norme crisetères, comme décrit dans les résultats représentatifs. Les données représentent la moyenne ± écart-type de &quot;A&quot; scores à la transplantation jours après 28. Les données représentent la quantité et le pourcentage de souris de chaque groupe qui se sont développées OB aux jours 21 et 28 suivant la transplantation. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3947/3947fig1.jpg" /> Figure 1. Des résultats macroscopiques et histopathologiques à 28 jours la transplantation du poumon après. Groupe 1A représentent les résultats macroscopiques et H &amp; E du poumon Isograft teinté et le poumon droit naïf. 1B et 1C Groupe représente H &amp; E et de Masson trichrome teinté BL/10 allogreffe du poumon transplanté dans la souris destinataire BL / 6, qui a développé OB OB et non, respectivement. La flèche blanche dans 1B identifie des lésions de l&#39;OB. 1D Groupe montre une allogreffe du poumon BL / 6 transplantées dans BL/10 destinataire de la souris. Dépannage principale au cours de la procédure sont les suivantes. <ol><li> Trouble flux sanguin: poumon d&#39;un donneur Flush jusqu&#39;aula couleur devient de couleur blanche. L&#39;utilisation de la pression excessive pourrait provoquer un œdème pulmonaire. Mais ne poussez pas trop pour éviter l&#39;œdème après la transplantation. </li><li> Difficulté d&#39;insertion du brassard à la donneuse: S&#39;assurer que le système vasculaire est d&#39;une longueur suffisante et sans joints les tissus adipeux et conjonctif. </li><li> Saignement au site anastomotique: Utiliser des embouts de Q à appliquer une pression au site affecté pendant environ 5 minutes. </li><li> Destinataire PA obstruction d&#39;écoulement du sang: Généralement provoquée par la torsion de la manchette au cours d&#39;insertion. Si l&#39;air est observée au sein de l&#39;Autorité palestinienne, puis refaire de l&#39;anastomose est nécessaire. </li><li> Difficile anastomose PV: Membrane de PV est très mince et facilement des larmes. Sélectionnez la taille du brassard appropriée et insérez-le droit au PV du destinataire très doucement. </li><li> Récipiendaire PV obstruction du débit sanguin: Assurez-vous que la position et la direction du brassard. Relâchez la compression de la coiffe des bronches. </li><li> Pneumothorax: Cela peut être causé par la perforation bronchique soit en raison de manipulation des voies respiratoires, ou de perforation de la surface du poumon dû à un traumatisme associé à la procédure de transplantation. La première est traitée avec la fermeture chirurgicale du trou dans la paroi des voies aériennes, et ce dernier est traité par la fuite surjet sur la surface du poumon à l&#39;aide 10-0 fil de nylon. </li></ol>

