Notre protocole peut être utile dans les systèmes et le mécanisme. Et les bonnes informations montrent l’effet du stress physique et du massage. Notre système local d’achèvement cyclique est beaucoup plus simple.
Les méthodes conventionnelles ne sont pas nécessaires pour l’insertion locale. Appliquer du ruban chirurgical sur les membres postérieurs bilatéraux en position supine avec les articulations du genou étendues et les articulations de la cheville plantaires fléchi. Placez un fil d’aluminium sur le tronc au niveau de la colonne vertébrale L4-5, et encez le fil dans une configuration en spirale autour des membres postérieurs avec des écarts de cinq millimètres entre chaque tour de la spirale.
Afin de réduire au minimum la possibilité de s’échapper du câblage, ajustez manuellement la configuration du fil pour immobiliser les articulations de la hanche à une position d’enlèvement à 90 degrés. Ensuite, retournez la souris dans sa cage d’accueil avec surveillance jusqu’à la récupération complète. Pour mesurer la pression musculaire gastrocnemius intramusculaire placer la souris anesthésiée dans la position couchée et raser, déplater et semi-stériliser la peau du veau postérieur.
Utilisez un scalpel pour faire une incision de deux millimètres dans la peau désinfectée. Et insérez une aiguille de 20 jauges dans le muscle gastrocnemius à un angle de 150 à 170 degrés à la surface de la peau. Ensuite, en utilisant la gaine en plastique de l’aiguille comme un guide, placez un capteur de télémètre de pression artérielle dans le ventre moyen du muscle gastrocnemius.
Enfermez la peau avec une suture en nylon 4-O. Ensuite, utilisez plusieurs poids cylindriques différents pour appliquer une compression cylindrique locale sur le muscle du mollet pendant une minute. Et surveiller la pression intramusculaire à l’aide du logiciel approprié pour l’analyse des signaux biologiques.
Pour le traitement de compression cyclique local désengager la souris anesthésiée du câblage du membre postérieur. Et placez l’animal dans la position couchée. Ajustez les membres postérieurs de sorte que les articulations du genou soient étendues et que les articulations de la cheville soient plantaires fléchies avec les mollets orientés vers le haut.
Et déplacez verticalement une unité de poids cylindrique, recouverte d’un coussin coussiné, sur le muscle du mollet à un hertz pendant 30 minutes par jour pendant sept jours. Après chaque épisode quotidien de compression rebrancher les membres postérieurs de la souris avant de retourner l’animal dans sa cage d’origine. À la fin de l’expérience, dépolar la surface postérieure du mollet et faire une incision cutanée pour permettre la séparation des muscles gastrocnemius de l’os tibiofibulaire.
Congelez rapidement le tissu musculaire récolté dans une solution optimale de composé de température de coupe. Et utilisez un cryostat pour obtenir des sections des muscles gastrocnemius sur des toboggans en verre. Pour l’étiquetage immunohistochimique, décongeler et déshydrater les sections en séchant à l’air à température ambiante avant d’utiliser un stylo hydrophobe pour dessiner un anneau autour des sections tissulaires de chaque toboggan.
Ensuite, placez les glissières dans la chambre d’humidité. Et ajouter 100 microlitres de tampon de blocage de chaque côté. Après 30 minutes à température ambiante rincer les diapositives avec deux lavages de 5 minutes en PBS-T, avant d’étiqueter les sections avec 100 microlitres de l’anticorps primaire d’intérêt pendant la nuit à température ambiante.
Le lendemain matin, lavez les glissières 3 fois en PBS-T pendant 5 minutes par lavage. Et étiquetez les échantillons avec un anticorps secondaire approprié pendant 1 heure à température ambiante, à l’abri de la lumière. À la fin de l’incubation, lavez les glissières 3 fois en PBS-T frais comme démontré.
Et tacher les noyaux avec 100 microlitres de DAPI pendant trois minutes à température ambiante dans l’obscurité. Ensuite, lavez la diapositive trois fois de plus. Et monter les échantillons avec un milieu de montage compatible et slips de couverture.
Pour l’analyse histomorphométrique, placez les diapositives sur la scène d’un microscope à fluorescence et visualisez les échantillons sous un subjectif 20 X dans les filtres appropriés. Ensuite, dans le logiciel d’analyse d’image mesurer la zone transversale de chaque myofiber et compter le nombre de cellules exprimant les marqueurs expérimentaux d’intérêt. La zone transversale de gastrocnemius myofiber sont sensiblement diminuées par l’immobilisation de membre postérieur.
En outre, l’analyse immunofluorescente de coloration indique que les cellules exprimant MCP-1 et TNF-alpha sont sensiblement augmentées dans les tissus musculaires gastrocnemius des membres postérieurs immobilisés. Ensemble, avec l’augmentation des cellules positivement souillées avec F4/80, l’immobilisation de membre postérieur semble instigateur de l’atrophie de muscle de veau, impliquant des réponses inflammatoires locales, y compris l’accumulation de macrophage. Parmi les différentes magnitudes de compression cycliques locales testées en changeant le poids de l’unité cylindrique, la compression correspondant à 50 millilitres d’ondes de pression intermusculaires au mercure, semble atténuer le plus efficacement la diminution induite par l’immobilisation dans la zone transversale du myofiber et augmenter l’accumulation de macrophages dans les muscles gastrocnemius.
Une compression cyclique locale de 66 grammes, appliquée à 1 hertz pendant 30 minutes par jour pendant 7 jours, soulage de manière significative les diminutions induites par l’immobilisation observée dans la zone transversale myofiber des muscles gastrocnemius. De plus, la compression cyclique locale tempère partiellement les diminutions induites par l’immobilisation de la force contractante des muscles des triceps surae. En outre, la compression cyclique locale tempère l’augmentation de F4/80 positif, TNF-alpha positif, et MCP-1 une cellule positive dans le tissu musculaire gastrocnemius des membres postérieurs immobilisés.
Notre approche fournira une base scientifique pour l’élévation musculaire dans le patient et notre stratégie potentielle pour la procédure préventive. Le rat a trouvé le limité de l’inactivité physique. En utilisant notre système, nous avons commencé à évaluer le plus grand nombre de patients qui manquent de mécanique dans le patient.
Moyen industriel local modéré de le faire fait une atrophie musculaire induite par l’immobilisation parfaite.
