CT a été soutenu par le Fonds national suisse de la science (SCORE subvention 3232230-126233). L&#39;étude a été soutenue par la Fondation Artères, le Astellas Foundation Europe et la Fondation Boninchi.

1. Opération des donateurs <ol><li> Anesthésier rats mâles pesant 200 ± 20 grammes avec de l&#39;isoflurane sur le cône masque (3% pour l&#39;induction, 2% au cours de l&#39;opération, 1 flux d&#39;air l / min, FiO2 70%). </li><li> Effectuer une laparotomie médiane et grande transversale et cautériser les vaisseaux épigastriques, des deux côtés. </li><li> Couper le ligament falciforme, et de séparer la veine diaphragmatique gauche de la veine cave suprehepatic. Enfin, il faut diviser la veine diaphragmatique entre deux ligatures de soie 7-0. </li><li> Couper le triangle à gauche et les ligaments gastro-hépatiques. </li><li> Diviser le ligament hépato-oesophagien et l&#39;artère entre 7-0 ligatures (coagulation est une alternative valable). </li><li> Isoler la veine cave sous-hépatique jusqu&#39;à la veine rénale gauche. Séparer la veine rénale droite à partir des tissus environnants, et le diviser entre 10-0 et une ligature 7-0, sur ses extrémités proximale et distale, respectivement. </li><li> Diviser la veine surrénale droite entre 7-0 Ligatures libre et le foie de ses ligaments postérieurs en coupant sous une légère traction. </li><li> Isoler la veine gastro et le diviser entre 10-0 et une ligature 7-0, sur ses extrémités proximale et distale, respectivement. </li><li> Diviser l&#39;artère hépatique propre entre 7-0 liens. </li><li> Isoler la veine duodéno-pancréatique et divisée entre un 10-0 et une ligature 7-0, sur son extrémité proximale et distale, respectivement. </li><li> Insérez un 22G, 3,5 mm stent dans le canal cholédoque en pratiquant une petite incision à une distance de 1 cm à partir du hile hépatique. Fixez le stent en position avec une ligature 7-0. </li><li> Injecter 10 UI d&#39;héparine, dilué dans 1 ml de solution saline normale, à travers la veine dorsale du pénis. </li><li> Cathétériser la veine porte (autant que possible à partir du hile) avec une aiguille 21G et doucement rincer le foie avec 20 ml de Ringer lactate à froid (ou d&#39;autres solutions de conservation). Dans le même temps, couper la veine cave en dessous des veines rénales afin de permettre une outfl adéquateow. Perfusion du foie froid devrait durer entre une et deux minutes. </li><li> Couper la veine porte en dessous de la veine duodéno-pancréatique. </li><li> Couper le canal cholédoque distal de la ligature autour de l&#39;endoprothèse. </li><li> Remplissez l&#39;incision de la veine cave sous-hépatique. </li><li> Couper le sus-hépatique veine cave écrémé à la membrane et retirer le foie. </li><li> Placez le foie dans un bassin rempli avec du lactate de Ringer à froid et de jeter le bassin sur une patinoire. </li></ol> 2. Préparation du greffon <ol><li> Insérez la veine porte dans sa manchette, puis retourner la cuve sur le bord d&#39;exposer l&#39;intima. Fixez le segment éversée sur le brassard avec une ligature 7-0. </li><li> Répéter la même opération sur la veine cave sous-hépatique. </li><li> Positionner un collier de micro-(4-6 mm de longueur) sur la partie proximale de la veine cave sous-hépatique. Cette opération évite la perte de sang après la reperfusion portail. </li><li> Renverser le foie et insérez deux prolène 8-0 suturesau niveau des bords latéraux opposés de la veine cave sus-hépatique, de l&#39;extérieur vers l&#39;intérieur. </li><li> Conserver le greffon (immergés dans une solution de Ringer lactate) dans le réfrigérateur à 0-4 ° C. </li></ol> 3. Opération bénéficiaire <ol><li> Anesthésier rats mâles pesant 200 ± 20 grammes avec de l&#39;isoflurane sur le cône masque (3% pour l&#39;induction, 2% au cours de l&#39;opération, 1 flux d&#39;air l / min, FiO2 70%) et de garder au chaud sur un coussin. Fait