Ce travail a été soutenu par la DFG-cluster d&#39;excellence &quot;inflammation aux interfaces&quot; (RA-Si, RA-D). Nous sommes reconnaissants pour l&#39;assistance technique excellent de Kristin Wischnat.

1. Préparation de Chlamydia trachomatis sérotype D Stock <ol><li> Infect confluente 175 cm 2 flacon de culture cellulaire contenant des cellules HeLa-229 avec 4 ml C. D trachomatis dans tampon SPG. </li><li> Incuber pendant une heure à 37 ° C pendant une agitation constante. </li><li> Ajouter 20 ml de DMEM avec 10% de SVF et 240 cycloheximide ul. </li><li> Incuber dans un incubateur humidifié pendant 48 h à 37 ° C et 5% de CO 2. </li><li> Ajouter 5 ml perles de verre stériles, Shake forte pour détacher et détruire C. trachomatis héberger HeLa-229 cellules. </li><li> Recueillir le surnageant et ajouter un autre 5 ml de billes de verre stériles. </li><li> Rock à trois reprises pendant 1 min pour détruire toutes les cellules HeLa-229 et la libération C. trachomatis. </li><li> Centrifuger pendant 5 min à 1000 RPMI et 4 ° C pour se débarrasser des débris cellulaires. </li><li> Recueillir le surnageant de l&#39;infection de 8 à 10 175 cm 2 de culture de cellules confluentes flacons grown avec HeLa 229 cellules. </li><li> Incuber chaque flacon avec 4 ml de tampon SPG et 4 ml de surnageant d&#39;une infection antérieure pendant une heure à 37 ° C avec une agitation constante. </li><li> Après une heure, ajoutez 15 ml de DMEM avec 10% de SVF et 230 cycloheximide ul suivie par 48 heures d&#39;incubation à 37 ° C et 5% de CO 2. </li><li> Ajouter 5 ml de billes de verre stériles, secouer pour détacher et détruire C. trachomatis héberger HeLa-229 cellules. </li><li> Recueillir le surnageant et ajouter un autre 5 ml de billes de verre stériles. </li><li> Rock à trois reprises pendant 1 min pour détruire toutes les cellules HeLa-229 et la libération C. trachomatis. </li><li> Centrifuger pendant 5 min à 1000 RPMI à 4 ° C pour se débarrasser des débris cellulaires. </li><li> Recueillir le surnageant. </li><li> Remplir 40 ml de surnageant dans des tubes de 50 ml Falcon, centrifugeuse pour 99 min avec 11000 RPMI. </li><li> Après centrifugation éliminer le surnageant et laver le culot avec 1 ml tampon SPG. </li><li> Homogénéiser leculot dans 1 ml et SPG partie aliquote de 20 pl dans un 1, 5 ml tube Eppendorf, conserver à -70 ° C jusqu&#39;à son utilisation. L&#39;activité biologique du stock préparé a été confirmée dans un établi HeLa-229 modèle d&#39;infection de cellules. </li></ol> 2. Préparation de la trompe de Fallope humaines <ol><li> Boutique de l&#39;homme des trompes de Fallope (HFT) de femmes qui subissent une hystérectomie immédiatement après la chirurgie dans du RPMI contenant 5% de FCS sans antibiotiques dans le 4 ° C jusqu&#39;à ce que la préparation. Le protocole a été approuvé par le comité d&#39;éthique de l&#39;Université de Lübeck (09-153). Les femmes incluses dans l&#39;étude (âge de 34 ans jusqu&#39;à ce que 53) n&#39;avait pas d&#39;antécédents d&#39;avant C. trachomatis infection. Tissus des trompes de Fallope ont été recueillis à la stérilisation péripartum sur demande de la mère au cours de césariennes ou pendant une hystérectomie en raison de fibromes utérins symptomatiques dans la phase lutéale. Tous ont été testés HFT négatifs pour C. trachomatis par PCR. </li><li> Disséquer le HFT dans une boîte de Pétri contenant du milieu RPMI avec5% de FCS sans antibiotiques. Au cours de l&#39;ensemble du traitement du tissu doit être immergé dans les médias pour prévenir l&#39;assèchement. </li><li> Couper et jeter les tissus conjonctifs et des tissus détruits pendant la chirurgie. </li><li> Après dissection ouvrir le HFT soigneusement avec un petit scalpel. </li><li> Pour de plus amples expériences