Ce travail a été soutenu par des subventions de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (82173991) et du Programme des sciences et technologies du Sichuan (2022YFS0442).

Voir le tableau 1 pour plus d’informations sur les matières médicinales de Pheretima, Periplaneta americana et Hirudo. Ils ont été identifiés par le professeur Xu Runchun, de l’Université de médecine traditionnelle chinoise de Chengdu, comme étant les corps séchés de Pheretima aspergillum (E.Perrier), Periplaneta americana L. et Whitmania pigra Whitman.
1. Extraction des échantillons
<ol><li>Écraser Pheretima, Periplaneta americana et Hirudo avec un moulin à herbes (voir le tableau des matériaux), tamiser la poudre médicinale à travers les tamis standard no 2 (ouverture du tamis : 0,8 mm) et no 4 (ouverture du tamis : 0,25 mm) et recueillir la poudre entre les deux tamis pour obtenir la poudre d’échantillon requise. REMARQUE: Le Pheretima est moelleux après broyage, de sorte que sa poudre n’a pas besoin d’être tamisée.</li>
	<li>Prélever 1 g de poudre (précision de 0,001 g) dans un tube à centrifuger en plastique de 50 mL, ajouter 20 mL de solution d’acide trichloracétique (TCA) à 5 % (voir le tableau des matières) et homogénéiser à 1 000 rmin-1 pendant 1 min avec un homogénéisateur à dispersion à grande vitesse.</li>
	<li>Après homogénéisation, centrifuger à 1 717 x g pendant 5 min à température ambiante, ajouter un peu de coton absorbant dans l’entonnoir en verre et filtrer le surnageant dans une fiole jaugée de 50 mL.</li>
	<li>Répétez le processus d’extraction ci-dessus deux fois avec 15 mL et 10 mL de solution de TCA à 5%. Mélanger le filtrat et le diluer à 50 mL avec une solution de TCA à 5 %.</li>
</ol>2. Préparation du réactif
<ol><li>Préparer une solution d’hydroxyde de sodium à 20 % : peser 20 g d’hydroxyde de sodium et utiliser de l’eau désionisée pour fixer le volume dans une fiole jaugée de 100 mL.</li>
	<li>Préparer la solution de TCA à 5 % : peser 25 g de TCA et utiliser de l’eau désionisée pour fixer le volume dans une fiole jaugée de 500 mL.</li>
</ol>3. Préparation de la solution mère standard TMA
<ol><li>Préparer la solution mère étalon TMA : peser 0,0162 g d’échantillon étalon de chlorhydrate TMA, le dissoudre dans une solution de TCA à 5 % et fixer le volume à 100 mL, égal à la concentration de 100 μg/mL de la solution mère étalon TMA. Conserver à 4 °C.</li>
	<li>Préparer la solution d’étalon-utilisation de TMA : prendre un certain volume de solution mère étalon de TMA et le diluer étape par étape avec une solution de TCA à 5 % à des concentrations de 0,1 μg/mL, 0,5 μg/mL, 1 μg/mL, 2 μg/mL, 5 μg/mL et 10 μg/mL de solution étalon TMA.</li>
</ol>4. Exemple de traitement de l’espace de tête
<ol><li>Peser avec précision 2 mL de solution d’hydroxyde de sodium et 0,5 g de paraffine solide (point de fusion : 58-60 °C) dans un flacon d’espace de tête de 20 ml (voir le tableau des matières).</li>
	<li>Placer le flacon d’espace de tête dans un four à 70 °C pendant environ 30 min. La paraffine solide fond complètement.</li>
	<li>Sortez-le et laissez-le refroidir à température ambiante pour que la paraffine se solidifie. La paraffine solidifiée scellera l’hydroxyde de sodium.</li>
