This work was supported by the Neurotrauma Research Program (Western Australia). This project is funded through the Road Trauma Trust Account, but does not reflect views or recommendations of the Road Safety Council.

1. L&#39;étalonnage optique: Mesure Lumière sortie <ol><li> Pour préparer l&#39;appareil de distribution de lumière, connecter une source de lumière à large bande (par exemple, Xenon ou une lampe de tungstène) à une alimentation appropriée. Positionner une lentille de collimation devant de la source lumineuse pour produire un faisceau collimaté de lumière. Faire passer la lumière à travers un filtre de chaleur liquide pour éliminer la majeure partie de la chaleur du faisceau lumineux. Selon l&#39;application, focaliser le faisceau collimaté à l&#39;ouverture d&#39;entrée d&#39;un guide de lumière liquide, qui prévoit la livraison plus flexible de la lumière (par exemple., Dans un incubateur). </li><li> A l&#39;autre extrémité du guide de lumière liquide, positionner une seconde lentille de collimation et un support pour le brouillage et les filtres de densité neutre. Vérifiez que cet arrangement produit un endroit éclairé de façon uniforme de la lumière de la bande de fréquence et de l&#39;intensité souhaitée. Remarque: La distance entre l&#39;extrémité du guide de lumière et le plan de l&#39;échantillon peut être nécessaire de varier en fonction dela surface qui doit être éclairée, mais aussi rappeler que la distance de l&#39;extrémité du guide de lumière augmente, l&#39;intensité lumineuse diminue. Dans la présente étude, cette distance est 14 cm, et donne une section transversale du faisceau qui éclaire uniformément une zone de 3x3 puits sur une plaque à 96 puits. </li><li> Veiller à ce que la lumière parasite de la lampe et les composants optiques associés est incapable d&#39;atteindre l&#39;échantillon. </li><li> Tournez sur le refroidisseur d&#39;eau pour le filtre de chaleur liquide et se assurer qu&#39;il ya échange de l&#39;eau à travers l&#39;enveloppe de filtre. Allumer la source de puissance de la lampe et d&#39;attendre au moins 5 minutes pour la source de lumière à large bande à se stabiliser. Remarque: L&#39;utilisation du refroidisseur d&#39;eau est nécessaire pour éviter une surchauffe de l&#39;appareil. </li><li> Sélectionnez un filtre d&#39;interférence à bande étroite (généralement décrits par leur longueur d&#39;onde centrale, de transmission de pointe et largeur à mi-hauteur (LMH) de la bande passante) pour générer la gamme d&#39;onde d&#39;éclairage. Remarque: Les filtres d&#39;interférence à bande étroite utilisées dans la présente étude étaient 442 nm, 550 nm, 671 nm et 810 nm. </li><li> Mesurer la lumière produite par la lampe au niveau du plan où l&#39;échantillon doit être placé pendant le traitement. Mesurer la lumière en utilisant une sonde de rayonnement calibré (cosinus collecteur) connectée à un spectroradiomètre approprié, en utilisant le logiciel de propriété selon les instructions du fabricant. </li><li> Utilisez des filtres de densité neutre pour régler l&#39;intensité de la lumière jusqu&#39;à la sortie désirée est obtenue. Remarque: Dans la présente étude, l&#39;intensité de la lumière transmise par chaque filtre d&#39;interférence est ajusté pour donner une sortie quantique égale à chacune des quatre bandes de fréquence de traitement. Il est important de vérifier l&#39;étalonnage régulièrement, comme la sortie de la lampe est sujette à changement. Note: Après la mise en place de l&#39;appareil, les cellules sont prêtes à être éclairée figure 1 est une représentation de l&#39;appareil de distribution de lumière utilisée dans l&#39;étude actuelle.. </li></ol><img alt="Figure 1"src = &quot;/ files / ftp_upload / 52221 / 52221fig1.jpg&quot; /&gt; Figure 1. Image de l&#39;appareil de distribution de lumière. Illustrated sont la source d&#39;énergie la lumière, lampe au xénon avec logement, lentille de collimation, filtre à eau, ouverture d&#39;entrée, guide de lumière liquide, seconde lentille de collimation, porte-filtre, cadre de traitement et mat carte noire. On notera que les filtres de longueur d&#39;onde et d&#39;intensité à bande étroite ne sont pas représentés. 2. Préparation des cellules <ol><li> Le mode de livraison R / NIR-LT décrit peut être appliqué à tout type de cellule ou dans un système de modèle in vitro; ce titre, les descriptions suivantes de culture cellulaire sont générales, en utilisant des techniques bien établies de phéochromocytome de culture (PC12), Müller (RMC1) et des cellules rétiniennes mixtes primaires. </li><li> Avant l&#39;ensemencement des cellules pour le traitement de lumière et à l&#39;oxydation test de stress, la culture des cellules dans leur milieu de croissance respectif contenant des suppléments appropriés (par ex., FBS, Les antibiotiques) dans flas T75 immortaliséks jusqu&#39;à 70-80% de confluence. </li><li> Détachez cellules immortalisées des flacons T75, en utilisant la méthode appropriée pour le type de cellule à tester par exemple., La trypsine. Si nécessaire, avant de procéder à l&#39;ensemencement des cellules en plaques de 96 puits dosage, les puits des plaques de dosage de revêtement avec 10 pg / ml de poly-L-lysine pendant 1 heure (par ex., Pour des cellules PC12) ou 10 pg / ml de poly-L-lysine de 1h suivie par un O / N incubation avec 10 pg / ml de laminine (par ex., pour les cellules rétiniennes mixtes). </li><li> Centrifuger les cellules pour recueillir, le cas échéant (par ex., 3 min à 405 g pendant cellules PC12 ou 10 min à 218 g pendant cellules RMC1), supprimer le surnageant et remettre en suspension dans 8 ml de milieux de culture cellulaire appropriée. </li><li> Si les cellules rétiniennes mélangés doivent être utilisés, de préparer P0-5 ratons néonatale par digestion enzymatique (papaïne) selon les procédures établies 19 </li><li> Comptez le nombre de cellules viables à l&#39;exclusion de 0,4% (p / v) colorant bleu trypan, en utilisant un hémocytomètre. </li><li> Ajuster suc densité cellulaireh que les cellules