We greatly acknowledge financial support by NIH R01 CA123495, U01 CA151815, R01 CA136841, grants from the Department of Neurosurgery at Cedars-Cedars Medical Center and Arrogene Technology Inc.

Toutes les expériences sont conformes aux réglementations officielles d&#39;animaux y compris les procédures chirurgicales et non chirurgicales réalisées in vivo et sont en pleine conformité avec les protocoles IACUC. 1. Bioproduction de l&#39;acide malique <ol><li> Cultiver une culture de semences de sphérules sur gélose et transférer plasmodies à 100 ml de milieu de culture en utilisant un 25 ° C Thermo déclaré incubateur et un milieu de culture de base 8,9. </li><li> Produire une quantité de gravité emballé 500 micro plasmodia ml sous l&#39;abri de la lumière afin d&#39;éviter la sporulation. </li><li> Préparez 80 g CaCO3 en suspension dans 8 L milieu de base dans 10 L récipient bioréacteur. Transférer les 500 ml emballés micro Plasmodium dans le récipient de réaction et monté pour permettre le bioprocédé 75 h à 25 ° C, 10 L / min de débit d&#39;air filtré et 150 tours par minute sous agitation par un agitateur de segment. </li><li> Fin lorsque le bouillon de culture a un pH de 4,8, indiquant la fin de la production de PMLA et mesurer la teneur PMLA par til hydroxamate / Fe (III) dosage. </li><li> Refroidir le bouillon à 17 ° C et permettent aux cellules de se déposent par gravité. </li><li> Laisser refroidir à 4 ° C et ajuster le pH à 7,5, utiliser NaOH 2. Pomper le liquide surnageant à travers une colonne remplie avec 1,5 l de DEAE-cellulose dans le fond de la direction vers le haut (de DEAE à grains grossiers, équilibrée avec 20 mM Tris-HCl pH 7,5 à 5 ° C). </li><li> Laver avec 3 colonnes de tampon contenant 0,3 M de NaCl, après modification de la direction de haut en bas et éluer PMLA en présence de 0,7 M de NaCl. </li><li> Régler à 0,1 M CaCl 2 et précipiter PMLA-Calcium avec 80% éthanol glacé. Fractionner sur Sephadex G25 dans PMLA-calcium de 80 à 300 kDa, 50-80 kDa, et de 10 - 50 kDa, en utilisant de l&#39;eau en l&#39;absence de tampon et de sel. </li><li> Passer chaque fraction sur une 120H Amberlite IR + colonne, et geler immédiatement l&#39;acide malique accréditives dans l&#39;azote liquide pour la lyophilisation. </li><li> Dissoudre dans de l&#39;acétone sec. Après filtration, éliminer le solvantdans le flux d&#39;air sec, lyophiliser et conserver à -20 ° C. </li></ol> 2. Synthèse de nano médicaments à base d&#39;acide malique <ol><li> Activer les groupes carboxyles de PMLA (P) par mélange de 116 mg (1 mmol unités malyl) de PMLA-H dans 1 ml d&#39;acétone anhydre et 1 mmole de N-hydroxysuccinimide et de 1 mmol de dicyclohexyl carbodiimide dans 2 ml de diméthylformamide (DMF). Agiter à 20 ° C pendant 3 heures. Ajouter 0,05 mmole de mPEG 5000-NH 2 (0,05% molaire d&#39;unités malyl) dans 1 ml de DMF, suivi par 0,05 mmol de triéthylamine (TEA). </li><li> Ajouter goutte à goutte en solution dans le DMF de 0,4 mmol d&#39;ester de leucine d&#39;éthyle (Loet) (40% molaire d&#39;unités malyl), 0,1 mmol de 2-thiol-1-éthylamine (2-méthoxyéthyle) (10% en moles de motifs malyl) et 0,5 mmoles de TEA, tous dissous dans du DMF. Après chaque addition, laisser 1 heure et vérifier la fin de la réaction négative par la ninhydrine réponse (couche de chromatographie, CCM). </li><li> Ne retirer les restes de NHS-ester par hydrolyse spontanée avec une solution saline tamponnée au phosphate (30 min, pH 6,8). Dessaler sur PD-10 Colonne, obtenir &quot;preconjugate&quot; comme une poudre blanche par lyophilisation. Entreposer au sec moins 20 ° C. </li><li> Dissoudre 30 mg d&#39;anticorps (anticorps monoclonal, IgG2a-κ) dans 4,5 ml de phosphate de sodium 100 mM, NaCl 150 mM, pH 5,5. </li><li> Réduire les liaisons disulfure avec 5 mM de Tris (2-carboxy-éthyl) chlorhydrate de phosphine pendant 30 min à 20 ° C et on purifie sur colonne PD-10. </li><li> Dissoudre Mal-PEG 3400-Mal dans 2 ml du même tampon et ajouter le mAb réduite à un volume final de 10 ml et on agite pendant une nuit à 4 ° C. Concentrer à 2,5 ml sur Vivaspin 20, exclusion 30 kD, et purifier sur Sephadex G75. Vérifiez produit sur sec-HPLC et évaluer la valeur photométrique à 280 nm de longueur d&#39;onde. </li><li> Fixez Mal-PEG-Mal-mAb à &quot;preconjugate&quot; thiols obtention P / PEG 5000 (5%) / Loet (40%) / mab (0,2%) / 2-MEA (10%). Pour ce faire, en mélangeant 5 ml de 200 nmol mAb-PEG 3400-Mal à 50 mg (P / MPEG 5000 / LOEt/2-MEA) dans le tampon pH supérieur à 5,5, ajuster la concentration de sulfhyDryl à 2 mM et incuber à 20 ° C pendant 3 heures (rendement 98%). </li><li> Solubiliser 3&#39;-H 2 N-AON dans du DMF / PBS (pH 7,2) et de réagir avec le N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio) propionate (SPDP) à (01:01 v / v) DMF / méthanol (test à la ninhydrine ) et purifier AON-PDP sur Sephadex LH20-en méthanol, puis dans l&#39;eau et lyophiliser. </li><li> Incuber 800 nmol AONs activés dans la mémoire tampon de pH 5,5 à la Mal-PEG 3400-Mal-mAb-preconjugate préparé ci-dessus pendant la nuit jusqu&#39;à ce que la réaction d&#39;échange de disulfure