<ol>
	<li>Asimacopoulos, P. J., Molokhia, F. A., Pegg, C. A., Norman, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+transplantation+in+the+rat.">Lung transplantation in the rat.</a> Transplant Proc. 3, 583-585 (1971).</li><li>Yoshida, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+technique+of+experimental+lung+transplantation+in+rabbits.">Surgical technique of experimental lung transplantation in rabbits.</a> Ann. Thorac. Cardiovasc. Surg. 11, 7-11 (2005).</li><li>McDyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+and+murine+obliterative+bronchiolitis+in+transplant.">Human and murine obliterative bronchiolitis in transplant.</a> Proc. Am. Thorac. Soc. 4, 37-43 (2007).</li><li>Sato, M., Keshavjee, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+research:+animal+models+of+obliterative+bronchiolitis+after+lung+transplantation.">Translational research: animal models of obliterative bronchiolitis after lung transplantation.</a> Am. J. Transplant. 9, 1981-1987 (2009).</li><li>Okazaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am. J. Transplant. 7, 1672-1679 (2007).</li><li>Fan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralizing+IL-17+Prevents+Obliterative+Bronchiolitis+in+Murine+Orthotopic+Lung+Transplantation.">Neutralizing IL-17 Prevents Obliterative Bronchiolitis in Murine Orthotopic Lung Transplantation.</a> Am. J. Transplant. 11, 911-922 (2011).</li><li>Stewart, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revision+of+the+1996+working+formulation+for+the+standardization+of+nomenclature+in+the+diagnosis+of+lung+rejection.">Revision of the 1996 working formulation for the standardization of nomenclature in the diagnosis of lung rejection.</a> J. Heart Lung Transplant. 26, 1229-1242 (2007).</li><li>Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a cuff technique.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 97, 578-581 (1989).</li><li>Jungraithmayr, W. M., Korom, S., Hillinger, S., Weder, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+orthotopic,+single-lung+transplantation.">A mouse model of orthotopic, single-lung transplantation.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 137, 486-491 (2009).</li><li>Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+vascularized+right+lung+transplantation+in+the+mouse.">Orthotopic vascularized right lung transplantation in the mouse.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. , (2010).</li></ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Transplantation pulmonaire orthotopique chez la souris est difficile en raison des exigences microchirurgicales et de la fragilité extrême de tissus. Introduction de la technique du brassard a permis pour l&#39;utilisation généralisée de la transplantation pulmonaire orthotopique chez le rat 8. Cela est devenu la base pour le développement du modèle de transplantation pulmonaire orthotopique chez la souris dans notre laboratoire. Chez les souris et les rats, contrairement aux humains, le poumon gauche contient un seul lobe et ne représente que 25% de la masse pulmonaire totale. Cela rend la transplantation pulmonaire gauche seule possible dans le modèle murin, sans la nécessité d&#39;un système d&#39;assistance circulatoire. Nos interventions chirurgicales préliminaires ont révélé que la ventilation et la perfusion du poumon transplanté était fortement dépendante de la taille de PV anastomose. Spécifique taille PV brassard anastomotique ont été utilisés pour correspondre à des bailleurs de fonds et les bénéficiaires tel que rapporté 9. Manchette inapproprié dimensionnement a résulté en une atélectasie du poumon transplanté ou déhiscence de la ANAST PVomosis. Okazaki et al ont rapporté l&#39;utilisation de ligature des vaisseaux combinée et la coupure de 5 bronches. Dans l&#39;étude actuelle, nous utilisons un clip à anévrisme de toutes les structures hilaires, que nous proposons peut raccourcir le temps d&#39;ischémie chaude. Une limitation de la greffe du poumon gauche orthotopique dans le modèle murin est que les animaux peuvent survivre après bénéficiaires allo-immune à médiation nécrose de leurs allogreffes 5. Par conséquent, les études de survie ne sont pas réalisables et d&#39;évaluation du greffon dépend sur l&#39;examen histologique du poumon transplanté 10. En utilisant cette technique, nous avons développé un modèle préclinique de bronchiolite oblitérante chez la souris. Plus précisément, la souris donneuse est C57BL/10 et le destinataire est C57BL / 6. Ceci suggère le rôle d&#39;un mineur, et non pas les grands, les antigènes d&#39;histocompatibilité dans la pathogenèse bronchiolite oblitérante 6. En outre, nous avons rapporté la neutralisation de l&#39;IL-17 empêche la bronchiolite oblitérante dans le modèle murin. Ce modeL représente un outil de recherche novateur pour l&#39;examen de la transplantation pulmonaire et à la promotion des transplantations pulmonaires cliniques.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom de l&#39;équipement </td><td> Entreprise </td><td> Catalogue nombre </td></tr><tr><td> Zeiss OPMI 6SFC-1880 </td><td> Prescott Inc </td><td> PMZ014 </td></tr><tr><td> Ventilateur rongeurs Harvard </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 55-7058 </td></tr><tr><td> De calibre 20 cathéter intraveineux </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 100510D </td></tr><tr><td> 22-jauge de cathéter IV </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 081015S </td></tr><tr><td> 24 jauge de cathéter IV </td><td> Terumo Medical Corporation </td><td> 100522A </td></tr><tr><td> 9/0 Meth Virgin Blue Silk </td><td> Ashaway Ligne &amp; Ficelles Mfg CO </td><td> MBVS-90 </td></tr><tr><td> 10-0 Alcon suture chirurgicale </td><td> Alcon Laboratories, Inc </td><td> 8065-192101 </td></tr><tr><td> Black 5-0/18inches soie tressée </td><td> Henry Schein </td><td> M652630 </td></tr><tr><td> Héparine sodique de 1000 unités / ml </td><td> APP Pharmaceuticals </td><td> 407156 </td></tr><tr><td> Solution Betadine </td><td> Purdue produit </td><td> 67618-150 </td></tr><tr><td> Lactate de Ringer injection </td><td> Hospira </td><td> NDC 0409-7953-03 </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> La souche de la souris </td><td> Vendeur </td><td> Âge, Poids </td><td> Sexe, Commentaires </td></tr><tr><td> C57BL/10 </td><td> Harlan Sprague-Dawley </td><td> 8-12 semaines, 25-30g </td><td> Homme, des donateurs </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> Harlan Sprague-Dawley </td><td> 8-12 semaines, 25-30g </td><td> Homme, Donateur ou bénéficiaire </td></tr></tbody></table> Tableau 2. Table des souris, SPECIFréactifs IC et de l&#39;équipement.