seront d&#39;environ 70 à 80% de confluence après 24 ou 48h dans la culture. (Pour les cellules PC12 la densité d&#39;ensemencement est de 4,0 x 10 5 cellules viables / ml, pour les cellules RMC1, elle est de 2,5 x 10 5 cellules viables / ml pour les cellules rétiniennes et mixte, il est 8 x 10 5 cellules viables / ml). Après l&#39;ajout de cellules soit plaques claires ou noires à 96 puits (utilisés pour le H 2 O 2 ou DCFH-DA dosage respectivement), dans 100 ul de milieu de croissance approprié, permettent plaque de se asseoir sur une surface plane à 37 ° C, 5 % de CO 2 (ou quelles que soient les conditions sont appropriées pour le type de cellule spécifique) pendant au moins 24 heures pour permettre l&#39;adhérence des cellules. </li><li> cellules de la culture dans un milieu de croissance dans les 96 plateaux et appropriées jusqu&#39;à ce qu&#39;ils soient 70 à 80% de confluence (24h pour PC12 et les cellules RMC1, 48h pour les cellules rétiniennes mixtes). </li></ol> 3. Ajout glutamate Stressor aux cellules <ol><li> Préparer monosodique d&#39;acide concentrations hydrate de sel de stress L-glutamique de 0-10mm en pleine grossissement appropriéemilieux de culture e. </li><li> Retirez le support à partir des cellules et laver en douceur les cellules trois fois avec du PBS (PC12) ou HBSS (RMC1 cellules rétiniennes et mixtes). Après lavages, ajouter un milieu contenant du glutamate à un volume total de 100 pl / puits. </li></ol> 4. Premiers doses de traitement par la lumière <ol><li> Immédiatement après l&#39;addition du glutamate ou le facteur de stress de choix, exposer les cellules à un traitement de lumière aux longueurs d&#39;onde et des intensités souhaitées en plaçant sous l&#39;appareil de distribution de lumière préparée. Ne oubliez pas de modifier la sortie quantique du faisceau lumineux en utilisant les combinaisons établies de filtres de densité neutre en fonction de la longueur d&#39;onde étant administré. Remarque: Dans les expériences actuelles, exposer les cellules à un traitement de lumière pendant 3 min maintenir la température en se reposant sur ​​un bloc C de chaleur 37 o les plaques à 96 puits. La durée du traitement peut varier selon les besoins. <ol><li> Placez une carte noir mat sous les cellules pour empêcher la lumière reflétant dans des puits adjacents dans le 96-well bac désigné pour les autres paramètres de traitement. </li></ol></li><li> Si un traitement est souhaité pour de plus grandes longueurs de temps, ajouter un tampon 25 mM Hepes pour maintenir le pH du milieu de culture cellulaire ou, idéalement, placer les plaques de l&#39;appareil et de traitement dans un incubateur à concentration de CO 2 régulée à 5% de CO 2, ou les conditions qui sont optimales pour le type de cellule spécifique. </li><li> Après l&#39;achèvement du traitement par la lumière, placer les cellules sur une surface plane et incuber à 37 ° C et 5% de CO 2 (ou ce que les conditions sont optimales pour le type de cellule) pendant 24 heures. Remarque: Les doses supplémentaires de R / NIR-LT peuvent être administrés de la manière décrite ci-dessus, si besoin. </li></ol> 5. final Dosage du traitement par la lumière et la détection de ROS <ol><li> Avant d&#39;effectuer le tour final du traitement par la lumière, préparer les réactifs à utiliser pour la détection ROS. Préparer du tampon de citrate 50 mM (pH 6,0 de), le Triton X100, et H 2 O 2 réactif de détection de travailsolution (1: 2: 97 rapport de 10 mM de H 2 O 2 la détection solution mère de réactif; 10 U / ml peroxydase de raifort; citrate de sodium 50 mM (pH 6,0)). Préparer DCFH-DA à une concentration finale de 100 microns dans les médias appropriés. Remarque: Réactif DCFH-DA pour les cellules PC12 est en milieu RPMI, réactif DCFH-DA pour les cellules RMC1 est en milieu DMEM. Notez que des réactifs de détection disponibles dans le commerce ont des sensibilités différentielles pour ROS spécifique et les réactifs doivent être choisis avec soin pour fournir l&#39;information désirée pour une application particulière. </li><li> Administrer un traitement de lumière pour les cellules, comme décrit dans l&#39;étape 4.1-4.1.2. Se assurer que les cellules sont traitées avec les influences / longueurs d&#39;onde désirées de lumière. </li><li> Immédiatement après traitement par la lumière, retirez le support contenant le glutamate et laver deux fois avec une solution tampon appropriée (pour les cellules PC12, PBS est utilisé pour les cellules et RMC1, HBSS est utilisé). Effectuez les tests ROS sur les cellules comme suit: <ol><li> H 2 O 2 </sub&gt; test: ajouter 45 ul de 50 mM de tampon de citrate (pH 6,0) et 5 ul de Triton X100 à chacun des puits. Secouer doucement les cellules sur un agitateur orbital pendant 30 secondes et incuber à 37 ° C et 5% de CO 2 pendant 15 min. Ajouter 50 ul de H 2 O 2 de la solution de travail de détection et incuber pendant 30 min à température ambiante. Mesurer la fluorescence en utilisant un lecteur de plaque avec une longueur d&#39;onde d&#39;excitation de 530 nm et une longueur d&#39;onde d&#39;émission de 480 nm. </li><li> DCF essai: ajouter 100 pl de la solution 100 uM de DCFH-DA à chacun des puits et incuber pendant 30 min à 37 ° C et 5% de CO 2. Retirez le support contenant 100 uM DCFH-DA et laver avec une solution tampon appropriée (comme décrit ci-dessus) deux fois. Ajouter 90 pi de solution tampon et 10 pi de Triton X100 à chacun des puits et agiter doucement sur un agitateur orbital pendant 30 secondes avant le 15 minutes d&#39;incubation à 37 ° C. Mesurer DCF fluorescence obtenue à l&#39;aide d&#39;un lecteur de plaque avec une longueur d&#39;onde d&#39;excitation de 480 nm et d&#39;une Wavel d&#39;émissionongueur de 530nm. </li><li> Express ROS valeurs relatives à la concentration en protéine de cellules restantes dans les puits, en utilisant une trousse colorimétrique pour quantifier la concentration de protéines selon les instructions du fabricant, en se référant à une courbe standard pour calculer mg de protéine. </li></ol></li></ol>

