Les porteurs de médicaments en polymère cationique ont les avantages d’une bonne stabilité, d’une faible immunogénicité et d’une préparation et d’une modification faciles. Ici, nous offrons une méthode rapide et simple pour sa synthèse. La méthode réversible de polymérisation de transfert de chaîne d’addition-fragmentation est une méthode applicable aux polymères de bloc de rendement avec le poids et la structure moléculaires commandés et portant des groupes fonctionnels.
Ces porteurs de médicaments peuvent simultanément transporter différents médicaments pour obtenir le traitement de collaboration du cancer, de l’inflammation et d’autres maladies. La polymérisation IFT est une méthode classique, et ce protocole donne un exemple de son application dans la thérapie génique. La clé du succès pour la synthèse de ce polymère est de contrôler précisément la température de réaction.
Il est plus conseillé d’utiliser un bain d’huile qu’un bain d’eau. Pour commencer cette procédure, obtenir un flacon à fond rond avec un bouchon en caoutchouc et un agitateur magnétique à utiliser comme bouteille de polymérisation. Dissoudre 1,87 gramme d’HEMA bis-hydroxy dans un millilitre d’eau distillée dans la bouteille de polymérisation.
Dans un bécher de cinq millilitres, dissoudre 0,03 grammes de CTP et 0,02 grammes d’ACVA en 0,5 millilitres de 1, 4-dioxane. Ajouter ce mélange à la bouteille de polymérisation. Ensuite, utilisez un piège à condensats pour congeler la solution dans la bouteille de polymérisation.
Fixez la bouteille au support en fer et utilisez un conduit trébuché à l’aide d’une aiguille pour aspirer et injecter de l’azote dans le mélange de réaction. Ensuite, sceller la bouteille de polymérisation et décongeler la solution à température ambiante pendant 30 minutes. Répétez ce cycle gel-pompe-dégel trois fois.
Après cela, placez la bouteille dans un bain d’huile à 70 degrés Celsius et laissez la solution réagir pendant 24 heures sous l’atmosphère azoté. Le lendemain, refroidissez la bouteille de polymérisation à zéro degré Celsius et ouvrez le bouchon en caoutchouc pour mettre fin à la réaction de polymérisation. Ensuite, précooler l’acétone dans un réfrigérateur à 20 degrés Celsius négatif pendant deux heures, et le mélanger avec la solution de réaction dans la bouteille de polymérisation à un rapport de 50 pour un.
Centrifugeuse ce mélange à 8200 fois g pendant 10 minutes pour enlever l’acétone et recueillir le précipité. Pour purifier le poly bis-hydroxy synthétisé HEMA, dissoudre le précipité recueilli en deux millilitres d’eau pure. Ensuite, mélangez-le avec 100 millilitres d’acétone précoolée à un rapport de un à 50.
Centrifugez la solution à 8 200 g pendant 10 minutes pour recueillir le précipité. Répétez ce processus de purification de dissoudre, mélanger et centrifuger le précipité trois fois. Tout d’abord, dissoudre 0,96 grammes d’APMA et 0,93 grammes de l’HEMA purifié poly bis-hydroxy dans cinq millilitres d’eau distillée dans un bécher de 10 millilitres.
Dissoudre 0,01 grammes d’ACVA en 0,5 millilitres de 1, 4-dioxane, et ajouter cela à l’APMA et poly bis-hydroxy HEMA solution. Transférer ce mélange dans une bouteille de polymérisation et ventiler avec de l’azote sec pendant une heure. Ensuite, mettez la bouteille de polymérisation dans un bain d’huile à 70 degrés Celsius, et laissez-la réagir pendant 24 heures sous l’atmosphère azoté.
Le lendemain, refroidissez la bouteille de polymérisation à zéro degré Celsius et ouvrez le bouchon en caoutchouc pour mettre fin à la solution de processus de polymérisation. Pour commencer, grainez les cellules MCF-7 dans les puits d’une plaque de six puits à une densité de 20 000 cellules par puits. Culture des cellules dans un incubateur humidifié à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone pendant 12 heures.
Après cela, remplacez le milieu de culture par le milieu de culture frais contenant des polymères cationiques et des polyplex pDNA de différents ratios azote-phosphore. Culture des cellules pendant six heures, puis remplacer le milieu par deux millilitres de RPMI frais 1640 moyen. Continuer à faire la culture pendant 48 heures.
Ensuite, recueillir les cellules, et utiliser un cytomètre d’écoulement pour détecter la fluorescence verte. Dans cette étude, les copolymères biocompatibles biocompatibles méthionine-fonctionnalisés sont préparés par l’intermédiaire de la méthode réversible de transfert de chaîne d’addition-fragmentation, et la capacité plasmide de teint d’ADN du mBG obtenu et de leur efficacité de transfection est étudiée. La taille moyenne des particules et le potentiel zeta des polyplex mBG/pDNA sont de 124 nanomètres et plus 15,7 millivolts, respectivement, à un rapport N-to-P de 16.
Le retardement électrophoretic révèle que pDNA avec un rapport N-to-P de zéro peut se déplacer sans retenue dans le gel d’agarose et est observé comme une bande dans l’imageur de gel. Lorsque pDNA est complexé avec mBG, le mouvement de pDNA est retardé, et par la suite, la luminosité de la bande est réduite. Cela montre que mBG peut complètement complexe le pDNA lorsque le N à P est supérieur à quatre.
La cytotoxicité des polyplex mBG/pDNA est ensuite mesurée à l’aide de l’analyse MTT standard Ces résultats montrent que les polyplex mBG/pDNA ont une cytotoxicité que les polyplex pei/pDNA aux ratios N-to-P de quatre, huit, 16 et 32. Comme on peut également le voir, la cytotoxicité des polyplex mBG/pDNA augmente avec l’augmentation du rapport N-to-P. Cette cytotoxicité accrue est le résultat de la composante GPMA chargée positivement.
Le rapport N-to-P utilisé dans l’expérience de transfection pDNA est sélectionné en fonction des résultats de la cytotoxicité. Les capacités de transfection de mBG1, mBG2, et mBG3 sont comparées en mesurant l’intensité de fluorescence de GFP, et les résultats ont prouvé que mBG3 est le porteur optimal de gène. Il est important d’épuiser l’air du flacon de limon à fond rond et de maintenir la température de réaction.
Les porteurs de médicaments polymères obtenus peuvent être appliqués à la co-administration de médicaments chimiothérapeutiques et de médicaments génétiques pour traiter synergiquement le cancer pharmacorésistant. Le mécanisme moléculaire de la combinaison des drogues génétiques et des drogues chimiothérapeutiques peut être davantage exploré pour le traitement des tumeurs pharmacorésistantes. L’acétone est considérée comme faiblement toxique pour sa toxicité aiguë.
Les clés, l’inhalation ou le contact avec les yeux ou la peau doivent être évités. Évitez au risque d’échaudage pendant la procédure de chauffage.