est terminée. </li><li> Incorporer fluorescent Alexa Fluor 680-maléimide formant thioéther avec un polymère-2-MEA-SH. Bloquer sulfhydryls excès de 3-pyridyldithio-propionate (PDP) et purifier sur Sephadex G75. Conserver à 4 ° C ou congelé instantanément à -80 ° C jusqu&#39;à utilisation ultérieure. </li></ol> 3. Tests et Propriétés <ol><li> Effectuer des tests de pureté et de stabilité dans le sérum et PBS à 4 ° C et 37 ° C par analyse HPLC-sec. Utilisez polystyrène sulfonate comme molecnormes de poids ment ses. Mesurer la distribution de la taille des nano et zeta-potentiels. Utilisez les systèmes commerciaux. </li><li> Ajouter 320 ul d&#39;échantillon de 160 ul de 10% (p / v) de chlorure d&#39;hydroxylammonium et 160 ul de 10% (p / v) de NaOH. Après 10-15 minutes, mélanger avec 160 pi de 5% (p / v) Fe (III) Cl 3 à 12% (v / v) de HCl et de lire Un 540 de hydroxamate / Fe (III). Calculez PMLA supposant 1 mg / ml PMLA correspond à 2,5 A 540. </li><li> Hydrolyser la molécule nano pendant une nuit dans du HCl 2 M à 110 ° C et le dosage de l&#39;acide malique sur la chromatographie en phase inverse en faisant référence à des échantillons standards dopé avec de l&#39;acide malique. Cliver le médicament nano avec dithiothréitol 100 mM et mesurer Morpholino-AON par quantitative HPLC en phase inversée par rapport aux normes Morpholino AON. </li><li> Prendre nano médicament sans clivage et de mesurer l&#39;anticorps en utilisant un kit de dosage de protéine. Quantifier mPEG en permettant sa réaction avec l&#39;ammonium ferrothiocyanate, puis extraire avec du chloroforme et l&#39;absorbance à 510 nm de longueur d&#39;onde 10 </sup&gt;. </li><li> Effectuer ELISA avec 5 pi de drogue nano (1-10 pg de mAb) par puits tester l&#39;activité des anticorps et emboîtement. Utiliser 0,5 pg / puits récepteur de la transferrine et de HER2, respectivement, comme des antigènes de la plaque revêtue et des anticorps secondaires couplés à la peroxydase. </li><li> Calculer atteint% pour AON, MPEG et mAb à l&#39;égard de l&#39;acide malique (100%) et comparer avec le% prévu par la conception (voir les exemples les tableaux 1 et 2). </li></ol> 4. Tests in vitro <ol><li> Incuber le médicament avec des nano cellules cancéreuses en culture et les cellules survivantes mesure au cours du temps par leur activité pour réduire réactif jaune [3 - (4,5-diméthylthiazol-2-yl) -5 - (3-carboxymethoxyphenyl) -2 - (4-sulfophényl )-2H-tétrazolium, sel interne] (MTS) à un colorant bleu et lire l&#39;absorbance relative avec un photomètre. Suivez les instructions du fabricant de kit. </li><li> Préparer des extraits de cellules in vitro ou ex vivo pour le transfert de Western. Utilisez glacée extraction buffer qui contient SDS et inhibiteur de la protéase cocktail. Séparer les protéines par électrophorèse sur gel réducteur de SDS-polyacrylamide. </li><li> Avez-western blot des protéines d&#39;intérêt dans les extraits d&#39;échantillons. Utiliser des anticorps secondaires conjugués à la phosphatase alcaline. </li><li> Utiliser la microscopie confocale pour démontrer l&#39;absorption cellulaire et la co-localisation de la plate-forme de nano de médicament polymère, AON endosomes et en utilisant un marquage par fluorescence. Attacher Alexa Fluor 680 de la plate-forme de conjugué de nano et Lissamine à AONs que des marqueurs de fluorescence. Utiliser un microscope 5X scanner spectrale et les cellules cancéreuses vivantes de visualiser la distribution des molécules marquées </li><li> Membranes endosomes tache avec Styryl rouge colorant fluorescent et démontrent colocalisation endosome ou de libération. </li></ol> 5. Essais in vivo <ol><li> Préparer le modèle de souris de cancer du sein humain HER2-positif (Tac nu de la souris: Cr: (MCR)-Foxnnm). Insérez un 0,72 mg 17β-estradiol libérer culot (90 jours de presse) subcutaneously dans le cou de chaque souris. </li><li> Puis injecter des cellules tumorales BT-474 1 x 10 7 sous-cutanée dans le flanc droit et laisser la tumeur se développer. </li><li> Commencer le traitement lorsque les tumeurs sont de 120 mm 3 de la taille de l&#39;injection dans la veine caudale de 150 ul de conjugué nano contenant 2,5 mg / kg AON et / ou 4,5 mg / kg de chaque anticorps. Pour le traitement injecter deux fois par semaine, total six fois. </li><li> Mesurer la taille de la tumeur avec étriers deux fois la faiblesse et calculer les volumes en utilisant la formule (longueur x profondeur x largeur) x (π / 6). Euthanasier les animaux deux semaines après la dernière injection et après une sédation avec une solution de kétamine et de dexmédétomidine suivie par dislocation cervicale. </li><li> Isoler les tumeurs et les sections de tache avec H &amp; E pour l&#39;évaluation morphologique. </li><li> Pour l&#39;évaluation de la distribution du médicament à l&#39;échelle animale, en utilisant un système d&#39;imagerie par fluorescence. Injecter le médicament Alexa Fluor 680 nano marqué et l&#39;image à 24 et 48 h. </li><li> Euthanasier l&#39;animal et de détecter le fluorescence dans les tumeurs et des organes isolés et perfusés. </li></ol>