<ol>
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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocity+of+exposure+time+and+irradiance+on+energy+density+during+photoradiation+on+wound+healing+in+a+murine+pressure+ulcer+model.">Reciprocity of exposure time and irradiance on energy density during photoradiation on wound healing in a murine pressure ulcer model.</a> Lasers in surgery and medicine. 39, 534-542 (2007).</li><li>Castano, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+laser+therapy+for+zymosan+induced+arthritis+in+rats:+Importance+of+illumination+time.">Low-level laser therapy for zymosan induced arthritis in rats: Importance of illumination time.</a> Lasers in surgery and medicine. 39, 543-550 (2007).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Nous avons adapté avec succès un système de distribution précise de la lumière et calibré pour fournir un mécanisme pour l&#39;étude d&#39;optimisation de la R / NIR-LT in vitro. Longueur d&#39;onde et l&#39;intensité de paramètres R / NIR-LT sont capables d&#39;être manipulées avec précision et de manière efficace en utilisant ce système. Nous avons établi que le traitement lumière des cellules ne ont pas conduit à la mort cellulaire, bien que ROS ne ont pas été réduite au niveau des longu...

Les espèces réactives de l&#39;oxygène (ROS) sont nécessaires pour une série de voies de transduction de signaux et les réactions normales du métabolisme cellulaire, y compris ceux de la neuroprotection 1. Toutefois, lorsque le mécanisme antioxydant endogène sont incapables de contrôler la production de ROS, les cellules peuvent succomber à 2,3 stress oxydatif. Après une lésion du SNC, les augmentations liées à la présence des ROS et le stress oxydatif sont supposés jouer un rôle important dans la progression des dommages de 4,5. Malgré le nombre important des stratégies pour atténuer le stress oxydatif qui ont été évalués, il ne existe actuellement pas de stratégie anti-oxydantes complètement efficaces, cliniquement pertinentes pour atténuer la production de ROS et le stress oxydatif associé à l&#39;utilisation clinique après six neurotraumatologie. Par conséquent l&#39;atténuation du stress oxydatif reste un objectif important pour l&#39;intervention thérapeutique 7. Améliorations suiventR ing / NIR-LT ont été signalés dans un large éventail de blessures et les maladies, y compris réduction de la taille de l&#39;infarctus du cardia, complications rénales et hépatiques pendant le diabète, la dégénérescence rétinienne, lésion du SNC et d&#39;AVC 8, peut-être en réduisant le stress oxydatif. Se agissant en particulier lésion du SNC, des études précliniques d&#39;efficacité de la lumière de 670nm ont montré de bons effets dans les modèles de dégénérescence rétinienne 9-11, des blessures de la moelle épinière 12, la mort neuronale 13. Les essais cliniques ont été menées pour l&#39;âge sèche dégénérescence maculaire liée et sont actuellement en cours pour la course 14, mais les résultats de ces essais ne semblent pas prometteuses, peut-être due à une défaillance d&#39;employer un traitement efficace des paramètres 15. En tant que tel, R / NIR-LT n&#39;a pas été largement adopté dans le cadre de la pratique clinique normale dans neurotraumatologie, en dépit d&#39;être un outil facile à administrer, non-invasive et le traitement relativement peu coûteux. Obstacles à l&#39;application clinique comprennent le manque d&#39;un cldébut mécanisme d&#39;action et l&#39;absence d&#39;un effet de 16,17 protocole de traitement standard compris. La littérature actuelle concernant la thérapie de lumière révèle une pléthore de variation des paramètres de traitement à l&#39;égard de sources d&#39;irradiation (LED ou laser), longueur d&#39;onde (par exemple, 630, 670, 780, 810, 830, 880, 904nm), la dose totale (joules d&#39;irradiation / unité de surface), la durée (temps d&#39;exposition), le calendrier (de l&#39;insulte avant ou après), la fréquence de traitement et le mode de livraison (impulsion ou continu) 8. La variabilité des paramètres de traitement entre les études rend la comparaison difficile et a contribué au scepticisme concernant l&#39;efficacité 16. Par conséquent, l&#39;optimisation de la R / NIR-LT est clairement nécessaire, avec des systèmes capables de fournir le mécanisme de criblage à haut débit nécessaire de comparer les multiples variables culture cellulaire. Cependant, il existe quelques systèmes d&#39;éclairage disponibles dans le commerce qui peuvent fournir la flexibilité et un contrôle suffisant sur wavelength et l&#39;intensité pour effectuer ces expériences d&#39;optimisation. Commercialement dispositifs LED disponibles ne sont généralement pas en mesure de fournir de multiples longueurs d&#39;onde ou intensités, entraînant enquêteurs employant plusieurs appareils LED de différents fabricants, qui peuvent varier non seulement de l&#39;intensité, mais aussi le spectre de longueur d&#39;onde de la lumière émise. Nous avons abordé cette question en utilisant une source de lumière au Xénon à large bande filtré à travers des filtres d&#39;interférence à bande étroite, générant ainsi une gamme de longueurs d&#39;onde et influences de la lumière, ce qui permet à proximité, un contrôle précis des paramètres de R / NIR-LT. Il est important de noter que la dose thérapeutique de traitement est définie par le nombre de photons qui interagissent avec la photoacceptor (chromophore) qui, dans le cas de R / NIR-LT est postulé comme la cytochrome c oxydase (COX) 18. énergie des photons livré varie avec la longueur d&#39;onde; signifie doses égales de l&#39;énergie à différentes longueurs d&#39;onde sera comprisé des différents nombres de photons. Par conséquent, la lumière émise à partir du dispositif a été étalonné pour émettre un nombre égal de photons pour chacune des longueurs d&#39;onde choisies à tester. Nous avons développé un système qui peut être utilisé pour délivrer R / NIR-LT à une gamme de longueurs d&#39;onde et des intensités à des cellules in vitro et a démontré la capacité de mesurer les effets de la R livré / NIR-LT sur la production de ROS dans les cellules soumises à le stress glutamate.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>OxiSelect Intracellular ROS Assay Kit (Green Fluorescence)</td>