	<li>Prenez 2 mL de chaque solution d’extraction d’échantillon et placez-la sur la couche de paraffine, appuyez sur le bouchon et sceller.</li>
	<li>Placez le flacon d’espace de tête scellé sur la machine (voir le tableau des matériaux) pour la mesure.</li>
</ol>5. Définition des conditions d’analyse HS-GC-MS/MS
<ol><li>Voir le tableau 2 pour les conditions d’espace de tête et les conditions GC-MS.</li>
	<li>Voir le tableau 3 pour les informations sur les ions.</li>
</ol>6. Dessin de courbe standard
<ol><li>Reportez-vous au traitement de l’espace de tête de l’échantillon aux étapes 4.1 à 4.3 pour préparer le flacon d’espace de tête contenant la couche d’étanchéité de lessive et de paraffine.</li>
	<li>Aspirer 2 mL de 0,1 μg/mL, 0,5 μg/mL, 1 μg/mL, 2 μg/mL, 5 μg/mL et 10 μg/mL de solution étalon TMA dans un flacon d’espace de tête de 20 mL, sceller le bouchon et mesurer sur la machine.</li>
</ol>7. Test de précision
<ol><li>Reportez-vous au traitement de l’espace de tête de l’échantillon aux étapes 4.1 à 4.3 pour préparer le flacon d’espace de tête contenant la lessive et la couche d’étanchéité à la paraffine.</li>
	<li>Aspirer 2 mL de solution étalon TMA à 0,1 μg/mL dans un flacon d’espace de tête de 20 mL et sceller le bouchon. Effectuer six essais parallèles dans la machine en suivant les instructions du fabricant (voir le tableau des matériaux).</li>
</ol>8. Expérience du taux de récupération
<ol><li>Prenez un lot de Pheretima, Periplaneta Americana et Hirudo (S02, S05, S07; Tableau 1) en tant que médicaments représentatifs pour l’expérience du taux de récupération.</li>
	<li>Prélever plusieurs lots d’échantillons de poudre (S02, S05, S07) et les cuire au four à 50 °C pendant 72 h jusqu’à ce qu’aucune AMT ne soit détectée.</li>
	<li>Se reporter à la méthode de préparation des échantillons dans les rubriques 4 à 6 pour détecter la teneur en AMT dans la poudre de médicament cuite.</li>
	<li>Prenez 1 g de poudre cuite (précision de 0,001 g), mettez-la dans un tube à centrifuger en plastique de 50 ml et ajoutez 50 μL de solution étalon TMA. NOTE: La concentration de la solution étalon TMA est de 100 μg/mL, 1000 μg/mL et 10000 μg/mL.</li>
	<li>Ajouter 20 mL de solution de TCA à 5% et homogénéiser à 1000 rmin-1 pendant 1 min.</li>
	<li>Après homogénéisation, centrifuger à 1717 x g pendant 5 min, ajouter un peu de coton absorbant dans l’entonnoir en verre et filtrer le surnageant dans une fiole jaugée de 50 mL.</li>
	<li>Répéter le processus d’extraction ci-dessus deux fois avec 15 mL et 10 mL de solution de TCA à 5 %; combiner le filtrat et le diluer à 50 mL avec une solution de TCA à 5 %.</li>
</ol>9. Détermination des limites de détection (LD) et de quantification (LOQ)
<ol><li>Déterminer la LD par la concentration correspondante lorsque le rapport signal/bruit (S/N) = 3.</li>
	<li>Déterminer la LQ par la concentration correspondante lorsque le S/N = 10.</li>
</ol>10. Détermination de la teneur en AMT de l’échantillon
<ol><li>Prenez environ 1 g de poudre fine de Pheretima, Periplaneta americana et Hirudo , respectivement, extrayez l’échantillon selon la méthode ci-dessus et déterminez-le sur la machine.</li>
</ol>

