Cette technique d’isolement peut être utilisée pour explorer si les cellules souches adipeuses peuvent aider les patients à régénérer la fonction érectile après une prostatectomie radicale. Cette méthode n’est pas limitée pour une maladie spécifique. Il pourrait être utilisé dans tous les domaines de la recherche sur les cellules souches adipeuses.
Les cellules souches isolées sont utilisées pour traiter la dysfonction érectile, mais la technique d’isolement est une procédure générale et les cellules souches peuvent être utiles dans d’autres domaines de la recherche sur les cellules souches. Commencez par désinfecter la peau de l’abdomen et du scrotum avec 0,5% de chlorhexidine. Utilisez un marqueur chirurgical pour dessiner les zones de l’abdomen où la liposuccion va être effectuée, généralement la zone située entre la synthèse et l’ombilic.
Faites deux incisions de six millimètres de large dans la peau de l’abdomen avec un scalpel numéro 11. Placez les incisions symétriquement et latéralement à partir de la zone de liposuccion. Placez un peu de lubrifiant sur les incisions pour vous assurer que la canule d’infiltration glisse facilement dans et hors des incisions pendant la liposuccion.
Introduisez ensuite une canule d’infiltration de calibre 14 à travers les incisions de la peau. Injecter la solution de Klein modifiée par voie sous-cutanée dans les zones marquées parallèles à la surface de la peau jusqu’à ce que le tissu ciblé devienne enflé et ferme ou tumescent. Injecter un volume de solution de Klein modifiée dans un rapport de un pour un au tissu adipeux.
Attendez 10 minutes pour maximiser les effets de l’adrénaline et réduire la quantité de sang dans le tissu adipeux récolté. Effectuer une liposuccion par perfusion à jet standard pour récolter 200 à 300 millimètres de tissu adipeux. Utilisez des canules émoussées qui sont creuses avec un tube de perfusion et une buse intégrés.
Fixez la canule à un dispositif d’aspiration pour la liposuccion. Introduisez une seringue de trois millimètres avec une pointe émoussée à travers les incisions sur l’abdomen et collectez le tissu adipeux dans le Lipo Collector pour préserver la lipoaspirat dans un environnement stérile. La lipoaspirat commencera à se séparer de la phase aqueuse.
Utilisez des seringues stériles de 50 millilitres pour aspirer le lipoaspirat du LipoCollector, minimisant ainsi le volume d’eau aspiré dans les seringues. Vissez un bouchon sur l’extrémité des seringues pour garder le tissu adipeux stérile. Placez les seringues avec la pointe vers le bas dans un sac en plastique stérile pour commencer la séparation de la lipoaspirat de la phase aqueuse.
Ensuite, placez le sac dans un récipient stérile. Couvrez le conteneur avec un drap stérile pour sécuriser l’environnement stérile pendant le transport. Fermez les incisions cutanées avec le matériau de suture préféré du chirurgien.
Placez un vêtement de compression autour de l’abdomen pour réduire l’œdème postopératoire. Pour faire un bloc pénien, injectez la bupivacaïne à deux sites, l’un placé ventralement et l’autre dorsalement. Introduisez l’aiguille entière dans le tissu sous-cutané, en la pointant latéralement vers la droite, et injectez l’anesthésie lorsque l’aiguille est rétractée.
Répétez l’injection en pointant l’aiguille vers la gauche. Placez tous les consommables et enzymes de manière aseptique sur la table recouverte d’une serviette chirurgicale jetable stérile. Essuyez l’appareil avec de l’éthanol et chargez l’ensemble de consommables.
Ensuite, connectez un sac de sonneries lactées au système. Effectuez la série de tests semi-automatiques avant d’ajouter le lipoaspirate. Pendant la préparation de l’appareil, laissez le lipoaspirat reposer dans un tube de 50 millilitres pour permettre à la graisse de se séparer de la phase liquide.
Notez la quantité totale de tissu adipeux et utilisez-la pour vous assurer que la quantité totale de graisse chargée sera dans la plage de la capacité de l’appareil. Chargez le tissu lorsque l’appareil vous y invite. La machine drainera l’excès de liquide.
