Dans cette vidéo, nous introduisons comment utiliser un cylindre et un essai en plein champ pour affiner la fonction motrice dans le modèle MPTP de la maladie de Parkinson. Le principal avantage est que les souris n’ont pas besoin d’être formées avant le test comportemental. En outre, cette méthode est efficace et le coût de l’équipement est faible.
Les personnes qui sont nouvelles aux tests comportementaux peuvent sous-estimer l’effet de l’interférence environnementale. Garder le silence et éviter les changements dans la doublure aidera. Ici, l’essai comportemental est mené 24 heures après l’injection finale d’un régime de sept jours des injections de MPTP ou de solution saline et 40 minutes après administration intragastrique de L-DOPA à un sous-ensemble des animaux.
Si les tests comportementaux ne sont pas effectués dans la même pièce où les animaux sont logés, acclimatez les souris à la nouvelle pièce pendant 30 à 60 minutes avant le test. Commencez par placer un cylindre en verre transparent au centre d’une table. Entourez le cylindre sur trois côtés de carton noir, placé à quatre à huit centimètres du cylindre pour réduire l’effet de l’éclairage environnemental.
Laissez un côté du cylindre face à la caméra pour l’enregistrement vidéo. Fixez une caméra capable d’au moins un million de pixels résolution 40 à 60 centimètres du cylindre pour s’assurer que l’ensemble du cylindre est contenu dans le champ de vision. Placez une souris dans le cylindre à la fois et commencez à filmer immédiatement.
Au cours de ce processus, essayez d’éviter les changements de bruit ou de lumière afin d’éviter d’influencer le comportement de la souris. Les liftings de pattes se produisent lorsque la souris s’élève sur ses membres postérieurs, soulève à la fois des membres antérieurs au-dessus du niveau des épaules et atterrit. Arrêtez de filmer après trois minutes et placez la souris dans la cage d’accueil.
Nettoyez le cylindre avec de l’eau, puis vaporisez 70% ethnol sur le mur intérieur pour l’assainir et enlever les odeurs de souris. Essuyez le cylindre sec avant de tester la souris suivante. Une fois les tests terminés, rejouez la vidéo à un rythme de 0,5 fois la vitesse régulière et comptez le nombre de levées de pattes contre le mur de chaque souris.
Si la souris soulève ses membres antérieurs au-dessus du niveau des épaules plusieurs fois en continu sans atterrir, elle ne doit être comptée qu’une seule fois. Effectuez des essais en plein air au cours de la même session que le test de cylindre. Préparez une boîte transparente de réaction en plein champ avec une plaque de bois, recouverte d’un tissu noir ou blanc contrastant selon la couleur de la souris.
Fixez une caméra sur le terrain à une hauteur d’un mètre. Réglez la caméra pour vous assurer que la boîte de réaction en plein champ est en plein centre de la vidéo. Mettez une souris d’essai dans la boîte et laissez la souris se familiariser avec l’environnement pendant environ une minute.
Enregistrez une vidéo de cinq minutes à l’aide de la caméra connectée à l’ordinateur. Enfin, nettoyez les excréments dans la boîte de réaction en plein champ, vaporisez 70 % d’éthanol sur la boîte et essuyez-le. Dans l’essai de cylindre, une diminution du nombre d’arrières contre le mur a été observée chez les souris traitées avec MPTP comparé aux souris traitées salines.
Des arrières accrus ont été observés chez les souris traitées par MTPT ayant reçu de la L-Dopamine le jour de l’essai par rapport aux souris traitées par MPTP recevant des souris salines. Cette image montre la trace de mouvement représentative et la distribution du temps statique, du temps de marche et du temps de fonctionnement chez les souris témoins non traitées avec mptp. Les souris traitées avec MTPT ont démontré une vitesse de déplacement plus faible, une distance de déplacement plus courte, un temps statique plus long et un temps de fonctionnement plus court, puis des souris traitées salines, démontrant un déficit moteur induit par le MTPT.
Les souris traitées par MPTP recevant la L-Dopamine ont montré une vitesse de mouvement plus élevée, une distance de mouvement plus longue, un temps statique plus court, et un temps de fonctionnement plus long que les souris traitées avec juste MPTP, indiquant que L-Dopamine atténue le déficit moteur MPTP-induit. Lors de la modification des souris testées effacer la zone complètement et pulvériser de l’éthanol pour éliminer l’effet de l’odeur des anciennes souris. Après cette procédure, d’autres mesures telles que l’essai de marche de faisceau, l’essai de poteau peuvent être exécutées.
Les données relatives à la capacité d’équilibre et à la capacité motrice peuvent être obtenues grâce à ces méthodes. MPTP est neurotoxique pour les souris et les humains et donc des précautions strictes doivent être prises pour éviter l’exposition. Les EPI supplémentaires, comme un masque ou un respirateur, doivent être portés.
