Cette méthode utilise des fruits de café vert pour tester la toxicité des insecticides contre l’agrile des baies de café. L’application d’insecticide est effectuée avant ou après l’infestation d’insectes pour étudier la répulsion à la mortalité des insectes et d’autres effets. L’utilisation de vrai café vert avec des nutriments adéquats pour la croissance des insectes est le moyen le plus approprié d’évaluer la toxicité des composés pour les insectes dans des conditions naturelles simulées.
Le protocole permet d’évaluer les effets toxiques des insecticides chimiques et des agents pathogènes tels que les champignons ou les substances répulsives. Cette infection des fruits et des insectes est l’étape critique car une désinfection inadéquate peut entraîner la mort des insectes en raison de la contamination. La qualité des insectes est également importante car les insectes faibles surestiment les résultats d’un produit toxique.
La démonstration visuelle permet d’identifier l’étape appropriée du processus d’infestation d’insectes, le moment approprié pour propager la substance toxique. Et la façon de disséquer les fruits. Claudia Martinez, assistante de recherche du laboratoire, fera la démonstration de la procédure.
Pour commencer, ramassez les fruits du café vert tôt le matin avec l’âge approximatif de développement de 120 à 150 jours après la floraison des plantations de café. Sélectionnez environ 300 fruits sains et de taille uniforme et retirez les pédoncules. Trempez les fruits du café vert dans une solution de savon à 2% et nettoyez soigneusement en les frottant.
Ensuite, rincez les fruits trois fois à l’eau claire. Immergez-les dans une solution d’hypochlorite de sodium à 0,5% et placez-les sur le shaker pendant 10 minutes à 110 tours par minute. Rincez les fruits à l’eau claire trois fois et séchez-les avec des serviettes en papier stériles.
Irradiez les fruits en les plaçant à 55 centimètres de la source UV pendant 15 minutes, à l’intérieur d’une station de flux laminaire horizontal compatible UV. Déplacez les fruits toutes les cinq minutes pour assurer la bonne irradiation du fruit entier. Pour mettre en place les essais biologiques, immergez les foreurs de baies de café qui ont émergé le même jour dans une solution d’hypochlorite de sodium à 0,5% et agitez-les lentement avec une brosse pendant 10 minutes.
Filtrez ces insectes à travers un chiffon en mousseline et lavez-les trois fois avec de l’eau distillée stérile. Enlevez l’excès d’eau avec des serviettes en papier stériles. Préparez un groupe de 30 fruits de café vert par unité expérimentale et placez-les dans une boîte en plastique.
Appliquer différentes concentrations d’un produit d’essai pour évaluation à l’aide d’une unité de pulvérisation portable, ici, des émulsions d’alcaloïdes de 5% et 6% ont été utilisées. Comme contrôle, vaporisez de l’eau sur un groupe de fruits de café vert. Utilisez au moins trois unités expérimentales par traitement, en pulvérisant l’une après l’autre.
Dans une hotte stérile, relâchez deux adultes foreurs de baies de café par fruit de café vert et couvrez les boîtes après 30 minutes. Laissez les boîtes en plastique avec les fruits de café vert infestés dans l’obscurité à l’intérieur d’une pièce ou d’un incubateur, dans des conditions contrôlées. Après 1, 7, 15 et 21 jours, comptez le nombre de fruits de foreurs et d’insectes vivants et morts à l’extérieur des fruits dans chaque boîte.
20 jours après l’infestation, disséquez chaque fruit de café vert au stéréomicroscope avec un grossissement de 10x et comptez le nombre de graines saines ou de graines endommagées par les insectes dans chaque fruit. Comptez les différents stades biologiques de l’agrile des baies de café. Observez le nombre d’insectes morts dans chaque graine pour déterminer la mortalité des insectes par unité expérimentale.
Dans une hotte stérile, relâchez les adultes foreurs de baies de café dans les fruits du café vert précédemment désinfectés dans un rapport de deux pour un et laissez l’infestation se poursuivre pendant trois heures à 21 degrés Celsius. La plupart des fruits du café vert devraient être infestés après trois heures avec l’abdomen de l’agrile des baies de café encore exposé. Sélectionnez 46 fruits infestés et placez-les dans une grille en plastique de 96 puits afin que le traitement puisse être directement pulvérisé sur l’agrile des baies de café perforant le fruit.
Vaporisez trois racks au moins trois fois pour le traitement, l’un après l’autre et couvrez les racks après 30 minutes. Après 20 jours, disséquez les fruits du café vert au stéréomicroscope à un grossissement de 10 x et comptez le nombre de graines saines ou de graines endommagées par les insectes dans chaque fruit. Compter les différents stades biologiques de l’agrile du café et le nombre d’insectes morts dans chaque graine pour déterminer la mortalité des insectes par unité expérimentale.
Suivez les étapes initiales pour évaluer un produit ayant un effet protecteur sur les fruits et libérez les fruits du café vert adultes dans les boîtes en plastique. Ensuite, comptez le nombre de foreurs de baies de café qui s’envolent des boîtes et le nombre qui infeste les fruits du café vert. Après l’incubation, dans des conditions contrôlées, suivie d’une dissection 20 jours après l’infestation et en comptant les graines et les insectes morts, suivez les étapes décrites pour évaluer le produit, après l’infestation par l’agrile du café.
Comptez le nombre de baies de café qui se sont déplacées des fruits du café vert ou qui se sont envolées des fruits. Après avoir pulvérisé chaque traitement, suivez les étapes de l’incubation dans des conditions contrôlées pour déterminer la mortalité des insectes par unité expérimentale. L’insecticide de 5 % et 6 % appliqué sur l’agrile des baies du café a causé une mortalité élevée des insectes au jour 20 et a montré des différences significatives par rapport au témoin.
On a constaté que l’application de l’insecticide deux a donné 94% des semences saines, et l’insecticide un a entraîné 89% des semences saines. 37% des graines n’étaient pas infestées dans le groupe témoin. Dans le cas d’une post-infestation, les produits ont pénétré dans la cuticule de l’insecte provoquant la mortalité des insectes.
La mortalité la plus élevée s’est produite avec l’insecticide deux. Les effets des insecticides ont été reflétés dans le pourcentage de graines saines non infectées, au jour 20 de l’évaluation. Une population d’insectes réduite a été trouvée à l’intérieur des graines de café par rapport à la population d’insectes trouvée dans le groupe témoin, pulvérisée avec de l’eau.
L’action combinée des entomopathogènes et des répulsifs a entraîné un minimum de dommages aux semences et une mortalité maximale des insectes. Cette infection des fruits et la désinfection des insectes assurent le succès du protocole. Cette méthodologie peut également être utilisée pour évaluer la tolérance ou la résistance des fruits du café à l’agrile des baies de café.
Un effet négatif peut également être observé contre la population d’insectes dans le cas des graines de café résistantes aux insectes. Cette méthodologie peut être utilisée non seulement en entomologie pour évaluer les insecticides avec différents modes d’action, mais aussi en sélection végétale pour l’évaluation des variétés tolérantes et en pathologie végétale pour étudier l’interaction fruit/pathogène.