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Les auteurs Julia Y. Ljubimova, Keith L. Black, et Eggehard Holler sont actionnaires de Arrogene Technology Inc.

La voie expérimentale pour la préparation de médicaments à partir de nanoparticules d&#39;un polymère naturel biodégradable est présenté qui peut être utilisé dans la synthèse de la médecine personnalisée. La description commence par la production contrôlée et la purification de l&#39;acide malique, qui est une plate-forme flexible pour la synthèse de médicaments nano. En utilisant des techniques reproductibles, le polymère est obtenu avec un poids moléculaire élevé et une pureté extrême convenable pour la synthèse pharmaceutique. La synthèse est décrite pour un médicament nano qui est montré pour traiter efficacement le cancer du sein HER2-positif. La description peut être traduit dans des synthèses de la plupart des autres médicaments nano pour le traitement du cancer. Le ciblage comprend des anticorps tels que Herceptin qui se lient à un antigène spécifique de tumeur comme la protéine HER2 ou de tout autre marqueur de tumeur qui est internalisé efficacement. Le médicament de nano délivre une sélection d&#39;oligonucléotides antisens et des agents chimiothérapeutiques qui inhibent efficacement la croissance du cancer sous Treatment. Dans l&#39;exemple, la liaison à HER2 Herceptin et recuit spécifique d&#39;oligonucléotide antisens avec HER2-codante de l&#39;ARNm traduit par le blocage durable de HER2-signalisation et la réduction sévère du cancer du sein HER2-positif. Basé sur le principe sous-jacent de ciblage de la tumeur et l&#39;inhibition de l&#39;expression des gènes par des oligonucléotides antisens nous avons à jour synthétisé plusieurs autres médicaments nano et succès inhibé glioblastome humain préclinique et le cancer du sein triple négatif 11,14-18. Le travail de synthèse commence par la préparation hautement purifiée de la plate-forme de nano médicament, qui est l&#39;acide malique à partir du surnageant de culture de Physarum polycephalum (une espèce de la famille &quot;boue de moule»). La préparation met l&#39;accent sur des poids moléculaires élevés du polymère, en principe, permettre la fixation de plusieurs anticorps, de peptides, d&#39;oligonucléotides et d&#39;autres molécules qui fonctionnent en administration de médicament actif et l&#39;inhibition de la croissance tumorale. Following la mise en culture et la purification contrôlée, qualité reproductible de polymère avec des rendements prévisibles a été produite. Le polymère est stocké dans des conditions avantageuses pour tout le temps. La synthèse des conjugués de nanoparticules PMLA commençant par l&#39;activation chimique des carboxylates pendants polymère est réalisée en quelques étapes de synthèse. Entre les deux étapes, la synthèse peut être éventuellement mis en attente permettant la préparation des quantités arbitraires de produits intermédiaires, et donc peut être utilisé en haut mise à l&#39;échelle. Le progrès de la synthèse est suivie par CCM et HPLC-sec, et à la fois la composition et l&#39;activité de la molécule nano est commandé par des dosages spécifiques à un groupe chimique quantitative, ELISA, et une série de mesures physiques. Notre expérience est que ces synthèses ont été progressé en douceur et de façon reproductible avec d&#39;excellents rendements et pureté. En choisissant la spécificité des anticorps et des oligonucléotides antisens toute variante de nano médicament est favorable synthétisé comme nécessaire dans personalized médecine. Les modalités de la réussite du traitement du cancer du sein HER2-positif humain sont des représentants valides pour la préparation de modèles de cancer de la souris, l&#39;application de médicaments nano, l&#39;imagerie et l&#39;analyse de la croissance tumorale. Les résultats des tests in vitro de viabilité sont utiles dans la sélection de la lignée cellulaire et le médicament conduisant à être utilisé dans l&#39;expérimentation animale. Xenogen imagerie in vivo confirme que le médicament est en effet de nano délivrée dans la tumeur. Résultats de western blot révèle que le niveau de certaines protéines a répondu de la manière prévue au cours du traitement du cancer. Mesure de la taille de la tumeur informe de la réussite du traitement, soit environ inhibition, récession ou de la régression. L&#39;exemple décrit reflète notre expérience avec d&#39;autres médicaments à base d&#39;acide nano-polymalique indiquant un degré élevé de prévisibilité, reproductibilité et l&#39;absence de toxicité notable. Les résultats récents sur la toxicité et l&#39;efficacité des multiples targeted conjugués d&#39;acide malique pour le traitement triple négatif cancer du sein sont en forte appui de cette notion 18. Une caractéristique essentielle est que notre médicament nano est capable de pénétrer dans les bio-barrières: la barrière endothéliale par extravasation dans la interstitiel de la tumeur, la membrane de la cellule tumorale par endosome absorption, et rupture de la membrane de l&#39;endosome par action des groupes d&#39;ester éthylique de leucine ou la trileucine. Extravasation et endosome absorption sont fiable accompli par les anticorps spécifiques liées à la drogue nano. Anticorps anti-récepteur de la transferrine anti-souris médie afflux efficace dans la tumeur par transcytose, probablement parce que le récepteur est surexprimé dans la plupart vasculaire tumoral. Un autre anticorps fixé sur les mêmes fonctions nano molécule conjuguée à diriger précisément le médicament nano dans la cellule tumorale de destinataire. La présence de deux anticorps, l&#39;un pour la transcytose et l&#39;autre pour l&#39;absorption endosome, est essentiel pour un fonctionnement optimal. L&#39;analyse quantitative des macide Alic et anticorps est fortement recommandé afin de contrôler la composition optimale du médicament nano. Enfin, il convient de noter que le nano covalente médicament tout-en-un livre médicament sous forme chimiquement liée, en route à travers le système vasculaire de l&#39;hôte dans la cellule tumorale de destinataire. fixation chimique rend inactive la plupart des médicaments (prodrogues) jusqu&#39;à ce qu&#39;ils soient reconstitués en médicaments gratuits par clivage de la plate-forme nano conjugué au site ciblé. Ceci est important car la modalité de réactivation fournit un degré élevé de sécurité lors de l&#39;accouchement et une chance minime d&#39;évoquer des effets secondaires néfastes. Polyvalence, l&#39;efficacité et la sécurité sont des attributs indispensables de la bonne médecine personnalisée.