Détection de la triméthylamine en médecine d’origine animale par GC-MS Headspace

<ol>
	<li>Fan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Material+basis+of+stench+of+animal+medicine:+a+review.">Material basis of stench of animal medicine: a review.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 47 (20), 5452-5459 (2022).</li><li>Deng, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+on+formation+and+taste-masking+technology+of+stench+of+animal+medicines.">Progress on formation and taste-masking technology of stench of animal medicines.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (10), 2353-2359 (2020).</li><li>Casaburi, A., Piombino, P., Nychas, G. J., Villani, F., Ercolini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+populations+and+the+volatilome+associated+to+meat+spoilage.">Bacterial populations and the volatilome associated to meat spoilage.</a> Food Microbiology. 45 (Pt A), 83-102 (2015).</li><li>Rouger, A., Tresse, O., Zagorec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contaminants+of+poultry+meat:+sources,+species,+and+dynamics.">Bacterial contaminants of poultry meat: sources, species, and dynamics.</a> Microorganisms. 5 (3), 50 (2017).</li><li>Bali&#241;o-Zuazo, L., Barranco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+liquid+chromatography-mass+spectrometric+method+for+the+simultaneous+determination+of+trimethylamine,+dimethylamine+and+methylamine+in+fishery+products.">A novel liquid chromatography-mass spectrometric method for the simultaneous determination of trimethylamine, dimethylamine and methylamine in fishery products.</a> Food Chemistry. 196, 1207-1214 (2016).</li><li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-efficient+trimethylamine+gas+sensor+based+on+Au+nanoparticles+sensitized+WO3+nanosheets+for+rapid+assessment+of+seafood+freshness.">Ultra-efficient trimethylamine gas sensor based on Au nanoparticles sensitized WO3 nanosheets for rapid assessment of seafood freshness.</a> Food Chemistry. 392, 133318 (2022).</li><li>Bota, G. M., Harrington, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+detection+of+trimethylamine+in+meat+food+products+using+ion+mobility+spectrometry.">Direct detection of trimethylamine in meat food products using ion mobility spectrometry.</a> Talanta. 68 (3), 629-635 (2006).</li><li>Neyer, P., Bernasconi, L., Fuchs, J. A., Allenspach, M. D., Steuer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivatization-free+determination+of+short-chain+volatile+amines+in+human+plasma+and+urine+by+headspace+gas+chromatography-mass+spectrometry.">Derivatization-free determination of short-chain volatile amines in human plasma and urine by headspace gas chromatography-mass spectrometry.</a> Journal of Clinical Laboratory Analysis. 34 (2), e23062 (2020).</li><li>Mitsubayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trimethylamine+biosensor+with+flavin-containing+monooxygenase+type+3+(FMO3)+for+fish-freshness+analysis.">Trimethylamine biosensor with flavin-containing monooxygenase type 3 (FMO3) for fish-freshness analysis.</a> Sensors &amp; Actuators B: Chemical. 103 (1-2), 463-467 (2004).</li><li>National Health and Family Planning Commission of the People's Republic of China. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> GB 5009. 179-2016. , 12 (2016).</li><li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+material+basis+and+processing+principle+of+fishy+smell+of+Pheretima+aspergillum+by+electronic+nose+and+HS-GC-MS.">Study on material basis and processing principle of fishy smell of Pheretima aspergillum by electronic nose and HS-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 26 (12), 154-161 (2020).</li><li>Zheng, X., Sun, F., Du, L., Huang, Y., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+on+changes+of+volatile+components+in+Gecko+before+and+after+processing+by+HS-SPME-GC-MS.">Comparison on changes of volatile components in Gecko before and after processing by HS-SPME-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 28 (15), 145-152 (2022).</li><li>Yoshiharu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Odor olfactory measurement. , (2004).</li><li>Jia, Z. W., Mao, B. P., Miao, S., Mao, X. H., Ji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+sulfur+dioxide+residues+in+sulfur+fumigated+Chinese+herbs+with+headspace+gas+chromatography.">Determination of sulfur dioxide residues in sulfur fumigated Chinese herbs with headspace gas chromatography.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (2), 277-281 (2014).</li></ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Les médicaments d’origine animale proviennent de tout le corps, d’organes ou de tissus, de produits physiologiques ou pathologiques, d’excrétions ou de sécrétions et de produits transformés d’animaux. La TMA est une source importante d’odeur de poisson dans les médicaments d’origine animale; c’est une substance malodorante typique avec un seuil olfactif très bas (0,000032 × 10-6 V/V) et une forte odeur de poisson13. À l’heure actuelle, la méthode HS-GC-MS coura...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated from:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
Haozhou Huang2 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin3 
Xiaoming Bao4 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4Shimadzu (China) Co., Ltd
to:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
JiaBao Liao2 
Haozhou Huang3 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin4 
Xiaoming Bao5 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd 
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
5Shimadzu (China) Co., Ltd

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated.

Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Le traitement des maladies humaines en utilisant des produits dérivés de parties animales et / ou de leurs sous-produits (appelés ici médicaments d’origine animale) fait l’objet d’une attention accrue. Ils jouent un rôle important dans le traitement du cancer, des maladies cardiovasculaires, de la cirrhose du foie, de la mammite et d’autres maladies, avec les avantages d’un effet fort, d’une faible dose et d’une efficacité clinique significative et spécifique. Cependant, les médicaments d’origine animale ont généralement une odeur de poisson importante, ce qui affecte grandement l’observance des patients, et sont particulièrement défavorables pour les enfants 1,2. L’odeur de poisson provient principalement des protéines, des acides aminés, des graisses et d’autres substances contenues dans le médicament, qui sont décomposées par oxydation des acides gras, dégradation des acides aminés et autres moyens de produire une variété de substances avec une odeur de poisson 2,3,4. Parmi eux, la triméthylamine (TMA) est un gaz volatil avec une odeur de poisson qui existe largement dans les aliments pourris ou pourris d’origine animale5.
Jusqu’à présent, la chromatographie en phase gazeuse (CG), la chromatographie liquide (LC), la chromatographie ionique, la spectrophotométrie, la chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS) et les méthodes de capteurs ont été couramment utilisées pour détecter la TMA dans l’environnement, les aliments et l’urine 6,7,8,9. Compte tenu de la faible contamination de la colonne GC et du système d’injection, ainsi que de la sensibilité élevée, de la reproductibilité et de la faible limite de détection (0,1-1 mg/kg), la méthode de chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse dans l’espace de tête (HS-GC-MS) a été préférée pour l’analyse alimentaire et biologique8. À l’heure actuelle, seule la Chine a établi une norme nationale pour la TMA dans les aliments, et HS-GC-MS est la première méthode de la norme GB5009.179-201610. Par conséquent, la méthode HS-GC-MS ci-dessus a été choisie pour détecter la TMA en médecine d’origine animale. Au début, notre groupe de recherche a découvert que la norme de détection HS-GC-MS pour la TMA dans les aliments pouvait détecter l’odeur de poisson dans plusieurs médicaments d’origine animale. Combiné avec les résultats des études11,12, il pourrait être prouvé que la TMA est la substance clé commune de l’odeur de poisson dans les médicaments d’origine animale. Cependant, il a été constaté que la reproductibilité des résultats expérimentaux était médiocre et qu’il y avait des problèmes tels que l’échappement de TMA et une faible stabilité, qui ne pouvaient pas être vérifiés par la méthodologie. Cela pourrait être dû au fait que la lessive a été injectée dans le flacon de l’espace de tête et que la réaction acide-base rapide a entraîné une augmentation de la pression dans le flacon, de sorte que le TMA s’est échappé du pore d’injection, empêchant la détection stable et précise de TMA. Par conséquent, cette étude a proposé une méthode améliorée de détection par chromatographie en phase gazeuse dans l’espace de tête et spectrométrie de masse quadripolaire en tandem (HS-GC-MS/MS) pour résoudre ces problèmes.
Le protocole améliore le prétraitement de l’échantillon en séparant les réactifs acido-basiques dans le prétraitement à l’aide de paraffine solide, un bon matériau solide-liquide à changement de phase. Au fur et à mesure que la paraffine se liquéfiait lentement avec l’augmentation de la température du four thermostatique, le TMA était également libéré lentement dans le flacon scellé de l’espace de tête, évitant ainsi l’augmentation de pression causée par la réaction acido-basique violente et rapide et assurant une détection stable et précise de la TMA. De plus, l’injection de l’espace de tête combinée à plusieurs modes de surveillance des réactions (MRM) dans la GC-MS/MS a efficacement supprimé les interférences chimiques de la matrice et assuré la fiabilité des résultats. Les résultats de la validation méthodologique ont prouvé que la linéarité, le test de précision et le taux de récupération de la méthode de détection améliorée pouvaient répondre aux exigences, avec une bonne reproductibilité et une sensibilité élevée.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter Trading (China) Co.</td>
			<td>SSC-2-0213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chinese herbal medicine grinder</td>
			<td>Zhejiang Yongkang Xi&#39;an Hardware and Pharmaceutical Factory</td>
			<td>HX-200K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Convection oven</td>
			<td>Sanyo Electric Co., Ltd</td>
			<td>MOV-112F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decapper for 20 mm Aluminum caps</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>V1750004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Shimadzu Corporation Japan</td>
			<td>AUW220D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatography mass spectrometry</td>
			<td>Shimadzu Corporation Japan</td>
			<td>TQ-8050 NX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Headspace Vial</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>25760200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>Shanghai biaomo Factory</td>
			<td>FJ200-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preassembled Cap</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>L4150050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample sieve</td>
			<td>Zhenxing Sieve Factory</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SH-Volatile Amine</td>
			<td>Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd</td>
			<td>227-3626-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td>
			<td>2022101401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid paraffin wax</td>
			<td>Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory</td>
			<td>20221112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic acid</td>
			<td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td>
			<td>2022102001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethylamine hydrochloride</td>
			<td>Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>AF22022108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-pure water system</td>
			<td>Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd</td>
			<td>UPR-11-5T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved technique for trimethylamine detection in animal-derived medicine by headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry

Les médicaments d’origine animale ont des caractéristiques distinctives et des effets curatifs importants, mais la plupart d’entre eux ont une odeur de poisson évidente, ce qui entraîne une mauvaise observance des patients cliniques. La triméthylamine (TMA) est l’un des principaux composants de l’odeur de poisson en médecine d’origine animale. Il est difficile d’identifier la TMA avec précision à l’aide de la méthode de détection existante en raison de la pression accrue dans le flacon de l’espace de tête causée par la réaction acido-basique rapide après l’ajout de lessive, ce qui provoque la fuite de TMA du flacon de l’espace de tête, retardant les progrès de la recherche sur l’odeur de poisson de la médecine d’origine animale. Dans cette étude, nous avons proposé une méthode de détection contrôlée qui a introduit une couche de paraffine comme couche d’isolement entre l’acide et la lessive. Le taux de production de TMA pourrait être efficacement contrôlé en liquéfiant lentement la couche de paraffine par chauffage thermostatique du four. Cette méthode a montré une linéarité satisfaisante, des expériences de précision et des récupérations avec une bonne reproductibilité et une sensibilité élevée. Il a fourni un soutien technique pour la désodorisation des médicaments d’origine animale.

Treating human diseases by utilizing products derived from animal parts and/or their by-products (referred to here as animal-derived medicines) is receiving increased attention. They play an important role in treating cancer, cardiovascular disease, liver cirrhosis, mastitis, and other diseases, with the advantages of a strong effect, small dosage, and significant and specific clinical efficacy. However, animal-derived medicines generally have a prominent fishy odor, which greatly affects patients&#39; compliance, and are especially unfavorable for children1,2. The fishy odor mainly comes from the proteins, amino acids, fats, and other substances contained in the medicine, which are decomposed through fatty acid oxidation, amino acid degradation, and other ways to produce a variety of substances with a fishy odor2,3,4. Among them, trimethylamine (TMA) is a volatile gas with a fishy odor that widely exists in rotting or rotten animal-derived foods5.
Until now, gas chromatography (GC), liquid chromatography (LC), ion chromatography, spectrophotometry, liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), and sensor methods have commonly been used to detect TMA in the environment, food, and urine6,7,8,9. In view of the low contamination of the GC column and injection system, as well as the high sensitivity, reproducibility, and low detection limit (0.1-1 mg/kg), the headspace gas chromatography-mass spectrometry (HS-GC-MS) method was preferred for food and biological analysis8. At present, only China has established a national standard for TMA in food, and HS-GC-MS is the first method in the GB5009.179-2016 standard10. Therefore, the above HS-GC-MS method was selected to detect TMA in animal-derived medicine. In the early stage, our research group found that the HS-GC-MS detection standard for TMA in food could detect the fishy odor in several animal-derived medicines. Combined with the results of the studies11,12, it could be proved that TMA is the common key substance of fishy odor in animal-derived medicines. However, it was found that the reproducibility of the experimental results was poor, and there were problems such as TMA escape and poor stability, which could not be verified by the methodology. This could be due to the fact that the lye was injected into the headspace vial and the rapid acid-base reaction led to increased pressure in the vial, thus TMA escaped from the injection pore, preventing the stable and accurate detection of TMA. Therefore, this study proposed an improved headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry (HS-GC-MS/MS) detection method to address these problems.
