Dépistage de petites molécules et essais de toxicité chez les larves de poisson-zèbre à un stade précoce

Pour commencer, rassemblez des embryons de poisson-zèbre à un stade précoce trois jours après la fécondation dans une boîte de Pétri. À l’aide d’une micro-pipette de 1000 microlitres réglée sur un volume de 100 microlitres, transférez un embryon éclos d’apparence saine dans chaque puits d’une plaque de 96 puits. Maintenant, pipetez la quantité nécessaire de la substance d’essai dans chaque puits d’une plaque de 12 puits.

Ensuite, ajustez le volume total à 2,4 millilitres avec le milieu E3. Préparez la commande du véhicule en fonction du solvant utilisé pour dissoudre la substance chimique d’essai. À l’aide d’une pipette de 200 microlitres, prélever toute solution E3 existante de chaque puits de la plaque de 96 puits.

À l’aide d’une micropipette à huit canaux, remplacez-la par 100 microlitres du milieu d’essai préparé pour chaque concentration. S’assurer qu’un total de 24 larves sont testées par concentration. Après 24 heures, utilisez un microscope stéréo optique pour effectuer un score morphologique.

Évaluez la morphologie à l’aide d’une méthode binaire, où absent indique une morphologie normale et présent indique une anomalie morphologique. Une fois le rainurage terminé, retirez 50 microlitres du milieu de chaque puits. Remplacez-le par 50 microlitres de milieu d’essai fraîchement préparé.

Retirez et enregistrez toutes les larves mortes, puis incubez les larves à 28,5 degrés Celsius avec un cycle de lumière de 14 heures et d’obscurité de 10 heures. Cinq jours après la fécondation, les poissons-zèbres présentaient divers phénotypes après deux jours d’exposition au médicament. Les poissons zèbres non affectés ont été observés comme normaux, tandis qu’un léger œdème péricardique était évident chez certains poissons.

Un œdème péricardique sévère, accompagné d’une hémorragie vitelline et d’une extension vitelline, a été noté chez d’autres. Un retard de développement avec une pigmentation, une vessie natatoire et une longueur totale réduites a également été observé. D’autres phénotypes comprenaient un poisson-zèbre avec un jaune gonflé et une nageoire caudale pliée, une nageoire caudale absente et une notocorde incurvée.

Les cas graves présentaient une troncature et une mort avec nécrose.