Dans l&#39;ère post-génomique quand génomes de cancer ont été démêlé (Centre national pour la biotechnologie et la génomique du cancer Atlas), le traitement futur du cancer représentera la diversité génétique des tumeurs souvent dans la même tumeur 1-4. Bioinformatique et séquençage de l&#39;ADN rapide, pas cher permet l&#39;acquisition de gènes / mutations malignes à un niveau personnel 2,4,5. Une fois que les gènes ont été identifiés, les patients seront traités avec la médecine personnalisée de modifier ou de réduire au silence l&#39;expression de gènes malignes 6. La nécessité de cibler les cellules cancéreuses et délivrer des médicaments dans ces cellules nécessite des systèmes de délivrance polyfonctionnels. De toute évidence, les médicaments de nano peuvent répondre à cette exigence 7. Dans une vague déferlant de découvertes nanoparticules ont prouvé approprié pour apporter des charges utiles de médicaments chimiothérapeutiques, des protéines et / ou de matériel génétiquement actif pour les cellules cancéreuses. Cependant, les effets indésirables restent à l&#39;annoncehabillé. L&#39;un d&#39;entre eux en rapport avec l&#39;absence de biodégradabilité peut provoquer un dépôt de matière dans les tissus et organes en bonne santé avec le risque de provoquer des maladies. Pour minimiser le dépôt, on introduit l&#39;acide malique non toxique et non immunogène, ce qui est d&#39;origine microbienne et biodégradable à H 2 O et CO 2 8. Nous utilisons le polymère à synthétiser un type covalent tout-en-un de nano médicament. Il contient des agents chimiothérapeutiques attachés chimiquement tels que le témozolomide, la doxorubicine, ou des oligonucleotides antisens et des groupes fonctionnels qui servent extravasation, le ciblage tissulaire, la livraison endosomolytique. Les médicaments sont intrinsèquement clivés de la plate-forme de nano quand ils sont arrivés dans la cellule tumorale ciblée, régénérant ainsi l&#39;activité pharmaceutique complet. Nous décrivons le procédé de production microbienne de la plate-forme de nano polymère, sa purification, et de la synthèse chimique d&#39;un médicament qui contient des nano trastuzumab (Herceptin) pour le cancerLe ciblage et un oligonucléotide anti-sens pour l&#39;inhibition de la surproduction HER2. En appliquant le médicament nano cancer xénogénique humaine sein HER2-positif sur la souris nude, nous démontrons une grande efficacité du traitement du cancer. Les principes de ciblage de la tumeur et l&#39;inactivation de gène introduit ici pour polymalique médicaments nano d&#39;acide peuvent être utilisés dans le traitement d&#39;autres cas de cancer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="935">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Name of Reagent/Material</td>
			<td style="width:263px;">Company</td>
			<td style="width:187px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:79px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-Mercapto-1-ethylamine (Cysteamine (2MEA)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">30078-25G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td colspan="2">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">90-Day release 17&#946;-estradiol pellet&#160;</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 680 C2 maleimide</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">A20344</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amberlite IR 120H</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">6428</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Antifoam Y-30 Emulsion</td>
			<td style="width:263px;">Sigam-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">A5758</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-laminin-411 chain mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-59980</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-pAkt mAb</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">9271S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-PARB mAb</td>
			<td style="width:263px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">556494</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-von Willebrand Factor antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td style="width:187px;">AB6994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Bacto Yeast Extract</td>
			<td style="width:263px;">Bacto, Dickinson/Sparks, MD</td>
			<td style="width:187px;">212720</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Beta-actin</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">3700</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BT-474&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-20</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Calcium Carbonate</td>
			<td style="width:263px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:187px;">36337</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Proliferation Assay kit</td>
			<td>Promega, Madison, WI, USA</td>
			<td>PR-G3580</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centriplus 100&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td style="width:187px;">4414</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dicyclohexylcarbodimide</td>
			<td style="width:263px;">Fluka</td>
			<td style="width:187px;">36650</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">D5796</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eosin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-4</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Galardin (MMP-inhibitors)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling&#160;</td>
			<td style="width:187px;">2118</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxilin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-3</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Hemin from porcine</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">51280</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin</td>
			<td style="width:263px;">Genentech</td>