development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation

Transplantation pulmonaire orthotopique chez le rat a été d&#39;abord rapporté par Asimacopoulos et collègues en 1971 1. Actuellement, cette méthode est bien acceptée et normalisée, non seulement pour l&#39;étude d&#39;allo-rejet, mais aussi entre les souches syngéniques pour examiner les mécanismes de l&#39;ischémie-reperfusion après transplantation pulmonaire. Bien que l&#39;application du rat et un autre modèle animal de grande taille 2 a contribué de manière significative à l&#39;élucidation de ces études, la portée de ces enquêtes est limitée par la rareté des huitièmes de finale et les rats transgéniques. En raison de plus de traitements efficaces pour la bronchiolite oblitérante, la principale cause de décès chez les patients transplantés pulmonaires, il ya eu une recherche intensive de modèles pré-cliniques qui répliquent la bronchiolite oblitérante. Le modèle d&#39;allogreffe trachéale est la plus largement utilisée et peut la reproduire quelques-unes des caractéristiques histopathologiques de la bronchiolite oblitérante 3. Toutefois, l&#39;absence d&#39;un vasculat intacteure sans aucun lien avec la conduite des voies respiratoires du destinataire, et incomplètes caractéristiques pathologiques de la bronchiolite oblitérante limiter l&#39;utilité de ce modèle 4. Contrairement à la transplantation d&#39;autres organes solides, des greffes vascularisées poumon de souris ont récemment été signalés par Okazaki et ses collègues pour la première fois en 2007 5. Appliquant les principes de base de la transplantation pulmonaire chez le rat, notre laboratoire a lancé le modèle en utilisant la bronchiolite oblitérante mineures histoincompatible antigènes murins orthotopiques transplantations pulmonaires unique gauche, qui permet l&#39;étude plus approfondie de l&#39;immunopathogenèse bronchiolite oblitérante 6.

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Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Bronchiolite oblitérante est le principal obstacle à la survie à long terme des greffés du poumon et de l&#39;absence d&#39;un modèle robuste préclinique empêche l&#39;examen immunopathogenèse bronchiolite oblitérante. Contrairement à d&#39;autres transplantations d&#39;organes solides, vascularisée de la souris la transplantation pulmonaire n&#39;a été que récemment mis au point. Ici, nous montrons notre modèle développé indépendamment bronchiolite oblitérante après murin orthotopique simple transplantation pulmonaire.

