Coloration rapide de Golgi pour la visualisation de la colonne vertébrale dendritique dans l’hippocampe et le cortex préfrontal

Bien que relativement simple, la technique d’imprégnation de Golgi comporte des étapes délicates et le fait de ne pas les faire correctement entraîne des cellules impropres à l’analyse. Cette technique permet un marquage rapide et reproductible des neurones imprégnés de Golgi. Et de plus, la petite erreur-type de la moyenne permet de comparer les expériences.

La partie la plus difficile de cette technique est de couper les sections de cryostat, car il y a une consistance et une fixation inhabituelles, et donc les obtenir sur la glissière à plat est un peu un défi. Tout d’abord, placez une petite quantité de milieu tissulaire sur un mandrin de cryostat pré-refroidi. Montez les blocs cérébraux sur des mandrins de cryostat en décongelant légèrement un côté du bloc dans une main gantée et en le plaçant sur le milieu tissulaire.

Utilisez un spray de congélation sur le couteau et le bloc. Utilisez la plaque anti-roulis ou la brosse pour garder la section à plat pendant la coupe. Coupez des sections de 100 micromètres sur un cryostat à moins 22 degrés Celsius.

Montez le dégel, si possible, en utilisant une glissière à température ambiante et opposez-la rapidement à la section. Alternativement, gardez les lames dans le cryostat, afin qu’elles gèlent. Transférez la section avec une pince froide ou un pinceau froid, puis décongelez le support.

Montez trois à quatre sections coronales sur les affaissements. Nettoyez le couteau avec des lingettes en papier entre les tranches. Si le couteau nécessite un nettoyage supplémentaire, utilisez 100% d’éthanol et séchez-le avant de couper la tranche suivante.

Placez les diapositives dans des racks, suffisamment espacés pour permettre à la solution d’accéder aux sections. Placer les sections dans de l’eau distillée deux fois pendant quatre minutes avant de les placer dans la solution d’imprégnation de Golgi pendant 10 minutes. Séparez les bordereaux de couverture pour vous assurer qu’un seul bordereau de couverture est placé sur les sections.

Couvrez les glissières de verre avec une quantité généreuse de support de montage avant de placer un couvercle en verre sur la glissière. Une fois la couverture glissée, les lames sèches ont été signalées sur tout papier non poreux pendant trois à cinq jours, en les déplaçant légèrement, surtout après le premier jour pour éviter de coller. Transférez ensuite les diapositives dans des porte-diapositives et, idéalement, séchez les diapositives pendant au moins trois semaines avant de les examiner.

Pour analyser la densité de la colonne vertébrale dendritique dans les neurones pyramidaux du cortex préfrontal médian et de la région CA1 de l’hippocampe, mesurez la longueur dendritique à l’aide d’un programme d’analyse d’images. Comptez les épines sur les dendrites à l’aide d’un compteur à main et enregistrez la longueur et le nombre d’épines. Pour l’analyse, choisissez des neurones avec des corps cellulaires et des dendrites lorsqu’ils sont imprégnés, et des dendrites qui sont continues et distinguables des cellules adjacentes.

La figure montre des exemples de cellules imprégnées de Golgi dans la région CA1 de l’hippocampe est montré à faible et haute puissance. La figure illustre une expérience dans laquelle la densité basale de la colonne vertébrale dendritique a été augmentée sur des cellules pyramidales chez des rats adolescents mâles et femelles après enrichissement environnemental en CA1 et dans le cortex préfrontal médian. Il est difficile de garder les sections suffisamment froides lors de la coupe et nous utilisons beaucoup de spray de congélation pour ce faire.

Et puis par la suite, il est difficile de mettre les sections sur les diapositives et de les faire sécher à plat. Cette technique est utilisée pour examiner les caractéristiques neuroanatomiques. Il peut être utilisé seul ou en combinaison avec d’autres méthodes de traçage neuroanatomique.