à noter, poids bénéficiaires et des donateurs doit être adapté (± 40 grammes). </li><li> Injecter 10 ml de solution saline normale sous-cutanée et de 0,03 g de pipéracilline / tazobactam par voie intramusculaire avant la laparotomie. </li><li> Effectuer une ligne médiane xipho-pubienne laparotomie. </li><li> Inverser le processus xiphoïde avec une pince auto-statiques afin de mieux exposer le foie. </li><li> Couper les ligaments antérieurs et de diviser la veine diaphragmatique gauche entre les deux 7-0 liens. </li><li> Diviser le ligament hépato-oesophagien et l&#39;artère entre les ligatures (7-0 coagulation est une alternative valable). Non montré dans la vidéo (identique au fonctionnement des bailleurs de fonds). </li><li> Isoler la veine cave sous-hépatique jusqu&#39;à la veine rénale droite. </li><li> Diviser la veine surrénale droite entre 7-0 ligatures et gratuitement le foie de ses ligaments postérieurs en coupant sous une légère traction (non montré dans la vidéo (identique au fonctionnement des bailleurs de fonds)). </li><li> Placez une ligature 7-0 autour de la voie biliaire principale, juste en dessous de sa division. Autrement ligature d&#39;un millimètre ci-dessous et couper entre les deux. </li><li> Isoler l&#39;artère hépatique au niveau du hile et de le diviser entre 7-0 ligatures. </li><li> Séparez délicatement branches portales droite et gauche. Faites attention à ne pas endommager l&#39;artère hépatique commune ou de la veine gastro-splénique. </li><li> Positionner la bague de cave autour de la veine cave, crâniale de la veine rénale droite. Ensuite, fixez la paroi du vaisseau à l&#39;anneau en plaçant quatre points cardinaux 9-0 points de suture. </li><li> Répéter la même opération avec la bague de portail sur la veine porte. </li&gt; <li> Injecter 10 UI d&#39;héparine, dilué dans 1 ml de solution saline normale, à travers la veine dorsale du pénis. </li><li> Réglez l&#39;anesthésie sur les 0,25% et la FiO2 à 100%. </li><li> Serrer la veine cave sous-hépatique juste au-dessus de la veine rénale droite, puis serrer la veine porte juste au-dessus de la veine gastro-splénique. Enfin serrer la veine cave sus-hépatique en étant sûr de comprendre au moins 2 mm de la membrane. </li><li> Couper le sus-hépatique veine cave près du parenchyme. </li><li> Couper la gauche et les branches droites portail et diviser le septum entre les deux. </li><li> Couper le sous-hépatique veine cave près du parenchyme, en accordant une attention à ne pas inciser l&#39;un des points de suture préalablement positionnés. Retirer le foie et placer le greffon dans la cavité abdominale. </li><li> Effectuer une anastomose de bout en bout entre la veine sus-hépatique veine du greffon et du receveur. Commencez avec le surjet de la paroi postérieure de gauche à droite, puis continuez sur la paroi antérieure de la droite vers lepi Gardez le fil de suture antérieure lâche jusqu&#39;à la fin afin de permettre un rinçage généreux de la lumière intérieure avant de serrer les extrémités. </li><li> Insérez la branche caudale du approximateur dans la poignée anneau portail, puis insérez la veine porte du greffon dans la fente de la branche crânienne de l&#39;approximation, avec le brassard portail trouver sa position dans la fente. </li><li> Fermez le approximateur, pendant la chasse veine du destinataire porta avec une solution saline normale et permettre le brassard à insérer dans le navire. Fixez la veine du destinataire porta autour de son poignet avec une cravate 7-0 circonférentielle. </li><li> Retirez le approximateur. Ouvrir le clamp sur la veine cave sus-hépatique et la veine porte dans l&#39;ordre: flux de portail est maintenant rétablie. </li><li> Retirer la bague de portail en coupant les 9-0 ligatures avec des ciseaux extra-fines. </li><li> Insérez la branche caudale du approximateur dans la poignée anneau cave, puis