Pesez la quantité de tissu adipeux et lavez-la avec des sonneurs lactés. Lorsque le tissu a été lavé et drainé, branchez une nouvelle poche de perfusion avec des sonneurs lactés de 37 à 39 degrés Celsius. Reconstituer l’enzyme disponible dans le commerce contenant du mélange de collagénase et de protéase dans des anneaux lactés de cinq millilitres.
Assurez-vous que l’appareil affiche la quantité d’enzyme à injecter dans le bidon avec le tissu adipeux. Une fois injecté, la digestion enzymatique durera environ 20 minutes. Après la digestion des tissus, vérifiez que le contenu est séparé en un lipide supérieur contenant une phase jaune et une couche rose inférieure contenant les cellules régénératives dérivées adipeuses, ou ADRC.
Laissez la couche rose s’écouler dans la chambre de traitement cellulaire de l’ensemble consommable, en laissant la couche lipidique derrière. Permettre aux ADRC de se concentrer dans la chambre de traitement cellulaire pendant plusieurs cycles de centrifugation. Ajoutez ensuite 10 millilitres d’intrabase reconstitués dans les anneaux lactés.
La réaction enzymatique dure 10 minutes et les ADRC sont lavés par la suite. Une fois l’isolement des ADRC terminé, remettez les cellules en suspension dans cinq millilitres de lactate de Ringer et aspirez la solution dans une seringue de cinq millilitres. Montez un verrou Luer femelle à trois voies sur la seringue et aspirez quatre millilitres d’ADRC dans une autre seringue stérile de cinq millilitres.
Transférer le dernier millilitre d’ADRC dans une seringue d’un millilitre. Utilisez cette aliquote pour les analyses de caractérisation de l’ADRC, telles que le nombre de cellules, la viabilité cellulaire, l’analyse des marqueurs de surface par cytométrie en flux et la capacité de différenciation de l’ADRC. Placez une aiguille de calibre 25 sur la seringue de cinq millilitres contenant les quatre millilitres d’ADRC.
Ensuite, emballez-le dans un drap stérile. Cette solution d’ADRC sera injectée dans le receveur et devrait contenir en moyenne 8,4 à 32,7 millions de cellules. Assurez-vous que la solution d’ADRC reste homogène en inclinant doucement la seringue jusqu’à ce qu’elle soit injectée dans les corps caverneux.
Placez un drapé d’ouverture sur le pénis. Et un garrot à la racine du pénis avec une boucle de vaisseau en silicone. Resserrez la boucle et fixez-la avec une pince, en rendant le garrot suffisamment serré pour arrêter le flux sanguin du pénis.
Utilisez deux écouvillons antiseptiques pour désinfecter la peau du pénis au site d’injection. Injectez ensuite un millilitre de la solution ADRC dans un angle direct dans les corps caverneux, sur le côté droit à deux endroits différents. Répétez cette étape dans le corps caverneux gauche, en injectant un volume total de quatre millilitres.
Cette méthode a été testée dans un essai clinique ouvert de phase un sur 21 hommes avec un âge moyen de 60 ans et une érection normale et une vie sexuelle active avant une prostatectomie radicale. Six des hommes souffraient également d’incontinence. Tous les hommes ont reçu une seule injection inter caverneuse d’ADRC isolés et ont été suivis de quatre visites à la clinique externe aux 1, 3, 6 et 12 mois après l’injection.
Aucun événement grave ne s’est produit pendant la période d’observation. Huit hommes ont signalé une rougeur transitoire et un gonflement aux sites d’injection, et trois ont signalé une réaction dans la région du pénis. Huit hommes ont connu des événements mineurs réversibles liés à la liposuccion, tels qu’une légère gêne abdominale et des hématomes abdominaux mineurs.
Aucun patient n’a signalé d’inconfort au cours du suivi d’un mois. Leur fonction sexuelle a été évaluée avec l’indice international de la fonction érectile cinq et le score de dureté de l’érection. Huit hommes sur 15 du groupe continent ont déclaré que leur fonction érectile était suffisante pour les rapports sexuels à 12 mois.
Le groupe de six hommes incontinents n’a montré aucune amélioration de la fonction érectile Lors de la tentative de ce protocole, gardez à l’esprit que les enzymes utilisées pendant la procédure d’isolement doivent être sorties du congélateur ou du réfrigérateur deux heures avant le début de la procédure. Les résultats de cette technique ont ouvert la voie à un ECR où les effets des cellules souches adipeuses sont explorés à plus grande échelle.