			<td>Cell Biolabs</td>
			<td>STA-342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplex UltraRed Reagent</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A36006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>300 Watt Xenon Arc Lamp</td>
			<td>Newport Corporation</td>
			<td>6258</td>
			<td>Very intense light source, do not look directly into the lamp. Ensure there is sufficient cooling to the lamp whilst it is switched on</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB4000-FL Fluorescence Spectrometer</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CC-3-UV Cosine Corrector for Emission Collection</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200&#956;m diameter quartz fibre optic</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraSuite Spectroscopy Platform</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2300 EnSpire Multimode Plate Reader</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Acute toxicity, wear gloves when handling.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid monosodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>142-47-2 (anhydrous)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pheochromocytoma rat adrenal medulla (PC12) cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-2522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI1640) Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, certified, heat inactivated, US origin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082-147</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum, New Zealand origin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050-122</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mM Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100X MEM Non-Essential Amino Acids Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140-050</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinal Muller (rMC1) cells</td>
			<td>University of California, San Diego</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-118</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75cm2 Flasks</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>B4-BE-353136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine hydrobromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>25988-63-0</td>
			<td>Aliquot and store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14025-134</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-049</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin Mouse Protein, Natural</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>23017-015</td>
			<td>Aliquot and store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X Neurobasal Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>165U Papain</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W326305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96 well plates, clear bottom, black</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3603-48EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Clear Polystyrene 96-Well Plates Untreated; Well shape: Round; Sterile.</td>
			<td>Costar</td>
			<td>07-200-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seesaw Rocker</td>
			<td>Standard lab epuipment</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Standard lab epuipment</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Density Filter Paper (0.3)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>442nm Bandpass Filter</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>FL441.6-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>550nm Bandpass Filter</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>FB550-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>670nm Bandpass Filter</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>FB670-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>810nm Bandpass Filter</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>FB810-10e</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.1)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE01B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.2)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE02B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.3)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE03B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.5)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE05B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.6)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE06B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (1.0)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE10B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method for the assessment of effects of a range of wavelengths and intensities of red/near-infrared light therapy on oxidative stress in vitro