insérez la veine cave sous-hépatique du greffon dans la fente de l&#39;crânienne<html> branche de l&#39;approximateur, avec le brassard cave trouver sa position dans la fente. </li><li> Fermez le tout en rinçant sous-hépatique approximateur du destinataire veine cave avec une solution saline normale et permettre le brassard à insérer dans le navire. Fixez la veine cave du receveur autour de son poignet avec une cravate 7-0 circonférentielle. </li><li> Retirez le approximateur. Ouvrez les microclamps sur la veine cave sous-hépatique du greffon et du receveur dans l&#39;ordre: le flux veineux est maintenant rétablie. </li><li> Effectuer une incision partielle du conduit du destinataire cholédoque, appliquer une traction douce vers la tête, et insérez le côté libre du stent préalablement inséré dans la voie biliaire du greffon. Fixez le stent avec un périphérique 7-0 cravate. </li><li> Fermez l&#39;animal par des couches avec 5-0 points de suture. Permettre à l&#39;eau libre et la nourriture de réveil. </li><li> Administrer une analgésie efficace selon les protocoles locaux institutionnels. Une durée minimale de 24 h est recommandé. </li></ol>_content &quot;&gt; A noter: de bout en bout anastomose artère hépatique peut être effectuée, lorsque requis par la conception expérimentale (l&#39;artère n&#39;est pas nécessaire pour la survie à long terme après la transplantation de foie de rat). 4. Les résultats représentatifs La technique décrite pourrait être maîtrisé avec succès par notre équipe après environ 10 chirurgies de formation. Il a permis à 100% à long terme (&gt; 21 jours) de survie de 36 consécutive Lewis à Lewis et Dark Agouti-à-Lewis transplantations, après la période de formation de courte durée (un certain nombre de greffés du foie syngéniques ont été maintenues en vie pendant plus de 12 mois maintenant). Post-syngéniques transplantés jour 1 de la fonction hépatique ont montré aspartate transaminase médiane (AST): 84 U / l (de 51.7 à 92.7) de l&#39;alanine aminotransférase et la médiane (ALT): 172,5 U / l (de 127,5 à 240,2). La phase anhépatique moyenne (de veine porte de serrage de greffer re-perfusion) était de 14 ± 2 min, avec la plus longue étape étant la veine cave sus-hépatique anastomose (en cours d&#39;exécution sAVENIR) le temps de 9 ± 2 min. Le système rapide de liaison a permis le positionnement de 1,55 mm à canon poignets sur veine porte et 2,40 mm à canon poignets sur la veine cave (bénéficiaires pesant 200 ± 20 g). En revanche, lorsque nous avons essayé en utilisant la technique de transplantation Kamada, ils ne pouvaient pas dépasser 1,40 mm et 2,16 mm, respectivement (rats correspondant pour la souche et le poids). Comme le montre la figure 7, l&#39;éditeur de liens rapide anneaux sont conçus pour garder les vaisseaux receveurs sur optimale d&#39;étirement, ce qui permet au minimum étrier et le gaspillage de longueur, ce qui entraîne plus à physiologiques des résultats hémodynamiques. <img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. Mesures Anneaux. <img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2. Mesures Microclamps. <img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig3.jpg" alt="Figure 3" /> Figure 3. Quick-lieur kit. <img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig4.jpg" alt="Figure 4" /> Figure 4. Quick-lieur armé. <img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig5.jpg" alt="Figure 5" /> Figure 5. Quick-lieur fermée. <img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig6.jpg" alt="Figure 6" /> Figure 6. Pince SHVC. <img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig7.jpg" alt="Figure 7" /> Figure 7. Classique vs rapide linker assistée brassard-anastomose hémodynamique. <img src="/files/ftp_upload/4143/4143fig8.jpg" alt="Figure 8" /> Figure 8. Bailleurs de fonds et préparation de la peau du destinataire et de l&#39;incision.

