Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de la nutrition des abeilles mellifeuales, sur le lien entre une mauvaise nutrition et la croissance et le développement hypopharyngéels des glandes. Le principal avantage de cette technique est que l’on peut l’utiliser pour tacher, visualiser et mesurer facilement les glandes hypopharyngéales des abeilles. En général, les individus nouveaux à cette méthode auront du mal parce que les glandes hypopharyngéales peuvent être difficiles à localiser et à disséquer sans guidage visuel.
Avant de commencer l’intervention, verser la cire de réglage fraîche fondue dans une boîte de Pétri en verre. Ajouter 20 microlitres de taches giemsa fraîchement préparées dans un puits, et 50 à 100 microlitres de solution saline dans un puits adjacent d’une lame de microscope, par abeille infirmière ouvrière à traiter. Lorsque la cire est réglée, utilisez des ciseaux micro ressorts de 10 millimètres pour enlever la tête de la première abeille et utiliser des forceps, un microscope dissection et un stylo à découper en cire pour intégrer la tête sur le côté avant dans la plaque de dissection de cire.
Insérez des épingles dans les yeux et la bouche pour fixer la tête à la plaque, et utilisez une lame de rasoir tranchante et cassante fixée dans un étau à broches pour faire une incision de deux à trois millimètres entre les yeux et les mandibules de chaque côté de la plaque du visage. Exécutez doucement les micro ciseaux sous la plaque du visage et coupez le nerf antenne qui court entre l’antenne et le cerveau. À l’aide de forceps fins, saisir la plaque du visage par la bouche, et épingler le tissu face vers le bas à la cire avec des forceps point fin et une épingle.
Ensuite, pipette 20 microlitres de PBS sur la section ouverte de la tête. Les glandes hypopharyngéales ressemblent à une chaîne de perles et sont situées sur le dessus du cerveau si elles sont intactes. À l’aide de forceps de pointe super fins, récoltez doucement l’une des glandes pour une immersion immédiate dans la tache de Giemsa sur la glissière de microscopie.
Après une incubation de cinq minutes, transférer la glande à la piscine de solution saline sur la même diapositive, en coupant la glande en petits morceaux sous le microscope avec les micro ciseaux si nécessaire. Pour mesurer les glandes, ouvrez le programme de mesure pour le microscope léger, et sélectionnez le grossissement 10 fois. Placez la lame sur le stade du microscope et localisez manuellement les glandes à travers le morceau d’oeil.
Augmentez le grossissement à 60 à 80 fois et ajustez manuellement l’orientation des glandes au nouveau grossissement. Ajustez davantage la mise au point des glandes sur l’image en direct sur le moniteur et entrez le nom de l’image et la description de l’échantillon dans la boîte de nom de l’image. Cliquez sur Acquérir l’image pour obtenir une image des glandes et sous l’onglet Analyse, sélectionnez l’outil Zone et désélectrez la valeur sous les onglets Display.
l’unité ne sera pas sélectionnée. Définissez tous les autres paramètres par défaut. Pour mesurer l’acini, cliquez ou maintenez continuellement le bouton de la souris gauche tout en traçant un périmètre d’acinus à la fois aussi soigneusement que possible.
Une fois que tous les acini à partir d’une seule image ont été mesurés sélectionnez Créer rapport, confirmant que les options appropriées sont sélectionnées, et cliquez sur Exportation. Ensuite, enregistrez le rapport dans un format approprié et nettoyez la zone de travail et les matériaux, le cas échéant. Il est difficile de trouver un contraste approprié et des bords définis de l’acini dans les tissus non tachés.
Dans les glandes hypopharyngéales tachées, les bords de l’acini sont pointus en raison du contraste amélioré entre le tissu taché et le fond blanc. Les glandes hypopharyngéales poussent au fil du temps chez les abeilles qui sont nourries au miel mélangé avec du pollen, par rapport aux abeilles qui sont nourries au miel seul. La taille hypopharyngéale de glande est également sensible au type de pollen fourni.
Par exemple, les abeilles nourries au pollen de désert ou d’amandes démontrent des glandes d’une taille équivalente, tandis que les abeilles nourries au pollen du sud-est présentent des glandes plus grandes que le miel seules nourries aux abeilles, mais plus petites que les glandes des abeilles nourries aux amandes ou au pollen du désert. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler de disséquer soigneusement les glandes et de ne pas les trop ou sous-tacher. N’oubliez pas que le travail avec la tache de Giemsa peut être dangereux et que des précautions, telles que garder la tache loin des flammes, en utilisant l’élimination appropriée, et le port de gants et de protection oculaire doit toujours être prise lors de l’exécution de cette procédure.