préparer des morceaux de tissu de la taille de 0,5 cm x 0,5 cm à 1 cm x 1 cm. </li><li> Pour obtenir un spécimen HFT infection magasin dans 1 ml du milieu RPMI contenant 5% de FCS sans antibiotiques. Spécimens DFT ont été infectées par le 5.5x10 5 IFU (unités formant inclusion) de C. trachomatis. </li><li> Incuber spécimen DFT à 37 ° C, 5% de CO 2 et 21% de O 2 ainsi que par 37 ° C, 5% de CO 2 et 2% de O 2 pendant 24 h. </li><li> Après le temps d&#39;incubation de recueillir des échantillons et magasin dans le fixateur de Monti pour au moins trois jours à 4 ° C jusqu&#39;à ce que SEM / TEM préparation. </li></ol> 3. Préparation du spécimen HFT pour le TEM <ol><li> PourTEM retirer spécimen de fixateur Monti et couper 2 x 2 mm à 4 x 5 mm pièces. Le tissu restant peut être utilisé pour SEM. </li><li> Laver pièces avec un tampon cacodylate de sodium, pH 7,35 pour 1 h. </li><li> Incuber dans 1% (w / v) dans du tétroxyde d&#39;osmium eau distillée. pendant la nuit. </li><li> Retirez le tétroxyde d&#39;osmium en excès par lavage min 6x5 dans un tampon cacodylate de sodium, pH 7,35. </li><li> Enlever l&#39;eau par incubation dans des concentrations croissantes d&#39;éthanol dans l&#39;eau (v / v) (30% pendant 2 h, de 40% pendant 2 h, de 50% pendant 2 h, de 60% pendant 2 h, 70% pendant la nuit, 80% pour 2 h, de 90% pendant 1 h, 95% pendant 1 h, 100% pendant 1 h. </li><li> Laver à l&#39;éthanol pour 2 x 15 min dans l&#39;oxyde de propylène et ensuite transférer à un mélange de 50% (v / v) araldite fraîchement préparé (y compris tous les composants) dans propylène et incuber pendant une nuit. </li><li> Transfert à l&#39;araldite fraîchement préparé (y compris tous les composants) pendant au moins 1 h. </li><li> Transfert à l&#39;incorporation des moules plats et de remplir à l&#39;araldite. </li><li> Laissez durcir pendant aralditeau moins 48 h à 60 ° C </li><li> Après le parage de l&#39;échantillon intégré coupe semi sections minces (700 nm) sur un ultramicrotome en utilisant des couteaux de verre ou d&#39;un couteau de diamant et histo tache avec de la lasure de Richardson. </li><li> Couper coupes ultra-fines (environ 70 nm) en utilisant un couteau de diamant et le transfert à des grilles de cuivre (par exemple 150 à mailles carrées). </li><li> Colorer coupes ultra-fines avec de l&#39;acétate d&#39;uranyle 0,5% (w / v) dans l&#39;eau distillée. suivi de 3% (p / v) du citrate de plomb dans l&#39;eau distillée. dans une section de coloration automatique. Sinon, les articles peuvent être colorés manuellement en laissant les grilles 15 min sur une solution saturée d&#39;acétate d&#39;uranyle centrifugé dans l&#39;eau distillée. suivie par le citrate de plomb de 0,3% (w / v) dans l&#39;eau distillée. </li></ol> 4. Préparation de l&#39;échantillon HFT pour SEM <ol><li> Pour SEM retirer spécimen de fixateur Monti, orienter vers le haut avec l&#39;épithélium sur un 1,5 x 1 cm feuille de liège et de fixer la position en utilisant des aiguilles d&#39;insectes. </li><li> Transfert spécimen sur liège pour paniers métalliques appropriés etlaver pendant 30 min dans un tampon cacodylate de sodium, pH 7,35. </li><li> Enlever l&#39;eau en incubant spécimen dans la concentration croissante de l&#39;acétone mélanges eau / (v / v) 30% pendant 6 h, de 40% pendant 6 h, de 60% pendant 8 h, 70% pendant la nuit, 80% pendant 2 h, 90% pour les 2% h et 100 pendant la nuit (être extrêmement prudent de garder en permanence immergée spécimen). </li><li> Transfert à 100% d&#39;acétone fraîche et échantillon sec par séchage au point critique (température 40 ° C, pression 80 bars). </li><li> Retirer les aiguilles, les bouchons et des échantillons de colle avec l&#39;épithélium de montage vers le haut sur éprouvette SEM équipés