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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology

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Séparation des protéines avec SDS-PAGE

Vue d'ensemble

L'Electrophorèse sur Gel de Polyacrylamide en présence de Dodécylsulfate de Sodium, ou SDS-PAGE, est une techique largement utilisée pour la séparation de mélanges de protéines, basée sur leur taille et rien d'autre. SDS, un détergent anionique, est utilisé pour produire une charge égale à travers la longueur des protéines qui ont été linéarisées. Par, d'abord, leur chargement dans un gel fait de polyacrylamide et, ensuite, en appliquant un champ électrique au gel, les protéines enrobées au SDS sont alors séparées. Le champ électrique joue la force motrice, dirigeant les protéines enrobées au SDS vers l'anode avec les plus grosses protéines se déplaçant plus lentement que les petites protéines. En vue d'identifier les protéines par leur taille, les standards de protéines de tailles connues sont chargés en parallèle avec les échantillons et subissent les mêmes conditions.

Cette vidéo présente une introduction à la technique SDS-PAGE en expliquant tout d'abord la théorie sous-jacente et ensuite en montrant la procédure étape par étape. Une varité de paramètres expérimentaux, tels que la concentration de polyacrylamide et la tension appliquée au gel sont discutés. Les méthodes de coloration en aval comme Coomassie et silver stains sont introduites, et des variations de la méthode, telle que l'électrophorèse sur gel 2D sont présentées.

Procédure

SDS-PAGE est une technique utilisée par de nombreux chercheurs pour séparer des mélanges de protéines de différentes tailles. La réussite de cette technique est une étape de base essentielle pour de nombreuses méthodes d'analyse de protéines, comme l’immunotransfert (ou immunoblotting en anglais). En soi, c’est un outil utile pour évaluer la taille et la pureté des protéines. \

Afin de comprendre la technique SDS-PAGE, vous devez d'abord comprendre ses principaux composants. SDS-PAGE sign

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Overview

0:29

Principal Components of the SDS-PAGE System

1:55

SDS-PAGE Sample Preparation

3:40

Loading and Running the Gel

5:18

Applications

7:07

Summary

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