			<td style="width:187px;">15534</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin (Western blotting)</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">2165S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">IgG2a-kappa murine malignoma</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td style="width:187px;">M77695X5m</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-Star AP Substrate Pack</td>
			<td style="width:263px;">Biorad</td>
			<td style="width:187px;">170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-StarTM AP Substrate Pack&#160;</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">LAL Reagent water&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Lonza, MD</td>
			<td style="width:187px;">W50-1000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminin-411 mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leucine ethyl ester (LOEt)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">61850-10G-F</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Limulus Amebocyte Lysate (LAL) PYROGENT-5000 tests</td>
			<td style="width:263px;">Cambrex BioScience</td>
			<td style="width:187px;">N384</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Lissamin-Morpholino AON</td>
			<td style="width:263px;">Gene Tools</td>
			<td style="width:187px;">Custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-malic acid&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M6413</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Malate dehydrogenase&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M2634</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mal-PEG-Mal</td>
			<td style="width:263px;">Laysan</td>
			<td style="width:187px;">mal-PEG-mal-3400</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">354248</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Milk, nonfat powdered&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Proteomics</td>
			<td>M203-10G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Morpholino oligonucleotides&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GeneTools</td>
			<td style="width:187px;">custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">mPEG5000</td>
			<td style="width:263px;">Lysan</td>
			<td style="width:187px;">mPEG-NH2-5000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-hydroxysuccinimde (NHS)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ACROS Organics</td>
			<td style="width:187px;">15727100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Ninhydrin</td>
			<td style="width:263px;">Merck</td>
			<td style="width:187px;">1.06762.0100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich, 0.45 &#181;m&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Novex &#174; Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC3675</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Nude Mice [Tac:Cr:(MCr)-Foxnnm]&#160;</td>
			<td>Taconic</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 10x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">10010-49</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 1x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">70013</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PD-10 desalting columns</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0851</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Physarum polycephalum M3CVII</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>204388</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce BCA protein assay&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:187px;">23225</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:263px;">Roche</td>
			<td style="width:187px;">1.18362E+11</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protein Detector ELISA Kit</td>
			<td style="width:263px;">KPL</td>
			<td style="width:187px;">54-62-18</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-25 superfine</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0031</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-75&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0050</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex-LH20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0090</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SKBR-3&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-30</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPDP</td>
			<td style="width:263px;">Proteochem&#160;</td>
			<td style="width:187px;">C1116</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streamline-DEAE</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Styryl Red FM 1-43&#160;</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:187px;">T-3163</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TBS 10x</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-6435</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TCEP</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">C4706-2G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TLC, silica coated aluminia sheets</td>
			<td style="width:263px;">Merck, Darmstadt, DE</td>
			<td style="width:187px;">60F254</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trileucine (LLL)</td>
			<td style="width:263px;">Bachem</td>
			<td style="width:187px;">H-3915</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-114&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">X114</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween&#174;20&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vivaspin 20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">VWR</td>
			<td style="width:187px;">14005-302</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:407px;">DAPI</td>
			<td style="width:263px;">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dexmedetomidine</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Atipamezole</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carprofen</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine</td>
			<td style="width:263px;">Foster and Smith, Wisconsin</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

