Ce travail est soutenu par une subvention de développement national scientifique de l&#39;American Heart Association: 10SDG3500034 et UTMB-BCN fonds de démarrage pour SSM. Les auteurs remercient les installations Cryo-EM et calcul scientifique au Centre de Sealy pour la biologie structurale à l&#39;UTMB ( <a href="http://www.scsb.utmb.edu">www.scsb.utmb.edu</a> ), ainsi que les Drs. Steve Ludtke et Ed Egelman de l&#39;aide avec les algorithmes de reconstruction hélicoïdaux 2D et 3D.

1. Préparation de l&#39;échantillon <ol><li> l&#39;échange de tampon FVIII humain BDD-FVIII porcin et 14 BDD-15 contre du tampon HBS-Ca (20 mM d&#39;HEPES, 150 mM de NaCl, 5 mM de CaCl2, pH = 7,4) et on concentre à 1,2 mg / ml. Conserver la solution de protéine à -80 ° C. </li><li> Préparer nanotubes lipidiques (LNT) en mélangeant galactosylcéramide (GC) et la phosphatidylsérine (PS) à 01:04 en poids / poids dans du chloroforme rapport. On évapore le chloroforme sous atmosphère d&#39;argon et de solubiliser les lipides dans un tampon HBS à 1 mg / ml. Conserver la solution de LNT à 4 ° C. </li></ol> 2. Cryo-microscopie électronique de FVIII-LNT <ol><li> Cryo-EM Préparation de l&#39;échantillon <ol><li> Décharge luminescente 300 mesh Quantifoil R2 / 2 grilles de cuivre (côté de carbone jusqu&#39;à) dans un mélange de O 2 et H 2 gaz pendant 10 secondes à 50 W. </li><li> Mélanger les solutions FVIII et LNT dans un tampon HBS-Ca 1:1 w / w rapport et incuber pendant 15 min à température ambiante. </li><li> Appliquez une goutte de 2,5 piéchantillon de FVIII-LNT à la grille de microscopie électronique hydrophile dans la chambre humidifiée Vitrobot Mark IV (100% d&#39;humidité). </li><li> Blot et flash geler la grille (un blot pour 3.5 sec, la force effacer 1) en liquide C 2 H 6, refroidi par liquide N 2 pour obtenir de la glace amorphe. </li><li> réseaux de magasins dans des boîtes de rangement sous N2 liquide (LN2). </li></ol></li><li> Collecte de données Cryo-EM NOTE: Le JEM2100-LaB6 (année 2010) est équipé d&#39;un système d&#39;exploitation TEMCON constitué d&#39;un ordinateur connecté au microscope électronique, un écran avec des fenêtres de lecture du système de vide, le système d&#39;illumination, HT, les courants de lentille et ainsi en marche, et deux panneaux: gauche et droite, placée de chaque côté de la colonne. Le passage du faisceau X, Y boutons (MAJ Y, Y EIPD) et le multifonctions (DEF / STIG) boutons sont sur les deux tableaux. Sur le panneau de gauche est le bouton d&#39;éclairage (brigthness). Sur le panneau de droite sont: le grossissement (MAG / CAM LONGUEUR) et mise au point (FOCUS) boutons et les trois Imaging (MAG1, MAG2, LOWMAG) et un réseau de diffraction (DIFF) modes boutons. Nous acquérons nos données dans MAG1 à alpha 2. Les conditions minimales de la dose d&#39;illumination (MDS) nécessaires à l&#39;acquisition de données Cryo-EM sont fixés F1 à F6, boutons de la rangée du haut sur le panneau arrière. Dans ce protocole, les paramètres génériques sont utilisés: F1 - lever / abaisser l&#39;écran, F2 - mode de recherche, F3 - Mode FOCUS, F4 - mode PHOTO, F5 - MDS OFF / ON et F6 - BEAM BLANC, utilisé pour protéger l&#39;échantillon de rayonnement endommager en déviant le faisceau. <ol><li> Placez le porte-cryo dans le cryo-poste et remplir le vase de Dewar de la porte et la cryo-poste avec LN2. Lorsque la température atteint -192 ° C, obturateur ouvert sur la pointe de la titulaire, le lieu préalablement congelé grille Cryo-EM dans l&#39;endroit désigné et sûr d&#39;un collier de serrage. </li><li> Insérez le porte-cryo dans le microscope électronique. Remplir le Dewar du porte-cryo et la chambre anti-contaminateur avec LN2. Attendez que le titulaire se stabiliser pendant 30-60 min. Appuyez sur F6 sur ettourner le filament sur. Lorsque le filament est saturée, appuyez sur F6 au large et l&#39;ouverture du volet sur le support pour afficher la grille. </li><li> Appuyez sur Bas Mag / alpha 1 (fixé à 200X mag) et de localiser les zones de glace mince sur la grille. </li><li> Mettez à MAG 1/alpha 2 pour régler la dose minimum de mode (MDS) et l&#39;acquisition de données Cryo-EM à de faibles doses d&#39;électrons, sans endommager l&#39;échantillon. <ol><li> Appuyez sur F2 pour régler le mode de recherche. Réglez l&#39;agrandissement à 40 000 x. Agrandir poutre avec brigtness bouton de dose d&#39;électrons minimale ~ 0,04 e - / A 2 · s. Appuyez sur DIFF pour passer en mode de diffraction. Régler la longueur de l&#39;appareil photo à 120 cm avec bouton MAG / CAM LONGUEUR. Localiser les zones de la grille à l&#39;intérieur des zones pré-sélectionnées dans LOWMAG qui ont des nanotubes lipidiques dans les trous de la couche de carbone. </li><li> Appuyez sur F4 pour passer en mode photo à 40 000 X grossissement et mis en lumière avec LUMINOSITE bouton à des doses de 16-25 e - / 2 · s. Appuyez sur le bouton standard mise au point de fixer les conditions de mise au point le réglage de la hauteur Zde l&#39;échantillon avec les Z touches UP / DOWN (du panneau de commande à droite). Réglez défocalisation entre -1,5 et -2,5 um. </li><li> Alignez RECHERCHE et le mode PHOTO par dessiner un carré dans la fenêtre Live View sur l&#39;écran numérique de l&#39;appareil photo en mode de recherche correspondant à la zone à imager en mode PHOTO. </li><li> Appuyez sur F3 pour régler le mode de mise au point à 100 000 X