d&#39;une patte de carbone conducteur à l&#39;aide de ciment de carbone conducteur. Utilisation liquide d&#39;argent conductrice pour améliorer la conductivité entre le support et la patte de carbone conducteur. </li><li> Préparer un revêtement conducteur de platine, d&#39;or ou de palladium de l&#39;échantillon en utilisant une coucheuse par pulvérisation cathodique. </li></ol> 5. Coloration des semi-Lames minces avec taches de Richardson <ol><li> Laissez semi-lames minces sèche sur la diapositive. </li><li> Colorer les sections avec coloration solution à 60 ° C pendant 1-2 min. </li><li> Laver à l&#39;eau distillée. </li><li> Sécher les sections et lamelle. </li></ol> 6. Les résultats représentatifs Dans le modèle humain d&#39;infection des trompes de Fallope, nous avons pu visualiser les différences dans la morphologie épithéliale entre les contrôles non-infectées (figure 1) et le C. trachomatis - tubes infectés (Figure 2) sous condition de normoxie. Caractéristiques des différences morphologiques implicite induite par des agents pathogènes gonflement et une lyse des cellules épithéliales trompes de Fallope qui ne pouvaient pas être détectées dans les contrôles non-infectés. Utilisation de semi-lames minces et microscopie électronique à transmission nous étions en mesure de prouver intracellulaire C. la formation d&#39;inclusion trachomatis dans la infectées ex vivo de tissus humains trompe de Fallope (Figure 3, 5), mais pas dans les contrôles non infectés (Figure 4). Comme l&#39;oxygène concentrationtions dans le tractus génital féminin sont déjà faibles dans des conditions physiologiques 11, et nouvelle baisse au cours d&#39;un processus inflammatoire nous avons également étudié notre modèle dans des conditions hypoxiques. Les résultats préliminaires indiquent le modèle est utile pour analyser la croissance chlamydia et de la descendance dans les diverses concentrations d&#39;oxygène. Chlamydia-induite lésions des cellules épithéliales doit être séparé des artefacts qui sont médiés par la préparation et la manipulation imprudente des trompes de Fallope avant l&#39;infection (figure 6). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. Microscopie électronique à balayage (MEB) d&#39;une trompe de Fallope non-humain infecté après une journée dans un milieu d&#39;incubation de contrôle (flèche verte montre cilié cellule, flèche bleue démontrer la non-cilié cellules). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2. Numérisation micros d&#39;électrons<html> copie (SEM) d&#39;une trachomatis ex vivo C. infectés humaine trompe de Fallope une infection après jour (flèche blanche marque l&#39;inclusion rupture). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig3.jpg" alt="Figure 3" /> Figure 3. Semi lames minces montrent typiques inclusions intracellulaires (flèches blanches) 1j après l&#39;infection du tube humaine Fallope avec C. ex vivo trachomatis. <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig4.jpg" alt="Figure 4" /> Figure 4. Microscopie électronique à transmission (TEM) d&#39;un non-infectés trompe de Fallope humaine après une incubation dans un milieu de contrôle jour. <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig5.jpg" alt="Figure 5" /> Microscopie électronique à la figure 5. Transmission (MET) d&#39;un ex vivo C. trachomatis infection humaine trompe de Fallope une infection après jour (flèches blanches marquent inclusions à Chlamydia). ve_content &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig6.jpg" alt="Figure 6" /> Figure 6. Microscopie électronique à balayage (MEB) de l&#39;épithélium des trompes de Fallope endommagées par la préparation et la manipulation imprudente de l&#39;échantillon (flèches marque blanche détruit les tissus épithéliaux).