polymalic acid-based nano biopolymers for targeting of multiple tumor markers: an opportunity for personalized medicine?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this diversity, personalized medicine is developed for silencing malignancy associated genes. Nano drugs fit these needs by targeting tumor and delivering antisense oligonucleotides for silencing of genes. As drugs for the treatment are often administered repeatedly, absence of toxicity and negligible immune response are desirable. In the example presented here, a nano medicine is synthesized from the biodegradable, non-toxic and non-immunogenic platform polymalic acid by controlled chemical ligation of antisense oligonucleotides and tumor targeting molecules. The synthesis and treatment is exemplified for human Her2-positive breast cancer using an experimental mouse model. The case can be translated towards synthesis and treatment of other tumors.

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Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

Un exemple d&#39;un médicament à base de nano acide malique est présentée vers la conception rationnelle de médicament personnalisé qui est applicable à un cancer. Il décrit la synthèse d&#39;un médicament pour traiter le cancer nano sein HER2-positif humain dans une souris nude.

Biopolymères à base d&#39;acide malique Nano pour le ciblage des marqueurs tumoraux multiples: une opportunité pour la médecine personnalisée?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this ...

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Research

JoVE Journal

Chemistry

16.5K vues.  Cedars-Sinai Medical Center.  Un exemple d'un médicament à base de nano acide malique est présentée vers la conception rationnelle de médicament personnalisé qui est applicable à un cancer. Il décrit la synthèse d'un médicament pour traiter le cancer nano sein HER2-positif humain dans une souris nude. 

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Glycan Node Analysis: A Bottom-up Approach to Glycomics

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and extracellular events. Many pathological conditions, notably cancer, affect gene expression, which can in turn deregulate the relative abundance and activity levels of glycoside hydrolase and glycosyltransferase enzymes. Unique aberrant whole glycans resulting from deregulated glycosyltransferase(s) are often present in trace quantities within complex biofluids, making their detection difficult and sometimes stochastic. However, with proper sample preparation, one of the oldest forms of mass spectrometry (gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS) can routinely detect the collection of branch-point and linkage-specific monosaccharides ("glycan nodes") present in complex biofluids. Complementary to traditional top-down glycomics techniques, the approach discussed herein involves the collection and condensation of each constituent glycan node in a sample into a single independent analytical signal, which provides detailed structural and quantitative information about changes to the glycome as a whole and reveals potentially deregulated glycosyltransferases. Improvements to the permethylation and subsequent liquid/liquid extraction stages provided herein enhance reproducibility and overall yield by facilitating minimal exposure of permethylated glycans to alkaline aqueous conditions. Modifications to the acetylation stage further increase the extent of reaction and overall yield. Despite their reproducibility, the overall yields of N-acetylhexosamine (HexNAc) partially permethylated alditol acetates (PMAAs) are shown to be inherently lower than their expected theoretical value relative to hexose PMAAs. Calculating the ratio of the area under the extracted ion chromatogram (XIC) for each individual hexose PMAA (or HexNAc PMAA) to the sum of such XIC areas for all hexoses (or HexNAcs) provides a new normalization method that facilitates relative quantification of individual glycan nodes in a sample. Although presently constrained in terms of its absolute limits of detection, this method expedites the analysis of clinical biofluids and shows considerable promise as a complementary approach to traditional top-down glycomics.

This article presents an enhanced form of a novel bottom-up glycomics technique designed to analyze the pooled compositional profile of glycans in unfractionated biofluids through the chemical breakdown of glycans into their constituent linkage-specific monosaccharides for detection by GC-MS. Potential applications include early detection of cancer and other glycan-affective disorders.

Glycan Analyse Node: une approche bottom-up à Glycomics

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and ...

Recherche

Chimie

Highly Stable, Functional Hairy Nanoparticles and Biopolymers from Wood Fibers: Towards Sustainable Nanotechnology

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While metal-based nanoparticles are associated with synthetic and environmental hassles, cellulose introduces a green, sustainable alternative for nanoparticle synthesis. Here, we present the chemical synthesis and separation procedures to produce new classes of hairy nanoparticles (bearing both amorphous and crystalline regions) and biopolymers based on wood fibers. Through periodate oxidation of soft wood pulp, the glucose ring of cellulose is opened at the C2-C3 bond to form 2,3-dialdehyde groups. Further heating of the partially oxidized fibers (e.g., T = 80 &#176;C) results in three products, namely fibrous oxidized cellulose, sterically stabilized nanocrystalline cellulose (SNCC), and dissolved dialdehyde modified cellulose (DAMC), which are well separated by intermittent centrifugation and co-solvent addition. The partially oxidized fibers (without heating) were used as a highly reactive intermediate to react with chlorite for converting almost all aldehyde to carboxyl groups. Co-solvent precipitation and centrifugation resulted in electrosterically stabilized nanocrystalline cellulose (ENCC) and dicarboxylated cellulose (DCC). The aldehyde content of SNCC and consequently surface charge of ENCC (carboxyl content) were precisely controlled by controlling the periodate oxidation reaction time, resulting in highly stable nanoparticles bearing more than 7 mmol functional groups per gram of nanoparticles (e.g., as compared to conventional NCC bearing &#60;&#60; 1 mmol functional group/g). Atomic force microscopy (AFM), transmission electron microscopy (TEM), and scanning electron microscopy (SEM) attested to the rod-like morphology. Conductometric titration, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), nuclear magnetic resonance (NMR), dynamic light scattering (DLS), electrokinetic-sonic-amplitude (ESA) and acoustic attenuation spectroscopy shed light on the superior properties of these nanomaterials.

Synthesis schemes to prepare highly stable wood fiber-based hairy nanoparticles and functional cellulose-based biopolymers have been detailed.

Très stable, fonctionnelle Hairy Nanoparticules et biopolymères à partir de fibres de bois: Vers la nanotechnologie durable

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While ...