grossissement. Concentrez-éclairage pour couvrir le capteur CCD (~ 4 - 5 cm de rayon) et hors axe pour ne pas irradier la zone à imager en mode PHOTO. Réglez défocalisation à ~ -1,5 et -2,5 um avec le bouton FOCUS et correcte pour l&#39;astigmatisme de l&#39;image avec les boutons DEF / STIG. </li></ol></li><li> Sélectionnez le FVIII-LNT à imager en mode de recherche par l&#39;acquisition d&#39;images en direct dans la fenêtre Live View sur l&#39;écran de l&#39;appareil photo numérique. Centrez le FVIII-LNT dans le carré dessiné sur la fenêtre de vue en direct. </li><li> Enregistrer une image numérique sur la caméra CCD à 52000 grossissement X efficace et 0,5 exposition sec pour passer en mode photo et en cliquant sur le acquirE bouton sur l&#39;écran de la caméra de micrographie numérique. Les conditions d&#39;acquisition d&#39;image sont définis comme le blanc de faisceau (de VOLETS) ouvert uniquement lorsque l&#39;image est acquise en mode PHOTO. </li><li> Vérifier la qualité et la défocalisation de l&#39;image acquise en appuyant sur CTRL-F pour obtenir une transformée de Fourier rapide (FFT). </li></ol></li></ol> 3. Reconstruction 3D REMARQUE: Le logiciel d&#39;analyse d&#39;images utilisés pour l&#39;analyse 2D et 3D: EMAN2 et IHRSR sont disponibles gratuitement. EMAN2 peuvent être téléchargés à partir de http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN2/Install. Le logiciel IHRSR peut être obtenu à partir de professeur Egelman: egelman@virginia.edu. Les améliorations de IHRSR finales sont exécutés sur le Texas Advanced Computing cluster central: http://www.tacc.utexas.edu/ à l&#39;Université du Texas, Austin. L&#39;algorithme de reconstruction 3D montre la figure 1 se compose de deux étapes principales: la sélection d&#39;abord un ensemble homogène de segments hélicoïdaux (particules) avec la référence libre alignme 2Dnt (RFA) des algorithmes mis en oeuvre dans EMAN 2, deuxième réalisation d&#39;une reconstruction 3D à partir des paramètres hélicoïdaux et des algorithmes de rétroprojection incorporés dans IHRSR. La première étape utilise les programmes développés pour la sélection des ensembles de particules homogènes pour la reconstruction 3D avec seule particule SPA (algorithmes) pour lesquels EMAN2 a été spécialement développés et distribués: http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN2. Cette étape a été adapté aux données Cryo-EM. La seconde étape est obtenue avec l&#39;algorithme IHRSR, qui est spécifiquement conçu pour le type d&#39;ensembles hélicoïdaux obtenus avec les formes du facteur VIII recombinant. Cet algorithme a été largement documenté dans la littérature scientifique 12. <ol><li> Effectuer l&#39;analyse d&#39;image 2D avec le EMAN2 scientifique bains de traitement d&#39;image: http://blake.bcm.edu/eman2/doxygen_html 16 pour sélectionner particule homogène (segment hélicoïdal) des ensembles pour la reconstruction hélicoïdale. <ol><li> Sélectionnez micrographies Cryo-EM avec straight et bien organisé tubes hélicoïdaux avec le logiciel de l&#39;appareil photo numérique et des outils de visualisation. </li><li> Inverser, normaliser et filtrer les pixels rayons X dans l&#39;interface graphique e2workflow.py, la reconstruction de particules unique d&#39;option (SPR): http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN2/Programs/e2projectmanager </li><li> Importez les images inversées, normalisées et pixel X-ray filtré dans l&#39;interface graphique de e2helixboxer.py. Sélectionnez tubes hélicoïdaux FVIII-LNT et le segment à 256 x 256 pixels (2,9 Å / pix) avec 90% de chevauchement à l&#39;aide: http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN2/Programs/e2helixboxer </li><li> Évaluer la défocalisation des micrographies originaux et appliquer contraste fonction de transfert (FCT) de correction (uniquement de correction de phase) pour les segments hélicoïdaux des mêmes micrographies avec l&#39;option e2ctf.py incorporé dans le e2workflow.py: http://blake.bcm. edu/emanwiki/EMAN2/Programs/e2ctf. </li><li> Générer des particules initiales (segments hélicoïdaux) définit dans l&#39;interface graphique e2workflow.py option - SPR: http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN2/Programs/e2workflow. </li><li> Calculer des moyennes de classe 2D avec l&#39;algorithme de e2refine2d.py appliquer référence sans classification k-moyenne pour sélectionner les ensembles de données homogènes avec le même LNT de diamètre et le degré de l&#39;ordre hélicoïdale (figure 2), à la suite du script: «e2refine2d.py - iter = 8 - naliref = 5 - nbasisfp = 8 - path = r2d_001 - entrée = INPUT.hdf - NCL = 51 - simcmp = point - simalign = rotate_translate_flip - classaligncmp = point - classraligncmp = Phase - classiter = 2 - classkeep = 0,8 - classnormproc = normalize.edgemean - classaverager = moyenne - normproj-classkeepsig &#39;, en changeant la valeur NCL en conséquence. <ol><li> Classer l&#39;ensemble dans de les LNC = 151 &#39;150 catégories de plus de 8 itérations avec&#39; classkeep = 0,8 &#39;données initiales, ce qui signifie que les particules de moins de 80% de similarité avec la moyenne de la classe sont exclus de la classe donnée. http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN2/Programs/e2refine2d </li><li> Fusionner des particules à partir des moyennes de classeavec diffraction hélicoïdale prononcée dans e2display.py pour créer