L’obtention de fractions vasculaires stromales, ou SVFs, à partir de lipoaspirates nécessite une digestion avec la collagène, ce qui augmente le risque de contamination biologique. Une meilleure façon d’obtenir SVF sans collagène devrait être développée. Ces techniques nous permettent d’obtenir le SVF dans sa matrice extracellulaire native grâce à un simple processus mécanique.
Xihang Chen, un étudiant diplômé de notre laboratoire, démontrera la procédure. Après avoir obtenu les échantillons de graisse, transférer les lipoaspirates dans un tube de 50 millilitres, et permettre à la graisse récoltée d’équilibrer pendant 10 minutes. Ensuite, utilisez une pipette à pointe large pour tirer la graisse de la couche supérieure du tube dans un nouveau tube de 50 millilitres et faire tourner la graisse par centrifugation.
La couche supérieure dans le tube est la fraction de graisse Coleman. Transférer les 2/3 supérieurs de la graisse Coleman dans un nouveau tube de 15 millilitres. Cette partie est considérée comme la graisse de faible densité.
Transférer le tiers inférieur de la graisse Coleman dans un deuxième tube de 15 millilitres. Cette partie est considérée comme la graisse à haute densité. Pour produire un gel de fraction vasculaire stromal de matrice extracellulaire à partir de la graisse de basse densité, utilisez deux seringues de 20 millilitres reliées par une femelle au connecteur femelle de serrure de luer pour interculer 10 millilitres de la graisse de basse densité.
C’est l’étape clé pour détruire les adipocytes. La vitesse et l’heure à laquelle le déplacement de l’intersyringe est effectué contribuent à la qualité du produit final. Après la dernière séance d’inter-décalage, recueillir la graisse par centrifugation et transférer la couche d’huile supérieure dans un tube de 15 millilitres.
Ensuite, transférez la couche collante de gel vasculaire stromal de matrice extracellulaire moyenne dans un nouveau tube conique de 15 millilitres. Pour produire un gel de fraction vasculaire stromal de matrice extracellulaire de la graisse de haute densité, ajoutez deux millilitres de la fraction d’huile de basse densité à cinq millilitres de l’échantillon de graisse de haute densité. Interculez la graisse mélangée comme démontré jusqu’à ce qu’un flocculate soit observé dans l’émulsion.
Recueillir le flocculate par centrifugation et jeter la couche d’huile supérieure. Puis recueillir la couche moyenne collante et mélanger cette fraction avec la faible densité extracellulaire matrice stromale échantillon gel vasculaire fraction. Après traitement de la graisse Coleman au gel stromal de fraction vasculaire de matrice extracellulaire, le volume de l’huile jetée prend jusqu’à 80% du volume final, et seulement 20% du tissu adipeux préservé sous la couche d’huile est considéré comme gel stromal de fraction vasculaire de matrice extracellulaire.
Le gel stromal de fraction vasculaire de matrice extracellulaire a une texture liquide-comme lisse qui lui permet de passer par une aiguille fine de calibre 27. Cependant, la graisse coleman est composée d’une structure adipeux intégrale avec de grandes fibres qui ne peuvent passer par une canule de calibre 18. Le troisième jour après la transplantation, un grand nombre de pré-adipocytes de petite taille avec les gouttelettes intracellulaires multiples de lipide, le tissu conjonctif bien vascularisé étendu, et les cellules inflammatoires infiltrées apparaissent.
À partir du jour 15, le nombre de cellules inflammatoires commence à diminuer progressivement, et les adipocytes commencent à mûrir. Au jour 90, la plupart du tissu conjonctif vascularisé dans les greffes a été remplacé par des adipocytes matures. Les greffes de gel vasculaire stromal de fraction vasculaire de matrice extracellulaire contiennent également quelques adipocytes positifs de perilipin trois jours après la transplantation, avec de petites tailles pré-adipocytes, avec les gouttelettes intracellulaires multiples de lipide commençant à apparaître le jour 15.
Chaque champ du jour 90 sections stromal de greffe de gel vasculaire de matrice extracellulaire montrent de nombreux adipocytes positifs de perilipin et les vaisseaux sanguins nouvellement formés. La cytométrie d’écoulement peut être exécutée pour déterminer la population cellulaire dans le produit. Et la microscopie électronique à balayage peut être effectuée pour visualiser la microstructure du produit.
Cette technique fournit une méthode simple pour les chirurgiens et les chercheurs pour obtenir un produit avec une forte concentration de cellules SVF avec des fibres matricielles extracellulaires indigènes à partir de tissu adipeux.