The protocol improves the sample pretreatment by separating the acid-base reactants in the pretreatment with the help of solid paraffin, a good solid-liquid phase change material. As the paraffin slowly liquefied with the temperature rise of the thermostatic furnace, TMA was also slowly released in the sealed headspace vial, avoiding the pressure increase caused by the violent and rapid acid-base reaction and ensuring stable and accurate TMA detection. Further, the headspace injection combined with multiple reaction monitoring (MRM) modes) in GC-MS/MS effectively suppressed matrix chemical interference and ensured the reliability of the results. The results of the methodological validation proved that the linearity, precision test, and recovery rate of the improved detection method could meet the requirements, with good reproducibility and high sensitivity.

Pleins feux sur l’auteur : Une technique améliorée pour la détection de la triméthylamine en médecine d’origine animale par chromatographie en phase gazeuse Headspace-spectrométrie de masse quadripola

Technique améliorée de détection de la triméthylamine en médecine d’origine animale par chromatographie en phase gazeuse dans l’espace de tête-spectrométrie de masse quadripolaire en tandem

The scope of our research is a material basis in the variation of fish odor in animal medicine. This protocol provides a simple pretreatment method and accurate detection of trimethylamine in animal medicines. The simple pretreatment methods and the programmed parameters of HS-GC mass/mass of this protocol, need to be further optimized, and we still have a lot of work to do.Our protocol adopts the multi-direction monitoring mode of GC mass/mass, combined with a unique, simple pretreatment, which is not only the first pretreatment for trimethylamine analysis, but also the first analytical mode to be used.

Les diagrammes schématiques du principe de prétraitement et du fonctionnement de ce protocole sont présentés à la figure 1 et à la figure 2, respectivement. Le temps de pointe de TMA était de 2,3 min, avec une forme de pic aiguë et aucune interférence d’autres impuretés (Figure 3). En mesurant la plage linéaire de 0,1 à 10 μg/mL de solution étalon TMA, avec la concentration de TMA comme abscisse et la surface du pic ...

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Ici, une méthode de chromatographie en phase gazeuse en tandem quadripolaire (HS-GC-MS/MS) adaptée à la détermination de la triméthylamine (TMA) dans les médicaments d’origine animale est décrite. Le protocole comprend le prétraitement des échantillons, le traitement de l’espace de tête, les conditions d’analyse, la validation méthodologique et la détermination de la TMA dans les médicaments d’origine animale.

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the ...

La portée de notre recherche est une base matérielle dans la variation de l’odeur du poisson en médecine animale. Ce protocole fournit une méthode de prétraitement simple et une détection précise de la triméthylamine dans les médicaments pour animaux. Les méthodes de prétraitement simples et les paramètres programmés de masse HS-GC de ce protocole doivent être encore optimisés, et nous avons encore beaucoup de travail à faire.Notre protocole adopte le mode de surveillance multidirectionnelle de la masse / masse GC, combiné à un prétraitement unique et simple, qui est non seulement le premier prétraitement pour l’analyse de la triméthylamine, mais aussi le premier mode analytique à être utilisé.