ensemble de données intermédiaire. </li><li> Classer l&#39;ensemble dans de les LNC = 51 &#39;50 catégories de différencier les classes avec le même diamètre et le degré de l&#39;ordre des données intermédiaires. </li><li> Fusionner des particules à partir des classes de même diamètre et le degré de l&#39;ordre dans e2display.py pour créer l&#39;ensemble de données final pour la reconstruction tridimensionnelle: http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN2/Programs/emselector. </li></ol></li></ol></li><li> Effectuer reconstruction hélicoïdale avec l&#39;algorithme itératif hélicoïdal réel espace de reconstruction (IHRSR), comme décrit dans Egelman 17, 18. <ol><li> Estimer la hausse, Az (A) de l&#39;hélice FVIII-LNT de Fourier combinée transformer des particules dans l&#39;ensemble de données final. </li><li> Définir l&#39;angle azimutal ΔΦ (º) en exécutant un critère de IHRSR parallèles avec une Az constant, croissant ΔΦ de 576; 60 ° à 5 °. </li><li> Exécutez 100 cycles IHRSR consécutives pour chaque ensemble d&#39;un cylindre sans relief comme un volume initial et les paramètres hélicoïdaux initiales Az et ΔΦ tels que définis au point 3.2.1 des données finales. et 3.2.2. </li><li> Inspectez les derniers volumes de la convergence des paramètres hélicoïdaux et la correspondance entre les moyennes de classe de la classification 2D de l&#39;ensemble de données final et les projections de la reconstruction de IHRSR finale. </li><li> Imposer une symétrie aux reconstructions 3D finale, correspondant à la distribution de l&#39;unité asymétrique observé dans les volumes finaux asymétriques 3D: quatre fois pour le FVIII humain-LNT et 5 fois pour le FVIII porcin-LNT. Exécutez un autre 100 cycles de raffinement, pour une reconstruction finale 3D symétrisé. </li><li> Calculer la courbe de corrélation Fourier Shell pour les deux volumes en séparant d&#39;abord l&#39;ensemble de paires et impaires données correspondantes: «e2proc2d.py &lt;infile&gt; &lt;outfile&gt; - split = 2 &#39;. Ensuite, exécutez 100 IHRSR améliorations consécutives comme décrit au paragraphe 3.2.3. Calculer le FSC des volumes 3D créés à partir des ensembles de données pairs et impairs: «e2proc3d.py evenvolume.mrc fsc.txt - calcfsc = oddmap.mrc. </li></ol></li><li> Visualisez et Segment volumes FVIII-LNT dans UCSF chimère. </li><li><ol><li> Ouvrez les derniers volumes de l&#39;étape 3.2.5. dans UCSF Chimera et définir le niveau de contour à 0,005 dans le OUTILS&gt; données de volume&gt; option Volume Viewer. </li><li> Dans OUTILS&gt; données de volume&gt; Carte Segment, sélectionnez le volume dans l&#39;onglet PLAN DU SEGMENT et cliquez sur un segment à volume. </li><li> segments du groupe correspondant à une cellule de l&#39;unité en sélectionnant avec CTRL + SHIFT et le groupe de clic. </li><li> Colorer les segments par la cellule de l&#39;unité et l&#39;hélice avec ACTIONS&gt; option de couleur pour souligner les caractéristiques structurelles. </li></ol></li></ol> 4. Tomographie Electron <ol><li> Négativement Stained FVIII-LNT Préparation de l&#39;échantillon <ol> &lt;li&gt; Préparez échantillons FVIII-LNT que pour les expériences Cryo-EM. </li><li> Effluves grille de cuivre à 300 mailles recouverte de carbone (côté vers le haut du carbone) dans un mélange de O 2 et de H 2 gazeux pendant 10 sec à 50 W, comme pour les expériences Cryo-EM. </li><li> Appliquez une goutte de 2,5 pi suspension FVIII-LNT avec 6 nm nanoparticules d&#39;or colloïdal sur la grille, éponger l&#39;excès de liquide et tacher négativement en appliquant 5 pi solution à 1% d&#39;acétate d&#39;uranyle pendant 2 min. Éponger l&#39;excès de liquide et de l&#39;air sec de la grille. </li></ol></li><li> Collecte de données de tomographie électronique <ol><li> Transférer la grille dans le support d&#39;inclinaison unique. </li><li> Transférer le support dans le microscope électronique. </li><li> Collecter automatiquement série d&#39;inclinaison avec le logiciel de SerialEM 19 à 2 ° par incréments sur une plage angulaire de -60 ° à 60 images ° et enregistrer avec une caméra CCD à 52 000 X grossissement efficace, de -6 à -10 um défocalisation et la dose d&#39;électrons de 150 - 170 élémentctrons / Å 2 · s par tomographie. </li></ol></li><li> Electron tomographie reconstruction du FVIII-LNT Remarque: Reconstruire la série inclinée pFVIII-LNT et le facteur VIII humain-LNT acquis en 4.2. avec l&#39;option ETomo du logiciel IMOD suivant le tutoriel: http://bio3d.colorado.edu/imod/doc/etomoTutorial.html <ol><li> En utilisant une fenêtre de terminal, ouvrez la tomographie en 3DMOD. http://bio3d.colorado.edu/imod/doc/3dmodguide.html. </li><li> Bin la tomographie par 4 avec le IMOD BINVOL commande pour diminuer la taille de la tomographie. </li><li> Choisissez le bon angle pour faire tourner le nanotube lipidique long de l&#39;axe Y dans la tomographie en cellule en utilisant la commande IMOD ROTATEVOL. </li><li> Tournez la tomographie complète avec la commande IMOD ROTATEVOL. </li><li> Recadrer le lipide nanotube choisi, orienté selon l&#39;axe Y avec la commande CLIP REDIMENSIONNER IMOD. </li><li> Ouvrez le sous-tomographie recadrée avec 3DMOD. </li><li> Cliquez sur la tomographie de visualiser l&#39;agencement des molécules de facteur VIII longles tranches dans de l&#39;axe Z et le long de l&#39;axe Y dans le volume sous-tomogramme. </li></ol></li></ol>