Rouge / thérapie lumière proche infrarouge (R / NIR-LT), délivré par laser ou diode électroluminescente (LED), améliore les résultats fonctionnels et morphologiques dans une gamme de blessures du système nerveux central in vivo, peut-être en réduisant le stress oxydatif. Cependant, on a montré des effets de R / NIR-LT sur le stress oxydatif varier en fonction de la longueur d&#39;onde ou de l&#39;intensité de l&#39;irradiation. Les études comparant des paramètres de traitement font défaut, en raison de l&#39;absence de dispositifs disponibles dans le commerce qui offrent de multiples longueurs d&#39;onde ou intensités, adaptés à débit élevé mettre en études d&#39;optimisation in vitro. Ce protocole décrit une technique pour la livraison de la lumière dans une plage de longueurs d&#39;onde et des intensités d&#39;optimiser les doses thérapeutiques nécessaires pour un modèle de lésion donnée. Nous émettons l&#39;hypothèse que de fournir un procédé de lumière, dans lequel les paramètres de longueur d&#39;onde et d&#39;intensité peuvent être facilement modifiés, pourrait faciliter la détermination d&#39;une dose optimale de R / NIR-LT pour réduire les espèces réactives de l&#39;oxygène(ROS) in vitro. Lumière non cohérente au xénon a été filtré à travers des filtres d&#39;interférence à bande étroite pour fournir des longueurs d&#39;onde variables (longueurs d&#39;onde centrales de 440, 550, 670 et 810 nm) et des fluences (8,5 x 10 -3 à 3,8 x 10 -1 J / cm 2) de la lumière à des cellules en culture. Sortie de lumière de l&#39;appareil a été calibré pour émettre des doses thérapeutiques pertinentes quantiques, l&#39;égalité de la lumière à chaque longueur d&#39;onde. Les espèces réactives ont été détectés dans le glutamate a souligné les cellules traitées avec la lumière, en utilisant DCFH-DA et H 2 O 2 des colorants fluorescents sensibles. Nous avons livré avec succès la lumière à une gamme de longueurs d&#39;onde physiologiquement et thérapeutique et intensités pertinentes, à des cellules en culture exposées à glutamate comme un modèle de lésion du SNC. Alors que les influences de R / NIR-LT utilisées dans la présente étude n&#39;a pas exercer un effet sur ROS généré par les cellules cultivées, la méthode de livraison lumière est applicable à d&#39;autres systems y compris les mitochondries ou plus physiologiquement modèles de culture organotypique pertinentes isolé, et pourrait être utilisé pour évaluer les effets sur un éventail de mesures des résultats du métabolisme oxydatif.

La sortie de la lumière prononcé en longueur d&#39;onde de 670 nm a été calibré en utilisant des filtres de densité neutre afin d&#39;irradier les cellules avec une gamme de fluences englobant une dose de lumière de 670nm précédemment montré pour être bénéfique in vivo (0,3 J / cm 2) 20. Comme le nombre de filtres de densité neutre devant la source de lumière accrue, l&#39;intensité (W / m 2) a diminué, ce qui permet de passer moins de lumière vers la zone cible. Le table...

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Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Non-coherent Xenon light was passed through narrow-band interference and neutral density filters to deliver light of varying wavelength and intensity to cultured cells. This protocol was used to assess the effects of red/near-infrared light therapy on production of reactive species in vitro: no effects were observed using the tested parameters.

Méthode d&#39;évaluation des effets d&#39;une gamme de longueurs d&#39;onde et des intensités de Luminothérapie Rouge / proche infrarouge sur le stress oxydatif<em&gt; In Vitro</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

8.6K vues.  The University of Western Australia. Non-coherent Xenon light was passed through narrow-band interference and neutral density filters to deliver light of varying wavelength and intensity to cultured cells. This protocol was used to assess the effects of red/near-infrared light therapy on production of reactive species in vitro: no effects were observed using the tested parameters.