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	<li>Starzl, T. E., Marchioro, T. L., Porter, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+and+clinical+observation+after+homotransplantation+of+the+whole+liver.">Experimental and clinical observation after homotransplantation of the whole liver.</a> Revue internationale d'hepatologie. 15, 1447 (1965).</li><li>Starzl, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+liver+transplantation.">Evolution of liver transplantation.</a> Hepatology. 2, 614S-636S (1982).</li><li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage.">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28, 47 (1979).</li><li>Kashfi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+various+techniques+of+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.">A review of various techniques of orthotopic liver transplantation in the rat.</a> Transplantation proceedings. 37, 185-188 (2005).</li><li>Hori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+and+innovative+techniques+for+liver+transplantation+in+rats:+A+surgical+guide.">Comprehensive and innovative techniques for liver transplantation in rats: A surgical guide.</a> World Journal of Gastroenterology: WJG. 16, 3120 (2010).</li><li>Oldani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+for+rat+liver+transplantation+using+Quick+Linker+system:+a+preliminary+result.">A novel technique for rat liver transplantation using Quick Linker system: a preliminary result.</a> Journal of Surgical Research. 149, 303-309 (2008).</li><li>Nosaka, T., Bowers, J. L., Cay, O., Clouse, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+complications+after+orthotopic+liver+transplantation+in+rats.">Biliary complications after orthotopic liver transplantation in rats.</a> Surg. Today. 29, 963-965 (1999).</li><li>Li, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+incidence+of+biliary+complications+in+rat+liver+transplantation:+can+we+avoid+it.">High incidence of biliary complications in rat liver transplantation: can we avoid it.</a> World J. Gastroenterol. 17, 3140-3144 (2011).</li><li>Peng, Y., Gong, J. P., Yan, L. N., Li, S. B., Li, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+two-cuff+technique+for+orthotopic+liver+transplantation+in+rat.">Improved two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.</a> Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int. 3, 33-37 (2004).</li><li>Urata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+survival+in+rat+liver+transplantation+with+extended+cold+preservation:+role+of+portal+vein+clamping+time.">Decreased survival in rat liver transplantation with extended cold preservation: role of portal vein clamping time.</a> Hepatology. 28, 366-373 (1998).</li></ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Le modèle de rat présente une transplantation du foie peut être facilement établie. Dans notre expérience, quelques points clés aider à minimiser le risque de décès (≤ 20%). Décès précoces, survenant dans les trois premières heures de reperfusion, sont le plus souvent due à un infarctus de l&#39;intestin, comme une conséquence d&#39;un portail à long serrage. Il est donc recommandé de garder la phase anhépatique dans la limite idéale de 15 minutes (20 minutes encore acceptable). Centrale embolie gazeuse peut aussi être une cause de mort subite et il est obligatoire de vider toutes les veines avant anastomose. Les décès survenus entre le premier jour postopératoire et trois sont souvent dues à une insuffisance hépatique ou d&#39;une thrombose de la veine cave. Il faut donc éviter toute greffe agressive rinçage avant l&#39;explantation chez le donneur (nous rincer avec 20 ml pendant environ 60 secondes) et assurer une conservation appropriée à froid (immersion totale dans 0-4 ° C une solution de lactate de Ringer). Le risque de thrombosepeut être diminué en réduisant au minimum la manipulation de l&#39;intima et la préservation de son intégrité. Nous ne recommandons pas l&#39;utilisation de l&#39;anticoagulation après la chirurgie. Décès entre le jour postopératoire quatre et neuf sont souvent liés à une cholangite bactérienne 7. Basé sur notre expérience, une dose unique de piperacilline / tazobactam (0,03 g), administré avant laparotomie est suffisant pour réduire au minimum le risque d&#39;infection la voie biliaire principale. La mort est un événement rare après 10 jours. Toutefois, en raison de l&#39;absence de flux artériel, certains problèmes de la voie biliaire peut être observé avec cholastasis 8. Selon les besoins de l&#39;enquêteur un artérialisation peut être considéré comme 9. Fait à noter, un temps d&#39;ischémie froide jusqu&#39;à 24 heures peut être considéré comme acceptable 10. Le système rapide de liaison a été initialement conçu pour effectuer une transplantation du foie avec trois anastomoses boutons de manchette (phase anhépatique très court). Toutefois, la te de trois reverschnique nécessite l&#39;utilisation d&#39;étriers de très petites pour la veine cave sus-hépatique (SHVC) brassard et il n&#39;a pas été largement acceptée en raison du risque de problèmes d&#39;écoulement du foie 11-14. Nous avons donc en faveur d&#39;une rapide liaison assistée de trois revers seule technique quand les temps d&#39;ischémie chaude plus courtes que dix minutes sont nécessaires. Dans la plupart des études cependant, les phases d&#39;implantation jusqu&#39;à 15-18 minutes sont acceptables, ce qui permet l&#39;utilisation de la technique à deux revers, et un drainage plus physiologique SHVC. Comme le montre le présent document vidéo, nous avons l&#39;habitude d&#39;utiliser le système de liaison rapide dans la deuxième partie de l&#39;implantation seulement. Bien que peu de temps supplémentaire chirurgicale est nécessaire pour positionner les poignées rapide de liaison, cette partie de la procédure est associée à un minimum de risques et permet un raccourcissement de la phase critique grâce à anhépatique faciles insertions poignets. D&#39;autres avantages du système rapide de liaison sont un meilleur alignement de vaisseau de greffe-destinataire et l&#39;utilisation de plus larges poignets avec de meilleurs résultats hémodynamiques par rapport à latechniques décrites précédemment (y compris celle qui est décrite par Kamada et al.) 6 (Fig. 7).