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Les auteurs déclarent qu&#39;ils n&#39;ont aucun intérêt financier compétition et ils peuvent être contactés directement en ce qui concerne l&#39;une des procédures publiées dans ce manuscrit.

Dans ce travail, une méthodologie est présentée à la différence entre les deux organisations de protéines hautement homologues membranaires: FVIII humain et porcin auto-assemblée sur des nanotubes lipidiques dans les conditions rencontrées dans le corps humain. Dans la procédure décrite, humain et porcin FVIII sont organisées de façon hélicoïdale avec succès sur des nanotubes de lipides, qui est l&#39;étape la plus critique. La prochaine étape cru...

La coagulation du sang de facteur VIII (FVIII) est une grande glycoprotéine de 2332 acides aminés organisés en six domaines: A1-A2-B-A3-C1-C2 3. Lors de l&#39;activation de la thrombine FVIII agit comme cofacteur pour le facteur IXa dans le complexe tenase liée à la membrane. La liaison de FVIII activé (FVIIIa) pour FIXa d&#39;une manière à la membrane augmente en fonction FIXa efficacité protéolytique plus de 10 5 fois, ce qui est critique pour l&#39;efficacité de coagulation de sang 4. Malgré le rôle important dans la coagulation FVIII joue et la formation du complexe tenase, la structure de FVIII membranaire fonctionnel est encore à résoudre. Pour y remédier, nanotubes de bicouche lipidique (LNT) riche en phosphatidylsérine (PS), capables de se lier avec une forte affinité FVIII 8, 9 et ressemblant à la surface des plaquettes activées ont été mises au point 10. Organisation hélicoïdale consécutive de FVIII lié à LNT a été prouvé pour être effive pour déterminer la structure de FVIII état ​​liée à la membrane par Cryo-EM 5. Fonctionnalisé LNT sont un système idéal pour étudier la protéine-protéine et des interactions protéine-membrane des protéines associées à la membrane de manière hélicoïdale organisées par cryo-EM 11, 12. Cryo-EM présente l&#39;avantage par rapport aux procédés traditionnels de structure telles que la cristallographie aux rayons X et résonance magnétique nucléaire, que l&#39;échantillon est conservé à la plus proche de l&#39;environnement physiologique (tampon, une membrane, le pH), sans additifs et des isotopes. Dans le cas du FVIII, étude de la structure membranaire avec cette technique est encore plus physiologiquement pertinents, comme la LNT ressemblent beaucoup par la taille, la forme et la composition des pseudopodes des plaquettes activées où les complexes de tenase assemblent in vivo. Les défauts et les carences de la cause FVIII hémophilie A, un trouble de saignement grave qui affecte de 1 à 5000 hommes de la population humaine 4, 6. La plupart des ethérapie éfficace pour l&#39;hémophilie A est l&#39;administration long de la vie du FVIII humain recombinant (facteur VIII humain). Une complication importante de la thérapie FVIII recombinant hémophilie A est le développement d&#39;anticorps inhibiteurs de la forme humaine qui touche environ 30% des patients atteints d&#39;hémophilie A 13. Dans ce cas, le FVIII porcin (pFVIII) concentré est utilisé, en tant que facteur VIII porcin affichages faible réactivité croisée avec des anticorps inhibiteurs contre le FVIII humain et forme des complexes fonctionnels avec FIXa humain 7. Fixant l&#39;organisation liée à la membrane des deux porcine et formes de FVIII humains est important de comprendre la base structurelle de la fonction et les implications pour l&#39;hémostase de sang cofacteur FVIII. Dans cette étude, nous décrivons une combinaison de lipides nanotechnologies, Cryo-EM, et analyse de la structure visant à résoudre l&#39;organisation liée à la membrane de deux formes de FVIII hautement homologues. Les données Cryo-EM présentés et structures 3D pour Porci hélice organiséFVIII humain ne et chargée négativement sur LNT montrent le potentiel de la nanotechnologie proposé comme base pour la détermination de structure et des facteurs FVIII et de complexes dans un environnement de membrane physiologique coagulation liés à la membrane.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1009">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:239px;">JEM2100 with LaB6&#160;</td>
			<td style="width:205px;">JEOL Ltd.</td>
			<td style="width:119px;">JEM-2100</td>
			<td style="width:447px;">operated at 200 kV</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:239px;">with TEMCON software</td>
			<td style="width:205px;">JEOL Ltd.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Gatan626 Cryo-holder</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">626.DH</td>
			<td style="width:447px;">cooled to -175 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">with temperature controler unit</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Gatan 4K x 4K CCD camera</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">US4000</td>
			<td style="width:447px;">4096 x 4096 pixel at 15 microns/pixel physical resolution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Solarus Model 950 plasma cleaner</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Vitrobot Mark IV</td>
			<td style="width:205px;">FEI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;"></td>
			<td style="width:205px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Materials</td>
			<td style="width:205px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Carbon coated 300 mesh 3mm copper grid</td>
			<td style="width:205px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">01821</td>
			<td style="width:447px;">plasma cleaned for 10 s on high power</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:239px;">Quantifoil R2/2 300 mesh</td>
			<td style="width:205px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:119px;">Q225-CR2</td>
			<td style="width:447px;">Carbon coated 300 mesh Cu grids with 2 mm in diameters holes&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Uranyl acetate dihydrate</td>
			<td style="width:205px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">19481</td>
			<td style="width:447px;">1% solution, filtered</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:239px;">Galactosyl ceramide</td>
			<td style="width:205px;">Avanti Polar Lipids Inc.&#160;</td>
			<td style="width:119px;">860546</td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Dioleoyl-sn-glycero-phospho-L-serine</td>
			<td style="width:205px;">Avanti Polar Lipids Inc.&#160;</td>
			<td style="width:119px;">840035</td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;"></td>
			<td style="width:205px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Software</td>
			<td style="width:205px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:239px;">EM software Digital Micrograph</td>
			<td style="width:205px;">Gatan, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://www.gatan.com/DM/">http://www.gatan.com/DM/</a></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">EM software EMAN</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN/">http://blake.bcm.edu/emanwiki/EMAN/&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;">EM software Spider</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://spider.wadsworth.org/spider_doc/spider/docs/spider.html">http://spider.wadsworth.org/spider_doc/spider/docs/spider.html</a></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">EM software IHRSR</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;">Programs available from Edward H. Egelman http://people.virginia.edu/~ehe2n/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">EM software (IMOD)</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://bio3d.colorado.edu/imod/">http://bio3d.colorado.edu/imod/&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">EM software (SerialEM)</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="ftp://bio3d.colorado.edu/pub/SerialEM/">ftp://bio3d.colorado.edu/pub/SerialEM/</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">UCSF-Chimera</td>
			<td style="width:205px;">free download</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:447px;"><a href="http://www.cgl.ucsf.edu/chimera/download.html">http://www.cgl.ucsf.edu/chimera/download.html</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