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A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities 

The optokinetic reflex (OKR) is a basic visual reflex exhibited by most vertebrates and plays an important role in stabilizing the eye relative to the visual scene. However, the OKR requires that an animal detect moving stripes and it is possible that fish that fail to exhibit an OKR may not be completely blind. One zebrafish mutant, the no optokinetic response c (nrc) has no OKR under any light conditions tested and was reported to be completely blind. Previously, we have shown that OFF-ganglion cell activity can be recorded in these mutants. To determine whether mutant fish with no OKR such as the nrc mutant can detect simple light increments and decrements we developed the visual motor behavioral assay (VMR). In this assay, single zebrafish larvae are placed in each well of a 96-well plate allowing the simultaneous monitoring of larvae using an automated video-tracking system. The locomotor responses of each larva to 30 minutes light ON and 30 minutes light OFF were recorded and quantified. WT fish have a brief spike of motor activity upon lights ON, known as the startle response, followed by return to lower-than baseline activity, called a freeze. WT fish also sharply increase their locomotor activity immediately following lights OFF and only gradually (over several minutes) return to baseline locomotor activity. The nrc mutants respond similarly to light OFF as WT fish, but exhibit a slight reduction in their average activity as compared to WT fish. Motor activity in response to light ON in nrc mutants is delayed and sluggish. There is a slow rise time of the nrc mutant response to light ON as compared to WT light ON response. The results indicate that nrc fish are not completely blind. Because teleosts can detect light through non-retinal tissues, we confirmed that the immediate behavioral responses to light-intensity changes require intact eyes by using the chokh (chk) mutants, which completely lack eyes from the earliest stages of development. In our VMR assay, the chk mutants exhibit no startle response to either light ON or OFF, showing that the lateral eyes mediate this behavior. The VMR assay described here complements the well-established OKR assay, which does not test the ability of zebrafish larvae to respond to changes in light intensities. Additionally, the automation of the VMR assay lends itself to high-throughput screening for defects in light-intensity driven visual responses.

A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities

We developed the Visual-Motor Response to quantitate the motor output of larval zebrafish in response to light increments and decrements. We also examined zebrafish vision mutants, including the no optokinetic response (nrc) mutants, which were thought to be completely blind when tested by another vision assay, the optokinetic reflex.

Un test pour mesurer la réactivité comportementale du poisson-zèbre à l&#39;évolution des intensités de lumière

The optokinetic reflex (OKR) is a basic visual reflex exhibited by most vertebrates and plays an important role in stabilizing the eye relative to the ...

Recherche

Biologie

Biochemical Titration of Glycogen In vitro

Glycogen is the main energetic polymer of glucose in vertebrate animals and plays a crucial role in whole body metabolism as well as in cellular metabolism. Many methods to detect glycogen already exist but only a few are quantitative. We describe here a method using the Abcam Glycogen assay kit, which is based on specific degradation of glycogen to glucose by glucoamylase. Glucose is then specifically oxidized to a product that reacts with the OxiRed probe to produce fluorescence. Titration is accurate, sensitive and can be achieved on cell extracts or tissue sections. However, in contrast to other techniques, it does not give information about the distribution of glycogen in the cell. As an example of this technique, we describe here the titration of glycogen in two cell lines, Chinese hamster lung fibroblast CCL39 and human colon carcinoma LS174, incubated in normoxia (21% O2) versus hypoxia (1% O2). We hypothesized that hypoxia is a signal that prepares cells to synthesize and store glycogen in order to survive1.

Biochemical Titration of Glycogen In vitro

We describe here an accurate, reproducible and convenient biochemical method for titration of glycogen in vitro. This technique uses the Abcam Glycogen assay kit and is based on successive hydrolysis of glycogen to glucose and glucose titration by fluorescence.

Titration biochimique de glycogène<em&gt; In vitro</em

Glycogen is the main energetic polymer of glucose in vertebrate animals and plays a crucial role in whole body metabolism as well as in cellular ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes oxidation of molecules (lipid, DNA, protein) and leads to cell death. Oxidative stress also impacts the progression of several pathological conditions such as diabetes, retinopathies, neurodegeneration, and cancer. Thus, it is important to define tools to investigate oxidative stress conditions not only at the level of single cells but also in the context of whole organisms. Here, we consider the zebrafish embryo as a useful in vivo system to perform such studies and present a protocol to measure in vivo oxidative stress. Taking advantage of fluorescent ROS probes and zebrafish transgenic fluorescent lines, we develop two different methods to measure oxidative stress in vivo: i) a &#8220;whole embryo ROS-detection method&#8221; for qualitative measurement of oxidative stress and ii) a &#8220;single-cell&#160;ROS detection method&#8221; for quantitative measurements of oxidative stress. Herein, we demonstrate the efficacy of these procedures by increasing oxidative stress in tissues by oxidant agents and physiological or genetic methods. This protocol is amenable for forward genetic screens and it will help address cause-effect relationships of ROS in animal models of oxidative stress-related pathologies such as neurological disorders and cancer.

Here we report a protocol to measure oxidative stress in living zebrafish embryos. This procedure allows reactive oxygen species (ROS) detection in both whole embryo tissues and single-cell populations. This protocol will accomplish both qualitative and quantitative analyses.