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Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Visualisation de l&#39;agent pathogène causée par des dommages au tissu infecté est ardu et souvent limitée à des procédures expérimentales chez la souris. Nous avons établi un modèle ex vivo l&#39;infection dans les trompes de Fallope de l&#39;homme pour analyser C. trachomatis des voies génitales supérieures. Par l&#39;utilisation de cette méthode, nous étions en mesure de visualiser C. trachomatis - des lésions de l&#39;épithélium du tube humaine Fallope dans l&#39;jours après l&#39;infection. Gonflement cellulaire et une lyse étaient des changements morphologiques typiques qui ont été observés en C. trachomatis - infectés trompes de Fallope, mais pas dans les contrôles non infectés. Analyses TEM a révélé que Chlamydia mettre en œuvre un cycle de type intracellulaire de développement dans les tissus infectés, montrant grosses inclusions avec re-différenciés des corps élémentaires, mais aussi les petites inclusions avec corps réticulés élargies qui pourraient indiquer la persistance. Cependant, l&#39;image morphologique seule ne suffit pas à discriminer entre les replinfections intoxicantes et persistante, qui sont caractérisées par un métabolisme réduit et une résistance accrue aux antimicrobiens 10. La destruction de l&#39;épithélium des trompes de Fallope infectés est soit due à la perturbation de C. trachomatis - cellules épithéliales infectées après l&#39;achèvement du cycle de développement intracellulaire et la libération de corps élémentaires infectieux ou la libération de cytokines pro-inflammatoires 8. Dommages aux tissus des agents pathogènes et l&#39;hôte induite induits par les réactions immunitaires contre C. trachomatis sont censés être les principaux facteurs conduisant à la perte de la fonction des cellules épithéliales, fibroblastes remodelage et la stérilité tubaire, enfin in vivo 8,11. Une des principales limites de ce modèle est l&#39;absence de cellules inflammatoires qui entrave l&#39;analyse des effets secondaires à l&#39;initiale C. trachomatis de l&#39;épithélium des trompes de Fallope. Cependant, le modèle est apappropriées afin de rechercher des conditions environnementales différentes (teneur en oxygène par exemple) et la première réponse immunitaire hôte à la phase aiguë C. trachomatis 8,9. D&#39;autres plans sont d&#39;établir un modèle pour les essais d&#39;antimicrobiens contre C. trachomatis dans l&#39;ensemble de l&#39;homme des trompes de Fallope et de caractériser les états métaboliques des différents stades de développement observés dans l&#39;épithélium des trompes par le 2-photons microscopie à balayage laser.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> AAP </td><td> E15-843 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> AAP </td><td> R15-802 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> AAP </td><td> A15-101 </td><td></td></tr><tr><td> Cycloheximide </td><td> Sigma - Aldrich </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tampon SPG </td><td> divers </td><td></td><td> voir la recette ci-dessous </td></tr><tr><td> Monti fixateur </td><td> divers </td><td></td><td> voir la recette ci-dessous </td></tr><tr><td> tampon cacodylate de sodium </td><td> divers </td><td></td><td> voir la recette ci-dessous </td></tr><tr><td> Richardson de tache </td><td> divers </td><td></td><td> voir la recette ci-dessous </td></tr></tbody></table> Recettes: 1. Tampon SPG <ol><li> Ajouter 75 g de saccharose. </li><li> Ajouter 2,47 g de phosphate disodique. </li><li> Ajouter 0,36 g de phosphate monosodique. </li><li> Ajouter 0,72 g d&#39;acide glutamique. </li><li> Remplir à 1 l avec l&#39;eau distillée. </li><li> Ajuster le pH à 7,3. </li></ol> 2. 0,1 M de tampon cacodylate de sodium, pH 7,35. <ol><li> Ajouter 42,80 g de sel de sodium d&#39;acide diméthylarsenic. </li><li> Ajouter 68,46 g de saccharose. </li><li> Remplir à 1 l avec l&#39;eau distillée. pour obtenir 0,2 M tampon cacodylate de sodium. </li><li> Avant d&#39;utiliser une solution diluée avec l&#39;eau distillée. à la concentration désirée et ajuster le pH à 7,35, si nécessaire. </li></ol> 3. Monti fixateur <ol><li> Ajouter 156 ml 0,12 M de tampon cacodylate de sodium. 3.2 Ajouter 25 ml de 25% dans l&#39;eau distillée glutardialdéhyde. </li><li> Ajouter 19 mlParaformaldéhyde 10% en eau distillée. </li><li> Ajouter 3 ml 3% CaCl 2 dans l&#39;eau distillée. </li><li> Ajuster le pH à 7,35 et remplir avec l&#39;eau distillée. à 312 ml de solution finale. </li></ol> 4. Richardson tache <ol><li> Mélanger des parties égales de bleu de méthylène à 1% en solution aqueuse à 1% de borax et 1% Azur II en eau distillée. </li></ol>

a human fallopian tube model for investigation of c. trachomatis infections

Les infections des voies génitales à Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) sont les plus fréquentes transmises sexuellement maladie chez les femmes à travers le monde. Clairance inefficace ou la persistance des agents pathogènes peut conduire à des infections croissant de la partie supérieure du tractus génital et sont censés provoquer chronique inflammatoire des dommages à 1,2 tissus infectés. En conséquence, grave séquelle clinique comme la maladie inflammatoire pelvienne (PID), l&#39;occlusion des trompes et de l&#39;infertilité peut se produire 3,4. La plupart des recherches en collaboration avec C. trachomatis a été réalisée dans des lignées cellulaires épithéliales (par exemple cellules HEp-2 et HeLa-229) ou chez les souris. Cependant, comme avec la cellule-culture à base de modèles, ils ne reflètent ni la physiologie du tissu natif, ni la physiopathologie de la C. infections du tractus génital trachomatis in vivo 5. D&#39;autres limitations sont donnés par le fait que centrales cascades de signalisation (par exemple l&#39;IFN-γ mediated signalisation JAK / STAT voie) qui contrôlent la croissance intracellulaire Chlamydia diffèrent fondamentalement entre les souris et les humains 6,7. Nous et d&#39;autres a donc établi un modèle organe entier des trompes de Fallope pour étudier les interactions directes entre C. trachomatis et humaines des trompes de Fallope ex vivo des cellules 8,9. A cet effet, l&#39;homme des trompes de Fallope de la femme devant subir une hystérectomie ont été recueillis et infectés par le C. trachomatis sérovar D. Dans les 24 heures après l&#39;infection, spécimen, analysés par microscopie électronique à balayage (MEB) et microscopie électronique à transmission (MET) pour détecter Chlamydia trachomatis médiation lésions épithéliales ainsi que C. la formation d&#39;inclusion trachomatis dans le tissu de Fallope.

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A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

Nous décrivons une<em&gt; Ex vivo l&#39;infection</em&gt; Modèle pour la visualisation des interactions directes à partir de bactéries pathogènes avec les cellules humaines trompes de Fallope. Le modèle organe entier des tissus a été créée pour enquêter sur<em&gt; C. trachomatis</em&gt; Pathologie induite par le tube femelle Fallope sous la rubrique «la vie comme« conditions.

Un modèle de tube de Fallope humaines des enquêtes sur<em&gt; C. trachomatis</em&gt; Infections

Genital tract infections with Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) are the most frequent transmitted sexually disease in women worldwide. Inefficient ...