helical organization of blood coagulation factor viii on lipid nanotubes

<html> Cryo-microscopie électronique (cryo-ME) 1 est une approche puissante pour étudier la structure fonctionnelle des protéines et complexes dans un environnement hydraté de l&#39;Etat et de la membrane 2. Le facteur de coagulation VIII (FVIII) 3 est une glycoprotéine du plasma sanguin multi-domaines. Défaut ou l&#39;insuffisance de facteur VIII est la cause pour le type d&#39;hémophilie A - un trouble de saignement grave. Lors de l&#39;activation protéolytique du FVIII se lie à la sérine protéase du facteur IXa sur la membrane plaquettaire chargée négativement, ce qui est essentiel pour la coagulation sanguine normale 4. Malgré le rôle essentiel dans la coagulation FVIII joue, des informations structurelles pour son état ​​membranaire est incomplète 5. Recombinant concentré de facteur VIII est le médicament le plus efficace contre le type de l&#39;hémophilie A et disponibles dans le commerce FVIII peut être exprimée comme humaine ou porcine, les deux complexes fonctionnels formant avec le facteur humain IX 6,7. &quot;&gt; Dans cette étude, nous présentons une combinaison de cryo-microscopie électronique (cryo-ME), lipides nanotechnologie et de la structure d&#39;analyse appliquée pour résoudre la structure de deux formes de FVIII hautement homologues membranaire. Humain et porcin La méthodologie développée dans notre laboratoire d&#39;organiser de manière hélicoïdale les deux formes de FVIII recombinants fonctionnels sur les nanotubes de lipides chargés négativement (LNT) est décrite. Les résultats représentatifs montrent que notre approche est suffisamment sensible pour définir les différences dans l&#39;organisation hélicoïdale entre les deux fortement homologue en séquence (identité de séquence de 86% ) des protéines. protocoles détaillés pour l&#39;organisation hélicoïdale, Cryo-EM et la tomographie électronique (ET) d&#39;acquisition de données sont donnés. bidimensionnel (2D) et en trois dimensions (3D) analyse de la structure appliquées pour obtenir les reconstructions 3D humaine et porcine FVIII-LNT est discutée. Les structures humaines et porcines FVIII-LNT présentés montrent le potentiel de la méthodologie proposée pour Calculate l&#39;organisation fonctionnelle, liée à la membrane de la coagulation sanguine facteur VIII à haute résolution.

FVIII porcin recombinant humain et ont été organisés avec succès en hélice sur chargée négativement unique LNT bicouche, ressemblant à la surface des plaquettes activées. L&#39;organisation hélicoïdale de l&#39;humain et porcin FVIII-LNT était conforme à travers les micrographies numériques collectées (Figure 2). La LNT de contrôle et de l&#39;humain et de tubes hélicoïdaux FVIII-LNT porcine ont été sélectionnés et segmentés avec l&#39;interface graphique de e2hel...

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Helical Organization of Blood Coagulation Factor VIII on Lipid Nanotubes

Nous présentons une combinaison de cryo-microscopie électronique, lipides nanotechnologies, et l&#39;analyse de la structure appliquée pour résoudre la structure membranaire des deux formes de FVIII hautement homologues: les droits et les porcins. La méthodologie développée dans notre laboratoire à organiser de manière hélicoïdale les deux formes de FVIII recombinants fonctionnels sur les nanotubes de lipides chargés négativement (LNT) est décrite.

Organisation hélicoïdale de facteur VIII de coagulation du sang sur les lipides nanotubes

Cryo-electron microscopy (Cryo-EM)1 is a powerful approach to investigate the functional structure of proteins and complexes in a hydrated state and ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

12.2K vues.  University of Texas Medical Branch.  Nous présentons une combinaison de cryo-microscopie électronique, lipides nanotechnologies, et l'analyse de la structure appliquée pour résoudre la structure membranaire des deux formes de FVIII hautement homologues: les droits et les porcins. La méthodologie développée dans notre laboratoire à organiser de manière hélicoïdale les deux formes de FVIII recombinants fonctionnels sur les nanotubes de lipides chargés négativement (LNT) est décrite. 