Analyse du stress oxydatif dans embryons de poissons zèbres

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic human disorders, including cardiovascular and neurodegenerative diseases, diabetes, aging, and cancer. Therefore, it is important to study oxidative stress not only in cell systems but also using whole organisms. C. elegans is an attractive model organism to study the genetics of oxidative stress signal transduction pathways, which are highly evolutionarily conserved.
Here, we provide a protocol to measure oxidative stress resistance in C. elegans in liquid. Briefly, ROS-inducing reagents such as paraquat (PQ) and H2O2 are dissolved in M9 buffer, and solutions are aliquoted in the wells of a 96 well microtiter plate. Synchronized L4/young adult C. elegans animals are transferred to the wells (5-8 animals/well) and survival is measured every hour until most worms are dead. When performing an oxidative stress resistance assay using a low concentration of stressors in plates, aging might influence the behavior of animals upon oxidative stress, which could lead to an incorrect interpretation of the data. However, in the assay described herein, this problem is unlikely to occur since only L4/young adult animals are being used. Moreover, this protocol is inexpensive and results are obtained in one day, which renders this technique attractive for genetic screens. Overall, this will help to understand oxidative stress signal transduction pathways, which could be translated into better characterization of oxidative stress-associated human disorders.

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates.

Mesurer le stress oxydatif Résistance<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; En 96 plaques de microtitration bien

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This occurs when endothelial cells, which line blood vessels, become adhesive to circulating immune cells such as monocytes. In vitro measurement of this adhesiveness has until now been done by quantifying the total number of monocytes that adhere to an endothelial layer either as a direct count or by indirect measurement of the fluorescence of adherent monocytes. While such measurements do indicate the average adhesiveness of the endothelial cell population, they are confounded by a number of factors, such as cell number, and do not reveal the proportion of endothelial cells that are actually adhesive. Here we describe and demonstrate a method which allows the enumeration of adhesive cells within a tested population of endothelial monolayer. Endothelial cells are grown on glass coverslips and following desired treatment are challenged with monocytes (that may be fluorescently labeled). After incubation, a rinsing procedure, involving multiple rounds of immersion and draining, the cells are fixed. Adhesive endothelial cells, which are surrounded by monocytes are readily identified and enumerated, giving an adhesion index that reveals the actual proportion of endothelial cells within the population that are adhesive.

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

We report an in vitro method that allows the quantitation of the actual number of adhesive cells within an endothelial cell monolayer.

La quantification des cellules endothéliales adhésivité<em&gt; In Vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction channels, which is a major intercellular process by which tissue homeostasis is maintained. Interruption of gap junctional intercellular communication (GJIC) by toxicants, toxins, drugs, etc. has been linked to numerous adverse health effects. Many genetic-based human diseases have been linked to mutations in gap junction genes. The SL-DT technique is a simple functional assay for the simultaneous assessment of GJIC in a large population of cells. The assay involves pre-loading cells with a fluorescent dye by briefly perturbing the cell membrane with a scalpel blade through a population of cells. The fluorescent dye is then allowed to traverse through gap junction channels to neighboring cells for a designated time. The assay is then terminated by the addition of formalin to the cells. The spread of the fluorescent dye through a population of cells is assessed with an epifluorescence microscope and the images are analyzed with any number of morphometric software packages that are available, including free software packages found on the public domain. This assay has also been adapted for in vivo studies using tissue slices from various organs from treated animals. Overall, the SL-DT assay can serve a broad range of in vitro pharmacological and toxicological needs, and can be potentially adapted for high throughput set-up systems with automated fluorescence microscopy imaging and analysis to elucidate more samples in a shorter time.

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer technique that measures intercellular communication through gap junction channels. Gap junctional intercellular communication is a major cellular process by which tissue homeostasis is maintained and disruption of this cell signaling has adverse health effects.

Gap Junctional intercellulaire Communication: Un biomarqueur fonctionnelle pour évaluer les effets néfastes des substances toxiques et les toxines, et bienfaits pour la santé des produits naturels

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad to extract cellular DNA from whole blood in less than 2 min. The blood specimen is treated with detergent, mixed briefly and applied by pipet to the separation membrane. The lysate wicks into the blotting pad due to capillary action, capturing the genomic DNA on the surface of the separation membrane. The extracted DNA is retained on the membrane during a simple wash step wherein PCR inhibitors are wicked into the absorbent blotting pad. The membrane containing the entrapped DNA is then added to the PCR reaction without further purification. This simple method does not require laboratory equipment and can be easily implemented with inexpensive laboratory supplies. Here we describe a protocol for highly sensitive detection and quantitation of HIV-1 proviral DNA from 100 &#181;l whole blood as a model for early infant diagnosis of HIV that could readily be adapted to other genetic targets.

We describe here a simple and rapid paper-based DNA extraction method of HIV proviral DNA from whole blood detected by quantitative PCR. This protocol can be extended for use in detecting other genetic markers or using alternative amplification methods.