<table border="1"><tbody><tr><td> Outil / Réactif </td><td> Entreprise </td><td> N Catalogue. </td><td> Commenter </td></tr><tr><td> Portail manchette </td><td> <a href="http://altecweb.com" target="_blank">altecweb.com</a> ou <a href="http://smiths-medical.com" target="_blank">forgerons-medical.com</a> </td><td> Coil 01-96-1729 800/100/420 </td><td> Alésage: 1.55mm Mur: 0.30mm Longueur: 3,5 mm </td></tr><tr><td> Sous-hépatique c cave manchette </td><td> <a href="http://altecweb.com" target="_blank">altecweb.com</a> ou <a href="http://smiths-medical.com" target="_blank">forgerons-medical.com</a> </td><td> Coil 01-96-1733 800/100/540 </td><td> Alésage: 2.40mm Mur: 0.30mm <br/&gt; Longueur: 3,5 mm </td></tr><tr><td> Stent cholédoque </td><td> commune 22G Venflon </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 7-0 cravates en soie </td><td> <a href="http://georgetiemann.com" target="_blank">georgetiemann.com</a> </td><td> 160-1226-7 / 0 </td><td></td></tr><tr><td> 10-0 prolène </td><td> <a href="http://ethicon.com" target="_blank">ethicon.com</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 9-0 prolène </td><td> <a href="http://ethicon.com" target="_blank">ethicon.com</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8-0 prolène </td><td> <a href="http://ethicon.com" target="_blank">ethicon.com</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Droites micropincettes </td><td> <a href="http://s-and-t.net" target="_blank">s-et-t</a>. Net </td><td> FRC-15 RM-8 </td><td></td></tr><tr><td> Courbes micropincettes </td><td> <a href="http://s-and-t.net" target="_blank">s-et-t.net</a> </td><td> FRS-15-RM-8 </td><td></td></tr><tr><td> Dissection porte-aiguille </td><td> <a href="http://s-and-t.net" target="_blank">s-et-t.net</a> </td><td> B-15 à 8,2 </td><td></td></tr><tr><td> Anastomose porte-aiguille </td><td> <a href="http://rumex.net" target="_blank">rumex.net</a> </td><td> 8-021T </td><td></td></tr><tr><td> Pinces Micro </td><td> <a href="http://finescience.com" target="_blank">finescience.com</a> </td><td> 18055-03 </td><td> 6 x 1 mm </td></tr><tr><td> Micro application pinces </td><td> <a href="http://finescience.com" target="_blank">finescience.com</a> </td><td> 18057-14 </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Sus-hépatique c cave pince </td><td> <a href="http://pharmap.ch" target="_blank">pharmap.ch</a> </td><td> 13.349.14 </td><td></td></tr><tr><td> Quick-Linker anneaux </td><td> <a href="http://dltchiropody.co.uk" target="_blank">dltchiropody.co.uk</a> </td><td> PAR 10 </td><td> modifiés lames de bistouri </td></tr><tr><td> Quick-Linker approximateur </td><td> <a href="http://pharmap.ch" target="_blank">pharmap.ch</a> </td><td> UD-04-275 </td><td> modification Kocher pince </td></tr></tbody></table>