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Simultaneous Synthesis of Single-walled Carbon Nanotubes and Graphene in a Magnetically-enhanced Arc Plasma

Carbon nanostructures such as single-walled carbon nanotubes (SWCNT) and graphene attract a deluge of interest of scholars nowadays due to their very promising application for molecular sensors, field effect transistor and super thin and flexible electronic devices1-4. Anodic arc discharge supported by the erosion of the anode material is one of the most practical and efficient methods, which can provide specific non-equilibrium processes and a high influx of carbon material to the developing structures at relatively higher temperature, and consequently the as-synthesized products have few structural defects and better crystallinity.
 To further improve the controllability and flexibility of the synthesis of carbon nanostructures in arc discharge, magnetic fields can be applied during the synthesis process according to the strong magnetic responses of arc plasmas. It was demonstrated that the magnetically-enhanced arc discharge can increase the average length of SWCNT 5, narrow the diameter distribution of metallic catalyst particles and carbon nanotubes 6, and change the ratio of metallic and semiconducting carbon nanotubes 7, as well as lead to graphene synthesis 8. 
 Furthermore, it is worthwhile to remark that when we introduce a non-uniform magnetic field with the component normal to the current in arc, the Lorentz force along the J&times;B direction can generate the plasmas jet and make effective delivery of carbon ion particles and heat flux to samples. As a result, large-scale graphene flakes and high-purity single-walled carbon nanotubes were simultaneously generated by such new magnetically-enhanced anodic arc method. Arc imaging, scanning electron microscope (SEM), transmission electron microscope (TEM) and Raman spectroscopy were employed to analyze the characterization of carbon nanostructures. These findings indicate a wide spectrum of opportunities to manipulate with the properties of nanostructures produced in plasmas by means of controlling the arc conditions.

Anodic arc discharge is one of the most practical and efficient methods to synthesize various carbon nanostructures. To increase the arc controllability and flexibility, a non-uniform magnetic field was introduced to process the one-step synthesis of large-scale graphene flakes and high-purity single-walled carbon nanotubes.

Synthèse simultanée de nanotubes de carbone à paroi simple et le graphène dans un plasma d&#39;arc-magnétique améliorée

Carbon nanostructures such as single-walled carbon nanotubes (SWCNT) and graphene attract a deluge of interest of scholars nowadays due to their very ...

Recherche

Bio-ingénierie

Localization and Relative Quantification of Carbon Nanotubes in Cells with Multispectral Imaging Flow Cytometry

Carbon-based nanomaterials, like carbon nanotubes (CNTs), belong to this type of nanoparticles which are very difficult to discriminate from carbon-rich cell structures and de facto there is still no quantitative method to assess their distribution at cell and tissue levels. What we propose here is an innovative method allowing the detection and quantification of CNTs in cells using a multispectral imaging flow cytometer (ImageStream, Amnis). This newly developed device integrates both a high-throughput of cells and high resolution imaging, providing thus images for each cell directly in flow and therefore statistically relevant image analysis. Each cell image is acquired on bright-field (BF), dark-field (DF), and fluorescent channels, giving access respectively to the level and the distribution of light absorption, light scattered and fluorescence for each cell. The analysis consists then in a pixel-by-pixel comparison of each image, of the 7,000-10,000 cells acquired for each condition of the experiment. Localization and quantification of CNTs is made possible thanks to some particular intrinsic properties of CNTs: strong light absorbance and scattering; indeed CNTs appear as strongly absorbed dark spots on BF and bright spots on DF with a precise colocalization.
This methodology could have a considerable impact on studies about interactions between nanomaterials and cells given that this protocol is applicable for a large range of nanomaterials, insofar as they are capable of absorbing (and/or scattering) strongly enough the light.

In this study, the main purpose was to monitor the cellular uptake and eventual exocytosis of carbon nanotubes (CNTs). From this perspective, we proposed here a unique method using multispectral imaging flow cytometry allowing a quantification and localization of CNTs in a statistically relevant number of cells.

Carbon-based nanomaterials, like carbon nanotubes (CNTs), belong to this type of nanoparticles which are very difficult to discriminate from carbon-rich ...

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has been implied in the etiology of many brain pathologies, creating a need for development of human in vitro BBB models to assist in clinically-relevant research. Among the numerous BBB models thus far described, a static (without flow), contact BBB model, where astrocytes and brain endothelial cells (BECs) are cocultured on the opposite sides of a porous membrane, emerged as a simplified yet authentic system to simulate the BBB with high throughput screening capacity. Nevertheless the generation of such model presents few technical challenges. Here, we describe a protocol for preparation of a contact human BBB model utilizing a novel combination of primary human BECs and immortalized human astrocytes. Specifically, we detail an innovative method for cell-seeding on inverted inserts as well as specify insert staining techniques and exemplify how we use our model for BBB-related research.

Establishment of human models of the blood-brain barrier (BBB) can benefit research into brain conditions associated with BBB failure. We describe here an improved technique for preparation of a contact BBB model, which permits coculturing of human astrocytes and brain endothelial cells on the opposite sides of a porous membrane.