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the development of antibody drug conjugates (ADCs) and nanomedicine, fluorescent microscopy and systems chemistry. For many of these applications, specificity of the bioconjugation method used is of prime concern. The Michael addition of maleimides with cysteine(s) on the target proteins is highly selective and proceeds rapidly under mild conditions, making it one of the most popular methods for protein bioconjugation.
We demonstrate here the modification of the only surface-accessible cysteine residue on yeast cytochrome c with a ruthenium(II) bisterpyridine maleimide. The protein bioconjugation is verified by gel electrophoresis and purified by aqueous-based fast protein liquid chromatography in 27% yield of isolated protein material. Structural characterization with MALDI-TOF MS and UV-Vis is then used to verify that the bioconjugation is successful. The protocol shown here is easily applicable to other cysteine - maleimide coupling of proteins to other proteins, dyes, drugs or polymers.

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

This protocol details the important steps required for the bioconjugation of a cysteine containing protein to a maleimide, including reagent purification, reaction conditions, bioconjugate purification and bioconjugate characterization.

Synthèse des bioconjugués protéiques<em&gt; via</em&gt; Cystéine-maléimide Chemistry

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the ...

Low-energy Cathodoluminescence for (Oxy)Nitride Phosphors

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and flexibility of their emission properties can be achieved by controlling their composition and dopants. However, a lot of work is still required to improve their properties and to reduce the production cost. A possible approach is to correlate the luminescence properties of the Sialon particles with their local structural and chemical environment in order to optimize their growth parameters and find novel phosphors. For such a purpose, the low-voltage cathodoluminescence (CL) microscopy is a powerful technique. The use of electron as an excitation source allows detecting most of the luminescence centers, revealing their luminescence distribution spatially and in depth, directly comparing CL results with the other electron-based techniques, and investigating the stability of their luminescence properties under stress. Such advantages for phosphors characterization will be highlighted through examples of investigation on several Sialon phosphors by low-energy CL.

Low-energy Cathodoluminescence for OxyNitride Phosphors

An excellent chemical and luminescence stabilities of (oxy)nitride phosphors present it as an promising alternative to currently used sulfide and oxide phosphors. In this paper, we present the way to investigate its local luminescence properties using low-energy cathodoluminescence (CL).

Cathodoluminescence basse énergie pour (Oxy) luminophores de Nitrure

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and ...

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the inverse electron demand Diels-Alder (IEDDA) cycloaddition between a radiolabeled tetrazines and trans-cyclooctene (TCO) linked to a biomolecule has proven to be a highly effective bioorthogonal approach to imaging specific biological targets. Despite the fact that technetium-99m remains the most widely used isotope in diagnostic nuclear medicine, there is a scarcity of methods for preparing 99mTc-labeled tetrazines. Herein we report the preparation of a family of tridentate-chelate-tetrazine derivatives and their Tc(I) complexes. These hitherto unknown compounds were radiolabeled with 99mTc using a microwave-assisted method in 31% to 83% radiochemical yield. The products are stable in saline and PBS and react rapidly with TCO derivatives in vitro. Their in vivo pre-targeting abilities were demonstrated using a TCO-bisphosphonate (TCO-BP) derivative that localizes to regions of active bone metabolism or injury. In murine studies, the 99mTc-tetrazines showed high activity concentrations in knees and shoulder joints, which was not observed when experiments were performed in the absence of TCO-BP. The overall uptake in non-target organs and pharmacokinetics varied greatly depending on the nature of the linker and polarity of the chelate.

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry.

Préparation et évaluation des<sup&gt; 99m</sup&gt; Tc marquée tridenté chélates de pré-ciblage utilisant Bioorthogonal Chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

An Aptamer-based Sensor for Unchelated Gadolinium(III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples of gadolinium-based contrast agents as a result of incomplete reactions between the ligand and the ion, or as a dissociation product. Since the ion is toxic, its detection is of critical importance. Herein, the design and usage of an aptamer-based sensor (Gd-sensor) for Gd3+ are described. The sensor produces a fluorescence change in response to increasing concentrations of the ion, and has a limit of detection in the nanomolar range (~100 nM with a signal-to-noise ratio of 3). The assay may be run in an aqueous buffer at ambient pH (~7 - 7.4) in a 384-well microplate. The sensor is relatively unreactive toward other physiologically relevant metal ions such as sodium, potassium, and calcium ions, although it is not specific for Gd3+ over other trivalent lanthanides such as europium(III) and terbium(III). Nevertheless, the lanthanides are not commonly found in contrast agents or the biological systems, and the sensor may therefore be used to selectively determine unchelated Gd3+ in aqueous conditions.

An Aptamer-based Sensor for Unchelated GadoliniumIII

The use of polydeoxynucleotide (44-mer aptamer) molecules for sensing unchelated gadolinium(III) ion in an aqueous solution is described. The presence of the ion is detected via an increase in the fluorescence emission of the sensor.

Un capteur basé aptamère pour non chélaté Gadolinium (III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples ...