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A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

12.8K vues.  University of Lübeck. Nous décrivons une Ex vivo l'infection Modèle pour la visualisation des interactions directes à partir de bactéries pathogènes avec les cellules humaines trompes de Fallope. Le modèle organe entier des tissus a été créée pour enquêter sur C. trachomatis Pathologie induite par le tube femelle Fallope sous la rubrique «la vie comme« conditions.

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Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

Traitement des mammoplastie de réduction et de tissus humains mastectomie pour Culture Cellulaire

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

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Médecine

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

Modèle murin de la cicatrisation

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

Un modèle murin orthotopique de cancer de la prostate humain métastases

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

Excitotoxiques stimulation de Microslices cerveau comme un<em&gt; In vitro</em&gt; Modèle de l&#39;AVC

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

Induction de l’athérosclérose accélérée chez les souris : le modèle « Wire-Injury »

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

Phosphore-31 Spectroscopie par résonance magnétique: un outil de mesure<em&gt; In Vivo</em&gt; Capacité mitochondrial phosphorylation oxydative dans le muscle squelettique humain

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to the lack of markers or tools for the ovarian cancer identification, the early detection of HGSC remains challenging. Direct sampling of the fallopian tube can enhance sensitivity for detection of neoplastic cells when the tumor is not grossly visible. We developed a procedure to collect fallopian tube cells directly from freshly received surgical specimens, which has shown excellent correlation with histological findings. This approach lays a foundation for the future utility of minimally invasive laparoscopic screening in high-risk patient populations.

We explored a tubal cytologic method by sampling the fallopian tube directly post-surgical excision as a tool of ovarian cancer early detection. Here, we present a protocol to collect fallopian tube cells from freshly received surgical specimens.

La cytologie tubaire de la trompe de Fallope est un outil prometteur pour la détection précoce du cancer de l&#39;ovaire

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a wide variety of disorders including metabolic diseases, premature aging syndromes, and neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD). Maintenance of mitochondrial health depends on mitochondrial biogenesis and the efficient clearance of dysfunctional mitochondria through mitophagy. Experimental methods to accurately detect autophagy/mitophagy, especially in animal models, have been challenging to develop. Recent progress towards the understanding of the molecular mechanisms of mitophagy has enabled the development of novel mitophagy detection techniques. Here, we introduce several versatile techniques to monitor mitophagy in human cells, Caenorhabditis elegans (e.g., Rosella and DCT-1/ LGG-1 strains), and mice (mt-Keima). A combination of these mitophagy detection techniques, including cross-species evaluation, will improve the accuracy of mitophagy measurements and lead to a better understanding of the role of mitophagy in health and disease.

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitophagy, the process of clearing damaged mitochondria, is necessary for mitochondrial homeostasis and health maintenance. This article presents some of the latest mitophagy detection methods in human cells, Caenorhabditis elegans, and mice.

In Vitro et In Vivo la détection des Mitophagy dans les cellules humaines, C. Eleganset la souris

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Mesure de la contractilité isométrique de l’artère mésentérique de souris à l’aide de fil myographie

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely correlated with a history of articular cartilage damage and ligament avulsion. Surgical animal models of OA of the knee play an important role in understanding the onset and progression of post-traumatic OA and aid in the development of novel therapies for this disease. However, non-surgical models have been recently considered to avoid traumatic inflammation that could affect the evaluation of the intervention. 
In this study, an intra-articular cartilage lesion rat model induced by in vivo cyclic compressive loading was developed, which allowed researchers to (1) determine the optimal magnitude, speed, and duration of load that could cause focal cartilage damage; (2) assess post-traumatic spatiotemporal pathological changes in chondrocyte vitality; and (3) evaluate the histological expression of destructive or protective molecules that are involved in the adaptation and repair mechanisms against joint compressive loads. This report describes the experimental protocol for this novel cartilage lesion in a rat model.

Here, we present the cyclic loading-induced intra-articular cartilage lesion model of the rat knee, generated by 60 cyclic compressions over 20 N, resulting in damage to the femoral condylar cartilage in rats.

Méthode non invasive pour générer le modèle de lésion cartilagineuse intra-articulaire induite par la charge cyclique du genou du rat

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...