Amélioration de la méthode pour la préparation d&#39;une base de cellules humaines, Contactez modèle de la barrière hémato-encéphalique

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Electrospun Nanofiber Scaffolds with Gradations in Fiber Organization

The goal of this protocol is to report a simple method for generating nanofiber scaffolds with gradations in fiber organization and test their possible applications in controlling cell morphology/orientation. Nanofiber organization is controlled with a new fabrication apparatus that enables the gradual decrease of fiber organization in a scaffold. Changing the alignment of fibers is achieved through decreasing deposition time of random electrospun fibers on a uniaxially aligned fiber mat. By covering the collector with a moving barrier/mask, along the same axis as fiber deposition, the organizational structure is easily controlled. For tissue engineering purposes, adipose-derived stem cells can be seeded to these scaffolds. Stem cells undergo morphological changes as a result of their position on the varied organizational structure, and can potentially differentiate into different cell types depending on their locations. Additionally, the graded organization of fibers enhances the biomimicry of nanofiber scaffolds so they more closely resemble the natural orientations of collagen nanofibers at tendon-to-bone insertion site compared to traditional scaffolds. Through nanoencapsulation, the gradated fibers also afford the possibility to construct chemical gradients in fiber scaffolds, and thereby further strengthen their potential applications in fast screening of cell-materials interaction and interfacial tissue regeneration. This technique enables the production of continuous gradient scaffolds, but it also can potentially produce fibers in discrete steps by controlling the movement of the moving barrier/mask in a discrete fashion.

Here, we present a protocol to fabricate electrospun nanofiber scaffolds with gradated organization of fibers and explore their applications in regulating cell morphology/orientation. Gradients with regard to physical and chemical properties of the nanofiber scaffolds offer a wide variety of applications in the biomedical field.

Électrofilées nanofibres échafaudages avec des gradations dans l&#39;organisation fibre

The goal of this protocol is to report a simple method for generating nanofiber scaffolds with gradations in fiber organization and test their possible ...

Describing a Transcription Factor Dependent Regulation of the MicroRNA Transcriptome

While the transcription regulation of protein coding genes was extensively studied, little is known on how transcription factors are involved in transcription of non-coding RNAs, specifically of microRNAs. Here, we propose a strategy to study the potential role of transcription factor in regulating transcription of microRNAs using publically available data, computational resources and high throughput data. We use the H3K4me3 epigenetic signature to identify microRNA promoters and chromatin immunoprecipitation (ChIP)-sequencing data from the ENCODE project to identify microRNA promoters that are enriched with transcription factor binding sites. By transfecting cells of interest with shRNA targeting a transcription factor of interest and subjecting the cells to microRNA array, we study the effect of this transcription factor on the microRNA transcriptome. As an illustrative example we use our study on the effect of STAT3 on the microRNA transcriptome of chronic lymphocytic leukemia (CLL) cells.

Herein we propose a strategy to study the effect of a transcription factor of interest on the microRNA transcriptome using publically available data, computational resources and high throughput data from microRNA arrays after transfecting cells with small hairpin (sh)RNA targeting a transcription factor of interest.

Décrire un règlement dépendant du facteur de transcription de l&#39;microARN transcriptome

While the transcription regulation of protein coding genes was extensively studied, little is known on how transcription factors are involved in ...

Polyelectrolyte Complex for Heparin Binding Domain Osteogenic Growth Factor Delivery

During reconstructive bone surgeries, supraphysiological amounts of growth factors are empirically loaded onto scaffolds to promote successful bone fusion. Large doses of highly potent biological agents are required due to growth factor instability as a result of rapid enzymatic degradation as well as carrier inefficiencies in localizing sufficient amounts of growth factor at implant sites. Hence, strategies that prolong the stability of growth factors such as BMP-2/NELL-1, and control their release could actually lower their efficacious dose and thus reduce the need for larger doses during future bone regeneration surgeries. This in turn will reduce side effects and growth factor costs. Self-assembled PECs have been fabricated to provide better control of BMP-2/NELL-1 delivery via heparin binding and further potentiate growth factor bioactivity by enhancing in vivo stability. Here we illustrate the simplicity of PEC fabrication which aids in the delivery of a variety of growth factors during reconstructive bone surgeries.

Self-assembled polyelectrolyte complexes (PEC) fabricated from heparin and protamine were deposited on alginate beads to entrap and regulate the release of osteogenic growth factors. This delivery strategy enables a 20-fold reduction of BMP-2 dose in spinal fusion applications. This article illustrates the benefits and fabrication of PECs.

Complexe de polyélectrolyte pour Heparin Binding Domain Growth Factor ostéogénique Livraison

During reconstructive bone surgeries, supraphysiological amounts of growth factors are empirically loaded onto scaffolds to promote successful bone ...

Engineering Molecular Recognition with Bio-mimetic Polymers on Single Walled Carbon Nanotubes

Semiconducting single-wall carbon nanotubes (SWNTs) are a class of optically active nanomaterial that fluoresce in the near infrared, coinciding with the optical window where biological samples are most transparent. Here, we outline techniques to adsorb amphiphilic polymers and polynucleic acids onto the surface of SWNTs to engineer their corona phases and create novel molecular sensors for small molecules and proteins. These functionalized SWNT sensors are both biocompatible and stable. Polymers are adsorbed onto the nanotube surface either by direct sonication of SWNTs and polymer or by suspending SWNTs using a surfactant followed by dialysis with polymer. The fluorescence emission, stability, and response of these sensors to target analytes are confirmed using absorbance and near-infrared fluorescence spectroscopy. Furthermore, we demonstrate surface immobilization of the sensors onto glass slides to enable single-molecule fluorescence microscopy to characterize polymer adsorption and analyte binding kinetics.

We present a protocol for engineering the corona phase of near infrared fluorescent single walled carbon nanotubes (SWNTs) using amphiphilic polymers and DNA to develop sensors for molecular targets without known recognition elements.

Reconnaissance moléculaire Ingénierie avec Polymères Bio-mimétiques sur simple Walled Carbon Nanotubes

Semiconducting single-wall carbon nanotubes (SWNTs) are a class of optically active nanomaterial that fluoresce in the near infrared, coinciding with the ...