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An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

1.3K vues.  Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. La portée de notre recherche est une base matérielle dans la variation de l’odeur du poisson en médecine animale. Ce protocole fournit une méthode de prétraitement simple et une détection précise de la triméthylamine dans les médicaments pour animaux. Les méthodes de prétraitement simples et les paramètres programmés de masse HS-GC de ce protocole doivent être encore optimisés, et nous avons encore beaucoup de travail à faire.Notre protocole adopte le mode de surveill...

Vidéo: Pleins feux sur l’auteur : Une technique améliorée pour la détection de la triméthylamine en médecine d’origine animale par chromatographie en phase gazeuse Headspace-spectrométrie de masse quadripola

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the poor compliance of clinical patients. Trimethylamine (TMA) is one of the key fishy odor components in animal-derived medicine. It is difficult to identify TMA accurately using the existing detection method due to the increased pressure in the headspace vial caused by the rapid acid-base reaction after the addition of lye, which causes TMA to escape from the headspace vial, stalling the research progress of the fishy odor of animal-derived medicine. In this study, we proposed a controlled detection method that introduced a paraffin layer as an isolation layer between acid and lye. The rate of TMA production could be effectively controlled by slowly liquefying the paraffin layer through thermostatic furnace heating. This method showed satisfactory linearity, precision experiments, and recoveries with good reproducibility and high sensitivity. It provided technical support for the deodorization of animal-derived medicine.

Here, a headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry (HS-GC-MS/MS) method suitable for the determination of trimethylamine (TMA) in animal-derived medicines is described. The protocol includes sample pretreatment, headspace treatment, analysis conditions, methodological validation, and the determination of TMA in animal-derived medicines.

Recherche

Chimie

Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace GC-MS

To begin, crush the medicinal materials Pheretima, Periplaneta americana, and Hirudo with an herbal grinder. Sift the medicinal powder through standard drug sieves of number two and number four. Collect the powder between the two sieves to obtain the required sample powder.Take one gram of the powder in a 50 milliliter plastic centrifuge tube. Add 20 milliliters of 5%trichloroacetic acid solution and homogenize at 1, 000 RPM for one minute with a high speed dispersion homogenizer. After homogenization, centrifuge the homogenate at 1, 717 G for five minutes at room temperature and filter the supernatant through an absorbent cotton-dipped glass funnel into a 50 milliliter volumetric flask.After repeating the extraction process twice with 15 and 10 milliliters of 5%trichloroacetic acid solution, combine the filtrates and make up the volume to 50 milliliters with 5%trichloroacetic acid solution. Next, accurately add two milliliters of sodium hydroxide solution and 0.5 grams of solid paraffin in 20 milliliter headspace vials. Then place them in an oven at 70 degrees Celsius for about 30 minutes.Take the vials out and let them cool down to room temperature so that the paraffin solidifies. To process the sample headspace, add two milliliters of each sample extraction solution to the solidified paraffin containing vials. Press the cap and seal the vial.Put the sealed headspace vials on the GCMS for measurement. To obtain the standard curve, aspirate a series of two milliliters of trimethylamine standard solution on top of the solidified paraffin layer. Put the sealed headspace vials on the machine for trimethylamine measurement.To perform the precision test, aspirate two milliliters of 0.1 micrograms per milliliter trimethylamine standard solution on top of the solidified paraffin layer. Carry out six parallel tests in the machine following the manufacturer's instructions. For the recovery rate experiment, bake several batches of the sample powder in an oven until no triethylamine is detected in GCMS as demonstrated previously.Next, take each one gram of oven baked and fineable powder into separate 50 milliliter plastic centrifuge tubes. Add 50 microliters of trimethylamine standard solution to all the tubes and extract with 5%trichloroacetic acid solution as demonstrated previously. The retention time of trimethylamine was found to be 2.3 minutes with a sharp peak and no interference from other impurities.Pheretima, Periplaneta americana, and Hirudo samples subjected to spiked recovery tests by drying to reduce triethylamine in the herbs showed average recovery rates of 84.49, 94.66, and 85.67%respectively. Triethylamine was detected in nine batches of herbs with concentrations ranging from 13.23 to 271.63 milligrams per kilogram.