orthotopic liver transplantation in rats

Les progrès cliniques dans le domaine de la transplantation hépatique a été largement soutenue par des modèles animaux 1,2. Depuis la publication de la première transplantation du foie orthotopique chez le rat en 1979 par Kamada et al. 3, ce modèle est resté l&#39;étalon-or en dépit de diverses techniques alternatives proposées 4. Néanmoins, une plus large utilisation est limitée par sa courbe d&#39;apprentissage abrupte 5. Dans cet article, vidéo, nous montrent une révision simple et facile à mettre en place des Kamada-de deux revers technique. La veine cave sus-hépatique anastomose est réalisée manuellement par un surjet, et la veine porte et sous-hépatique veine porte anastomoses caves sont réalisées en utilisant un système brassard rapide linker 6. La fabrication du kit de liaison rapide est montré dans un document vidéo séparée.

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Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Nous présentons une révision facile à mettre en place de la classique à deux revers technique pour la transplantation hépatique chez le rat.

Une transplantation hépatique orthotopique chez le rat

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Research

JoVE Journal

Medicine

29.7K vues.  University of Geneva Hospitals. Nous présentons une révision facile à mettre en place de la classique à deux revers technique pour la transplantation hépatique chez le rat.

Vidéo: Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and standardized not only for the study of allo-rejection but also between syngeneic strains for examining mechanisms of ischemia-reperfusion injury after lung transplantation. Although the application of the rat and other large animal model 2 contributed significantly to the elucidation of these studies, the scope of those investigations is limited by the scarcity of knockout and transgenic rats. Due to no effective therapies for obliterative bronchiolitis, the leading cause of death in lung transplant patients, there has been an intensive search for pre-clinical models that replicate obliterative bronchiolitis. The tracheal allograft model is the most widely used and may reproduce some of the histopathologic features of obliterative bronchiolitis 3. However, the lack of an intact vasculature with no connection to the recipient's conducting airways, and incomplete pathologic features of obliterative bronchiolitis limit the utility of this model 4. Unlike transplantation of other solid organs, vascularized mouse lung transplants have only recently been reported by Okazaki and colleagues for the first time in 2007 5. Applying the basic principles of the rat lung transplant, our lab initiated the obliterative bronchiolitis model using minor histoincompatible antigen murine orthotopic single-left lung transplants which allows the further study of obliterative bronchiolitis immunopathogenesis6.

Obliterative bronchiolitis is the key impediment to the long-term survival of lung transplant recipients and the lack of a robust preclinical model precludes examining obliterative bronchiolitis immunopathogenesis. Unlike other solid organ transplants, vascularized mouse lung transplantation has only recently been developed. Here we show our independently developed obliterative bronchiolitis model after murine orthotopic single-lung transplantation.

Développement de la bronchiolite oblitérante dans un modèle murin de transplantation pulmonaire orthotopique

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

Recherche

Médecine

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

Orthotopique transplantation d&#39;intestin grêle chez le rat

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

Transplantation orthotopique aortique chez la souris pour l&#39;étude des maladies vasculaires

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as studies on graft preservation and ischemia-reperfusion injury 1,2, immunological responses 3,4, hemodynamics 5,6, and small-for-size syndrome 7. The rat OLT is among the most difficult animal models in experimental surgery and demands advanced microsurgical skills that take a long time to learn. Consequently, the use of this model has been limited. Since the reliability and reproducibility of results are key components of the experiments in which such complex animal models are used, it is essential for surgeons who are involved in rat OLT to be trained in well-standardized and sophisticated procedures for this model.
While various techniques and modifications of OLT in rats have been reported 8 since the first model was described by Lee et al. 9 in 1973, the elimination of the hepatic arterial reconstruction 10 and the introduction of the cuff anastomosis technique by Kamada et al. 11 were a major advancement in this model, because they simplified the reconstruction procedures to a great degree. In the model by Kamada et al., the hepatic rearterialization was also eliminated. Since rats could survive without hepatic arterial flow after liver transplantation, there was considerable controversy over the value of hepatic arterialization. However, the physiological superiority of the arterialized model has been increasingly acknowledged, especially in terms of preserving the bile duct system 8,12 and the liver integrity 8,13,14.
In this article, we present detailed surgical procedures for a rat model of OLT with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft after ex vivo liver resection. The reconstruction procedures for each vessel and the bile duct are performed by the following methods: a 7-0 polypropylene continuous suture for the supra- and infrahepatic vena cava; a cuff technique for the portal vein; and a stent technique for the hepatic artery and the bile duct.

Orthotopic liver transplantation in rats is an indispensable experimental model for biomedical research. Here we present our surgical procedures for orthotopic rat liver transplantation with hepatic arterial reconstruction using a 50% partial graft.