An Engineered Split-TET2 Enzyme for Chemical-inducible DNA Hydroxymethylation and Epigenetic Remodeling

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control cellular functions. The reversal of DNA methylation, or DNA demethylation, is mediated by the ten-eleven translocation (TET) protein family of dioxygenases. Although it has been widely reported that aberrant DNA methylation and demethylation are associated with developmental defects and cancer, how these epigenetic changes directly contribute to the subsequent alteration in gene expression or disease progression remains unclear, largely owing to the lack of reliable tools to accurately add or remove DNA modifications in the genome at defined temporal and spatial resolution. To overcome this hurdle, we designed a split-TET2 enzyme to enable temporal control of 5-methylcytosine (5mC) oxidation and subsequent remodeling of epigenetic states in mammalian cells by simply adding chemicals. Here, we describe methods for introducing a chemical-inducible epigenome remodeling tool (CiDER), based on an engineered split-TET2 enzyme, into mammalian cells and quantifying the chemical inducible production of 5-hydroxymethylcytosine (5hmC) with immunostaining, flow cytometry or a dot-blot assay. This chemical-inducible epigenome remodeling tool will find broad use in interrogating cellular systems without altering the genetic code, as well as in probing the epigenotype&#8722;phenotype relations in various biological systems.

Detailed protocols for introducing an engineered split-TET2 enzyme (CiDER) into mammalian cells for chemical inducible DNA hydroxymethylation and epigenetic remodeling are presented.

Une Enzyme machiné Split-TET2 pour Hydroxymethylation inductible par produit chimique de l’ADN et le remodelage épigénétique

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control ...

Co-expression of Multiple Chimeric Fluorescent Fusion Proteins in an Efficient Way in Plants

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent proteins and generation of fluorescent fusion proteins have been wildly used as an effective tool to directly visualize the protein localization and dynamics in cells. It is especially useful to compare them with well-known organelle markers after co-expression with the protein of interest. Nevertheless, classical approaches for protein co-expression in plants usually involve multiple independent expression plasmids, and therefore have drawbacks that include low co-expression efficiency, expression-level variation, and high time expenditure in genetic crossing and screening. In this study, we describe a robust and novel method for co-expression of multiple chimeric fluorescent proteins in plants. It overcomes the limitations of the conventional methods by using a single expression vector that is composed of multiple semi-independent expressing cassettes. Each protein expression cassette contains its own functional protein expression elements, and therefore it can be flexibly adjusted to meet diverse expression demand. Also, it is easy and convenient to perform the assembly and manipulation of DNA fragments in the expression plasmid by using an optimized one-step reaction without additional digestion and ligation steps. Furthermore, it is fully compatible with current fluorescent protein derived bio-imaging technologies and applications, such as FRET and BiFC. As a validation of the method, we employed this new system to co-express fluorescently fused vacuolar sorting receptor and secretory carrier membrane proteins. The results show that their perspective subcellular localizations are the same as in previous studies by both transient expression and genetic transformation in plants.

We have developed a novel method for co-expressing multiple chimeric fluorescent fusion proteins in plants to overcome the difficulties of conventional methods. It takes advantage of using a single expression plasmid that contains multiple functionally independent protein expressing cassettes to achieve protein co-expression.

La co-expression de multiples protéines chimériques fluorescentes Fusion de façon efficace dans les plantes

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent ...

Iron Nanowire Fabrication by Nano-Porous Anodized Aluminum and its Characterization

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and data storage. We demonstrate a fabrication method for iron (Fe) nanowires&#160;via electrochemical deposition into anodic&#160;alumina oxide (AAO) templates. The templates are fabricated by anodization of aluminum (Al) discs, and the pore length and diameter are controlled by changing the anodizing conditions. Pores with an average diameter of around 120 nm are created using oxalic acid as the electrolyte. Using this method, cylindrical nanowires are synthesized, which are released by dissolving the alumina using a selective chemical etchant.

In this work, we describe a&#160;protocol to fabricate iron nanowires, including the formation of the porous alumina membrane that is used as the template, electrodeposition into templates using electrolyte solution, and the release of the nanowires into the solution.

Fabrication de nanofils de fer par nano-Porous Anodized Aluminum et sa caractérisation

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and ...

Organic Structure-directing Agent-free Synthesis for *BEA-type Zeolite Membrane

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in petroleum and petrochemical fields because of their high thermal, chemical, and mechanical strength. A *BEA-type zeolite is an interesting membrane material because of its large pore size and wide Si/Al range. This manuscript presents a protocol for *BEA membrane preparation by a secondary growth method that does not use an organic structure-directing agent (OSDA). The preparation protocol consists of four steps: pretreatment of support, seed preparation, dip-coating, and membrane crystallization. First, the *BEA seed crystal is prepared by conventional hydrothermal synthesis using OSDA. The synthesized seed crystal is loaded on the outer surface of a 3 cm long tubular &#945;-Al2O3 support by a dip-coating method. The loaded seed layer is prepared with the secondary growth method using a hydrothermal treatment at 393 K for 7 days without using OSDA. A *BEA membrane having very few defects is successfully obtained. The seed preparation and dip-coating steps strongly affect the membrane quality.

A *BEA seed crystal was loaded on a porous &#945;-Al2O3 support by the dip-coating method, and hydrothermally grown without using an organic structure-directing agent. A *BEA-type zeolite membrane having very few defects was successfully prepared by the secondary growth method.

Synthèse sans agent de direction de structure organique pour la membrane zéolite de type BEA

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in ...