DNA Nanotubes as a Versatile Tool to Study Semiflexible Polymers

Mechanical properties of complex, polymer-based soft matter, such as cells or biopolymer networks, can be understood in neither the classical frame of flexible polymers nor of rigid rods. Underlying filaments remain outstretched due to their non-vanishing backbone stiffness, which is quantified via the persistence length (lp), but they are also subject to strong thermal fluctuations. Their finite bending stiffness leads to unique, non-trivial collective mechanics of bulk networks, enabling the formation of stable scaffolds at low volume fractions while providing large mesh sizes. This underlying principle is prevalent in nature (e.g., in cells or tissues), minimizing the high molecular content and thereby facilitating diffusive or active transport. Due to their biological implications and potential technological applications in biocompatible hydrogels, semiflexible polymers have been subject to considerable study. However, comprehensible investigations remained challenging since they relied on natural polymers, such as actin filaments, which are not freely tunable. Despite these limitations and due to the lack of synthetic, mechanically tunable, and semiflexible polymers, actin filaments were established as the common model system. A major limitation is that the central quantity lp cannot be freely tuned to study its impact on macroscopic bulk structures. This limitation was resolved by employing structurally programmable DNA nanotubes, enabling controlled alteration of the filament stiffness. They are formed through tile-based designs, where a discrete set of partially complementary strands hybridize in a ring structure with a discrete circumference. These rings feature sticky ends, enabling the effective polymerization into filaments several microns in length, and display similar polymerization kinetics as natural biopolymers. Due to their programmable mechanics, these tubes are versatile, novel tools to study the impact of lp on the single-molecule as well as the bulk scale. In contrast to actin filaments, they remain stable over weeks, without notable degeneration, and their handling is comparably straightforward.

Semiflexible polymers display unique mechanical properties that are extensively applied by living systems. However, systematic studies on biopolymers are limited since properties such as polymer rigidity are inaccessible. This manuscript describes how this limitation is circumvented by programmable DNA nanotubes, enabling experimental studies on the impact of filament rigidity.

Nanotubes d’ADN comme un outil polyvalent pour l’étude des polymères semi-flexibles

Mechanical properties of complex, polymer-based soft matter, such as cells or biopolymer networks, can be understood in neither the classical frame of ...

Synthesis of Multi-walled Carbon Nanotubes Modified with Silver Nanoparticles and Evaluation of Their Antibacterial Activities and Cytotoxic Properties

In this study, multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) were treated with an aqueous sulfuric acid solution to form an oxygen-based functional group. Silver MWCNTs were prepared by the reductive deposition of silver from an aqueous solution of AgNO3 on the oxidized MWCNTs. Given the unique color of the CNTs, it was not possible to apply them to the minimum inhibitory concentration or mitochondrial toxicity assays to evaluate the toxicity and antibacterial properties, since they would interfere with the assays. The inhibition zone and minimum bactericidal concentration for the Ag-MWCNTs were measured and Live/Dead and Trypan Blue assays were used to measure the toxicity and antibacterial properties without interfering with the color of the CNTs.

In this study, antimicrobial nanomaterials were synthesized by acidic oxidation of multiwalled carbon nanotubes and subsequent reductive deposition of silver nanoparticles. Antimicrobial activity and cytotoxicity tests were performed with the as-prepared nanomaterials.

Synthèse des Nanotubes de carbone Multi modifiés avec des nanoparticules d’argent et de l’évaluation de leurs activités antibactériennes et propriétés cytotoxiques

In this study, multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) were treated with an aqueous sulfuric acid solution to form an oxygen-based functional group. Silver ...

High Throughput Traction Force Microscopy Using PDMS Reveals Dose-Dependent Effects of Transforming Growth Factor-&#946; on the Epithelial-to-Mesenchymal Transition

Cellular contractility is essential in diverse aspects of biology, driving processes that range from motility and division, to tissue contraction and mechanical stability, and represents a core element of multi-cellular animal life. In adherent cells, acto-myosin contraction is seen in traction forces that cells exert on their substrate. Dysregulation of cellular contractility appears in a myriad of pathologies, making contractility a promising target in diverse diagnostic approaches using biophysics as a metric. Moreover, novel therapeutic strategies can be based on correcting the apparent malfunction of cell contractility. These applications,&#160;however, require direct quantification of these forces.
We have developed silicone elastomer-based traction force microscopy (TFM) in a parallelized multi-well format. Our use of a silicone rubber, specifically polydimethylsiloxane (PDMS), rather than the commonly employed hydrogel polyacrylamide (PAA) enables us to make robust and inert substrates with indefinite shelf-lives requiring no specialized storage conditions. Unlike pillar-PDMS based approaches that have a modulus in the GPa range, the PDMS used here is very compliant, ranging from approximately 0.4 kPa to 100 kPa. We create a high-throughput platform for TFM by partitioning these large monolithic substrates spatially into biochemically independent wells, creating a multi-well platform for traction force screening that is compatible with existing multi-well systems.
In this manuscript, we use this multi-well traction force system to examine the Epithelial to Mesenchymal Transition (EMT); we induce EMT in NMuMG cells by exposing them to TGF-&#946;, and to quantify the biophysical changes during EMT. We measure the contractility as a function of concentration and duration of TGF-&#946; exposure. Our findings here demonstrate the utility of parallelized TFM in the context of disease biophysics.

High Throughput Traction Force Microscopy Using PDMS Reveals Dose-Dependent Effects of Transforming Growth Factor-&amp;#946; on the Epithelial-to-Mesenchymal Transition

We present a high throughput traction force assay fabricated with silicone rubber (PDMS). This novel assay is suitable for studying physical changes in cell contractility during various biological and biomedical processes and diseases. We demonstrate this method's utility by measuring a TGF-&#946; dependent increase in contractility during the epithelial-to-mesenchymal transition.

La microscopie de la force de traction à haut débit à l'aide du SMD révèle les effets dépendants de la dose de la transformation du facteur de croissance sur la transition épithéliale à mesenchymale

Cellular contractility is essential in diverse aspects of biology, driving processes that range from motility and division, to tissue contraction and ...