Interventions chirurgicales pour un modèle de rat de transplantation hépatique orthotopique partielle avec reconstruction artérielle hépatique

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation waiting list die without receiving an organ transplant or are delisted due to disease progression. Even after a successful transplantation, rejection and side effects of immunosuppression remain major concerns for graft survival and patient morbidity. 
Experimental animal research has been essential to the success of liver transplantation and still plays a pivotal role in the development of clinical transplantation practice. In particular, the porcine orthotopic liver transplantation model (OLTx) is optimal for clinically oriented research for its close resemblance to human size, anatomy, and physiology. 
Decompression of intestinal congestion during the anhepatic phase of porcine OLTx is important to guarantee reliable animal survival. The use of an active porto-caval-jugular shunt achieves excellent intestinal decompression. The system can be used for short-term as well as long-term survival experiments. The following protocol contains all technical information for a stable and reproducible liver transplantation model in pigs including post-operative animal care.

Experimental animal research plays a pivotal role in the development of clinical transplantation practice. The porcine orthotopic liver transplantation model (OLTx) closely resembles human conditions and is frequently used in clinically oriented research. The following protocol contains all information for a reliable porcine OLTx model using an active porto-caval-jugular shunt.

Technique de porc approvisionnement du foie et la transplantation orthotopique utilisant un Active Porto-Caval Shunt

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

Orthotopique Hind Limb transplantation chez la souris

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep learning curve. The introduction of the cuff technique for anastomosis of the portal vein (PV) and infrahepatic vena cava (IHVC) has significantly simplified the transplant procedure in rats. However, due to the short anterior wall of the recipients' suprahepatic vena cava (SHVC), the cuff technique is very difficult to use for the reconstruction of the SHVC. Most researchers in this field still use the hand-suture technique for SHVC reconstruction, which makes it the bottleneck step in rat orthotopic liver transplantation. The magnetic anastomosis technique (i.e., magnamosis) is a method of connecting two vessels using the attractive force between two magnets. Our recent study has shown that the magnetic anastomosis technique is superior to the hand-suture technique for SHVC reconstruction in rats. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using the novel magnetic anastomosis technique. In this model, the reconstruction of the PV and IHVC was performed by the standard cuff technique, while the reconstruction of the bile duct (BD) was performed by a stent technique. The hepatic re-arterialization was not performed. The magnetic anastomosis technique made SHVC reconstruction much easier and significantly shortened the anphepatic phase. After a reasonable learning curve, even researchers without advanced microsurgical skills can produce reliable and reproducible results using this rat model of OLT.

The reconstruction of the suprahepatic vena cava (SHVC) remains a difficult step in rat orthotopic liver transplantation. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using a novel magnetic anastomosis technique.

Un modèle de Rat de la Orthotopic Transplantation hépatique en utilisant une Technique nouvelle anastomose magnétique pour la Reconstruction de veine sus-hépatique

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

Un modèle porcin préclinique de transplantation orthotopic de coeur

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

Complications réduites après reconnexion artérielle dans un modèle de rat de transplantation orthotopique de foie

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Left Lung Orthotopic Transplantation in a Juvenile Porcine Model for ESLP

Lung transplantation is the gold-standard treatment for end-stage lung disease, with over 4,600 lung transplantations performed worldwide annually. However, lung transplantation is limited by a shortage of available donor organs. As such, there is high waitlist mortality. Ex situ lung perfusion (ESLP) has increased donor lung utilization rates in some centers by 15%-20%. ESLP has been applied as a method to assess and recondition marginal donor lungs and has demonstrated acceptable short- and long-term outcomes following transplantation of extended criteria donor (ECD) lungs. Large animal (in vivo) transplantation models are required to validate ongoing in vitro research findings. Anatomic and physiologic differences between humans and pigs pose significant technical and anesthetic challenges. An easily reproducible transplant model would permit the&#160;in vivo&#160;validation of current ESLP strategies and the preclinical evaluation of various interventions designed to improve donor lung function. This protocol describes a porcine model of orthotopic left lung allotransplantation. This includes anesthetic and surgical techniques, a customized surgical checklist, troubleshooting, modifications, and the benefits and limitations of the approach.

This protocol describes a juvenile porcine model of orthotopic left lung allotransplantation designed for use with ESLP research. Focus is made on anesthetic and surgical techniques, as well as critical steps and troubleshooting.

Transplantation orthotopique du poumon gauche dans un modèle porcin juvénile pour l’ESLP

Lung transplantation is the gold-standard treatment for end-stage lung disease, with over 4,600 lung transplantations performed worldwide annually. ...