Développement de la bronchiolite oblitérante dans un modèle murin de transplantation pulmonaire orthotopique

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

20.1K vues.  Indiana University School of Medicine. Bronchiolite oblitérante est le principal obstacle à la survie à long terme des greffés du poumon et de l'absence d'un modèle robuste préclinique empêche l'examen immunopathogenèse bronchiolite oblitérante. Contrairement à d'autres transplantations d'organes solides, vascularisée de la souris la transplantation pulmonaire n'a été que récemment mis au point. Ici, nous montrons notre modèle développé indépendamment bronchiolite obli...

Vidéo: Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Orthotopique aortique transplantation: un modèle de rat pour étudier le développement de la vasculopathie chronique

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Recherche

Médecine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Un modèle orthotopique de cancer de la vessie murin

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat liver transplantation in 1979 by Kamada et al.3, this model has remained the gold standard despite various proposed alternative techniques4. Nevertheless, its broader use is limited by its steep learning curve5.
In this video paper, we show a simple and easy-to-establish revision of Kamada's two-cuff technique. The suprahepatic vena cava anastomosis is performed manually with a running suture, and the vena porta and infrahepatic vena cava anastomoses are performed utilizing a quick-linker cuff system6. Manufacturing the quick-linker kit is shown in a separate video paper.

We present an easy-to-establish revision of the classical two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.

Une transplantation hépatique orthotopique chez le rat

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as studies on graft preservation and ischemia-reperfusion injury 1,2, immunological responses 3,4, hemodynamics 5,6, and small-for-size syndrome 7. The rat OLT is among the most difficult animal models in experimental surgery and demands advanced microsurgical skills that take a long time to learn. Consequently, the use of this model has been limited. Since the reliability and reproducibility of results are key components of the experiments in which such complex animal models are used, it is essential for surgeons who are involved in rat OLT to be trained in well-standardized and sophisticated procedures for this model.
While various techniques and modifications of OLT in rats have been reported 8 since the first model was described by Lee et al. 9 in 1973, the elimination of the hepatic arterial reconstruction 10 and the introduction of the cuff anastomosis technique by Kamada et al. 11 were a major advancement in this model, because they simplified the reconstruction procedures to a great degree. In the model by Kamada et al., the hepatic rearterialization was also eliminated. Since rats could survive without hepatic arterial flow after liver transplantation, there was considerable controversy over the value of hepatic arterialization. However, the physiological superiority of the arterialized model has been increasingly acknowledged, especially in terms of preserving the bile duct system 8,12 and the liver integrity 8,13,14.
In this article, we present detailed surgical procedures for a rat model of OLT with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft after ex vivo liver resection. The reconstruction procedures for each vessel and the bile duct are performed by the following methods: a 7-0 polypropylene continuous suture for the supra- and infrahepatic vena cava; a cuff technique for the portal vein; and a stent technique for the hepatic artery and the bile duct.

Orthotopic liver transplantation in rats is an indispensable experimental model for biomedical research. Here we present our surgical procedures for orthotopic rat liver transplantation with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft.

Interventions chirurgicales pour un modèle de rat de transplantation hépatique orthotopique partielle avec reconstruction artérielle hépatique

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

Murin de transplantation de la cornée: Un modèle pour étudier la forme la plus courante de la transplantation d&#39;organes solides

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

Méthode de isolé<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Lung perfusion dans un modèle rat: Leçons tirées élaboration d&#39;un programme EVLP Rat

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

Pré-clinique Orthotopique modèle murin de cancer de la prostate humaine

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

Ouvrir trachéotomie acide gastrique Aspiration modèle murin de lésion pulmonaire aiguë Résultats dans Maximal aiguë non létaux Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

Un modèle porcin préclinique de transplantation orthotopic de coeur

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

Complications réduites après reconnexion artérielle dans un modèle de rat de transplantation orthotopique de foie

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...