Filtration Isolement des acides nucléiques: Une méthode d&#39;extraction de l&#39;ADN simple et rapide

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Analysis of the Gap Junction-dependent Transfer of miRNA with 3D-FRAP Microscopy

Small antisense RNAs, like miRNA and siRNA, play an important role in cellular physiology and pathology and, moreover, can be used as therapeutic agents in the treatment of several diseases. The development of new, innovative strategies for miRNA/siRNA therapy is based on an extensive knowledge of the underlying mechanisms. Recent data suggest that small RNAs are exchanged between cells in a gap junction-dependent manner, thereby inducing gene regulatory effects in the recipient cell. Molecular biological techniques and flow cytometric analysis are commonly used to study the intercellular exchange of miRNA. However, these methods do not provide high temporal resolution, which is necessary when studying the gap junctional flux of molecules. Therefore, to investigate the impact of miRNA/siRNA as intercellular signaling molecules, novel tools are needed that will allow for the analysis of these small RNAs at the cellular level. The present protocol describes the application of three-dimensional fluorescence recovery after photobleaching (3D-FRAP) microscopy to elucidating the gap junction-dependent exchange of miRNA molecules between cardiac cells. Importantly, this straightforward and non-invasive live-cell imaging approach allows for the visualization and quantification of the gap junctional shuttling of fluorescently labeled small RNAs in real time, with high spatio-temporal resolution. The data obtained by 3D-FRAP confirm a novel pathway of intercellular gene regulation, where small RNAs act as signaling molecules within the intercellular network.

Here, we describe the application of three-dimensional fluorescence recovery after photobleaching (3D-FRAP) for the analysis of the gap junction-dependent shuttling of miRNA. In contrast to commonly applied methods, 3D-FRAP allows for the quantification of the intercellular transfer of small RNAs in real time, with high spatio-temporal resolution.

Analyse du Gap Junction-dependent Transfert de miARN avec microscopie 3D-FRAP

Small antisense RNAs, like miRNA and siRNA, play an important role in cellular physiology and pathology and, moreover, can be used as therapeutic agents ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the factors that contribute to maintaining the population balance. However, there are limited available methodologies to evaluate these factors. Bacteriocins are antimicrobial peptides produced by many bacteria that may confer a competitive advantage for food acquisition and/or niche establishment. Many probiotic lactic acid bacteria (LAB) strains have great potential to promote human and animal health by preventing the growth of pathogens. They can also be used for immuno-modulation, as they produce bacteriocins. However, the antagonistic activity of bacteriocins is normally determined by laboratory bioassays under well-defined but over-simplified conditions compared to the complex gut environment in humans and animals, where bacteria face multifactorial influences from the host and hundreds of microbial species sharing the same niche. This work describes a complete and efficient procedure to assess the effect of a variety of bacteriocins with different target specificities in a murine system. Changes in the microbiota composition during the bacteriocin treatment are monitored using compositional 16S rDNA sequencing. Our approach uses both the bacteriocin producers and their isogenic non-bacteriocin-producing mutants, the latter giving the ability to distinguish bacteriocin-related from non-bacteriocin-related modifications of the microbiota. The fecal DNA extraction and 16S rDNA sequencing methods are consistent and, together with the bioinformatics, constitute a powerful procedure to find faint changes in the bacterial profiles and to establish correlations, in terms of cholesterol and triglyceride concentration, between bacterial populations and health markers. Our protocol is generic and can thus be used to study other compounds or nutrients with the potential to alter the host microbiota composition, either when studying toxicity or beneficial effects.

Bacteriocins are believed to play a key role in defining microbial diversity in different ecological niches. Here, we describe an efficient procedure to assess how bacteriocins affect gut microbiota composition in an animal model.

Une méthode pour évaluer les effets de la bactériocine sur le microbiota intestinal des souris

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure plasma (LPP) discharges contain a broad spectrum of active species, which lead to rapid microbial inactivation. To study the efficiency and mechanisms of sterilization by LPP, we use spores of the test organism Bacillus subtilis because of their extraordinary resistance against conventional sterilization procedures. We describe the production of B. subtilis spore monolayers, the sterilization process by low pressure plasma in a double inductively coupled plasma reactor, the characterization of spore morphology using scanning electron microscopy (SEM), and the analysis of germination and outgrowth of spores by live cell microscopy. A major target of plasma species is genomic material (DNA) and repair of plasma-induced DNA lesions upon spore revival is crucial for survival of the organism. Here, we study the germination capacity of spores and the role of DNA repair during spore germination and outgrowth after treatment with LPP by tracking fluorescently-labelled DNA repair proteins (RecA) with time-resolved confocal fluorescence microscopy. Treated and untreated spore monolayers are activated for germination and visualized with an inverted confocal live cell microscope over time to follow the reaction of individual spores. Our observations reveal that the fraction of germinating and outgrowing spores is dependent on the duration of LPP-treatment reaching a minimum after 120 s. RecA-YFP (yellow fluorescence protein) fluorescence was detected only in few spores and developed in all outgrowing cells with a slight elevation in LPP-treated spores. Moreover, some of the vegetative bacteria derived from LPP-treated spores showed an increase in cytoplasm and tended to lyse. The described methods for analysis of individual spores could be exemplary for the study of other aspects of spore germination and outgrowth.

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

This protocol illustrates the important consecutive steps required to assess the relevance of monitoring vitality parameter and DNA repair processes in reviving Bacillus subtilis spores after treatment with low pressure plasma by tracking fluorescence-labelled DNA repair proteins via time-resolved confocal microscopy and scanning electron microscopy.

Enquête sur les néfastes effets de basse pression Plasma stérilisation sur la survie de Bacillus subtilis Spores en utilisant Live microscopie des cellules

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure ...