Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

כמה מודלים של בעלי חיים של איסכמיה המוחית פותחו כדי לדמות את המצב האנושי של שבץ. פרוטוקול זה מתאר אנדותלין 1-(ET-1) עורק המוח האמצעי, המודל המושרה החסימה (MCAO) עבור שבץ איסכמי בחולדות. בנוסף, שיקולים חשובים, יתרונות וחסרונות של מודל זה הם דנו.

Abstract

שבץ מוחי הוא סיבת מספר אחת לאובדן כושר העבודה וגורם שלישי למוות בעולם, הבעלות של 70 מליארד דולרים מוערכים בארצות הברית ב2009 1, 2. מספר דגמים של איסכמיה המוחית פותחו כדי לחקות את המצב האנושי של שבץ. היה מי שהציע כי עד 80% מכל מקרי שבץ התוצאה מניזק איסכמי באזור 3 עורק המוח האמצעי (MCA). בתחילת 1990, אנדותלין-1 (ET-1) 4 היה בשימוש כדי לגרום לאיסכמיה על ידי יישומו ישירות בסמוך אל פני השטח של MCA לאחר פתיחת גולגולת. מאוחר יותר, מודל זה שונה 5 בעזרת הזרקת stereotaxic של ET-1 סמוך לMCA לייצר איסכמיה מוחית מוקדים. היתרונות העיקריים של מודל זה כוללים את היכולת לבצע את ההליך במהירות, היכולת לשלוט בהתכווצות עורק על ידי שינוי המינון של ET-1 נמסר, אין צורך לתפעל את כלי extracranial המספקים דם למוח, כמו גם reperfusi ההדרגתיעל שיעורים שיותר מקרוב מחק reperfusion בבני האדם 5-7. מצד השני, הדגם ET-1 יש חסרונות הכוללים את הצורך בפתיחת גולגולת, כמו גם השתנות גבוהה יותר בנפח הפעימה 8. השתנות זו, ניתן להפחית בשימוש בליזר דופלר flowmetry (LDF) כדי לוודא איסכמיה מוחית במהלך עירוי ET-1. גורמים המשפיעים על השתנות שבץ כוללים דיוק של עירוי ויצווה של ET-1 המשמש 6. שיקול חשוב נוסף הוא שלמרות reperfusion הוא תופעה שכיחה בשבץ מוחי אנושי, את משך הזמן של חסימה לET-1 המושרה MCAO לא יכול מקרוב לחקות את זה של שבץ מוחי האנושי שבו מטופלים רבים יש reperfusion חלקי על פני תקופה של שעות עד ימים לאחר 9 ספיגים, 10. פרוטוקול זה יתאר בפירוט ET-1 מודל MCAO המושרה לשבץ איסכמי בחולדות. זה יהיה גם למשוך תשומת לב לשיקולים מיוחדים וחסרונות פוטנציאליים לאורך כל ההליך.

Protocol

פרוטוקול זה אושר על ידי בעלי החיים והטיפול המוסדי ועדת שימוש (IACUC) באוניברסיטת פלורידה ועומד ב" מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה "(8 מהדורה, האקדמיה הלאומית למדעים, 2011).

חומרים

  1. בעלי חיים:, זכר, ספראג Dawley חולדות שמונה בן שבועות (River חוות צ'ארלס, Wilmington, מסצ'וסטס, ארה"ב) שוקלים 250-300 ג'בעת הניתוח.
  2. הרדמה
    1. מערכת הרדמת משאיפת (VetEquip Inc, Pleasanton, קליפורניה, ארה"ב)
    2. הרדמת isoflurane (רוקחות בקסטר, Deerfield, IL, ארצות הברית)
  3. Stereotaxic המערכת (דוד קופף מכשירים, Tujunga, קליפורניה, ארה"ב)
    1. מערכת stereotaxic חיה קטנה
    2. ברים ללא קרע אוזן לחולדות
    3. בעל ראש הרדמת גז לחולדות
  4. ויסות טמפרטורה
    1. BAT-12 מדחום microprobe (עולם Precision מכשירים, Inc, סרסוטה, פלורידה, ארה"ב)
    2. T / משאבה, TP600 שמיכת תרמית (Gaymar תעשיות, Inc, אורצ'רד הפרק, ניו יורק, ארה"ב)
  5. מכשירי ניתוח
    1. ידית אזמל ו# 11 להב, אירוס מלקחיים, גרף מלקחיים, מפשק בולדוג קלאמפ, מברג, 10 מזרק עם מחט μl משופעת מד 26 (מכשירי Precision העולם, Inc, סרסוטה, פלורידה, ארה"ב)
    2. תרגיל micromotor ובעל stereotaxic, משוכלל Stereotaxic Injector (Stoelting, עץ דייל, אילינוי, ארה"ב)
    3. סיבוב ספחת 1.0 מ"מ תרגיל, 1.0 מ"מ קונוס הפוכה תרגיל הספחת (Roboz כירורגי Instrument ושות, Inc, גייתרסבורג, מרילנד, ארה"ב)
  6. ציוד כירורגי
    1. הרכבת ברגים 0-80 X 3/32 עם 2.4 מ"מ אורך מוט, מדריך לצינורית 21-מד [4 מ"מ ארוך מתחת להדום] ודמה צינורית (פלסטיקה 1, Roanoke, VA, ארצות הברית)
    2. אקריליק ג'ט תותבת ונוזלית (לאנג שיני הייצור ושות, בע"מ, Wheeling, IL, ארצות הברית)
    3. 3.0 ניילון תפר (אואזיס, Mettawa, אילינוי, ארה"ב)
    4. ספוגיות כותנה, משחת העין Puralube (הפישר סיינטיפיק, פיטסבורג, פנסילבניה, ארה"ב)
    5. קוצץ שיער חשמלי (אוסטר, פרובידנס, רוד איילנד, ארה"ב)
  7. כימיקלים
    1. אנדותלין-1 (האמריקאי פפטיד, סאניווייל, קליפורניה, ארה"ב)
    2. כלורהקסידין 2% (Agrilabs, סנט ג'וזף, מיזורי, ארה"ב)
    3. העצירות HCl (Hospira בע"מ, בלייק פורסט, אילינוי, ארה"ב)
  8. ציוד הדמיה
    1. מיקרוסקופ הניתוחי (כלי סיילר וייצור; סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)
    2. פנס סיבים אופטי (TechniQuip קורפ, ליברמור, קליפורניה, ארה"ב)
  9. ליזר דופלר flowmetry מערכת (ADInstruments, Inc, קולורדו ספרינגס, קולורדו, ארה"ב)
    1. סנטProbe העיפרון andard
    2. בעל Probe
    3. Flowmeter דם
    4. Powerlab 4/30 עם 7 LabChart
  10. מדידה של נפח אוטם
    1. עכברוש מוח המטריצה ​​(Zivic-מילר מעבדה., Inc, אליסון פרק, פנסילבניה, ארה"ב)
    2. כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium (סיגמא אולדריץ ושות, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב) דולל ל 0.05% ב PBS
    3. סורק (Epson Perfection V30, אפסון אמריקה, Inc, לונג ביץ', קליפורניה, ארה"ב)
    4. תמונת J תוכנה (ImageJ 1.42q תוכנה, מכוני בריאות הלאומי של ארה"ב, Bethesda, מסצ'וסטס, ארה"ב)

1. צעדים טרום ניתוחיים

  1. לפני הניתוח, החולדות הם שוכנו במחזור 12:12 אור / חושך עם גישה חופשיה למים והמכרסם צ'או.
  2. הרדמה מושרה עם 4% isoflurane ב% תערובת 100 O 2 גז בתא אינדוקציה עד החולדה כבר לא נסיגות לקמצוץ כפה אחורית.
  3. טכניקה ספיגה צריכה להישמר במהלך הליך זה כולל שימוש בכפפות סטריליות, מכשירי ניתוח סטרילי, ווילון כירורגי סטרילי 11.
  4. הכתר של ראשו מגולח עם קוצץ שיער חשמלי.
  5. העכברוש שם בתנוחת השכיבה על משטח סופג שוכב על משטח הפעלת טמפרטורה מבוקרת (שמיכת תרמית).
  6. הראש ממוקם במנגנון stereotactic מתחיל עם מיקום של מסיכת הרדמת הגז.
  7. בשלב בא, בארי האוזן מוכנסים והתהדקו.
  8. במהלך הרדמת ההליך נשמר עם 2% isoflurane ב% תערובת גז 100 O 2.
  9. משחת עיני חומר סיכה מוחלת על שתי העיניים והעפעפיים סגורים כדי למנוע התייבשות עין במהלך ההליך הכירורגי.
  10. בדיקה רקטלית טמפרטורה מוכנסת לשמור על טמפרטורת ליבת חיה קבועה של 37 ± 0.5 מעלות צלזיוס
  11. עם הראש בחוזקה בstereotaxicמכשיר, אזור הניתוח מתנקה עם לסירוגין כלורהקסידין 2% ושלוש פעמים מלוחות.

2. צעדי כירורגים

  1. באמצעות אזמל, חתך קו אמצע נעשה על העור שמעל calvarium מהיבטי הזנב ביותר של העיניים (nasion) לבין האוזניים (קו עורפי מעולה).
  2. לאחר מכן חזר בו העור רוחבי עם 3 מלחציים בולדוג.
  3. רקמת חיבור היא להסיר את הגולגולת בעזרת ספוגיות כותנה יבשות, כך שניתן לראות מבנים רבים באופן ברור. אלה כוללים גבחת, תפר העטרה, ורכס גולגולת לרוחב הנכון. ספוגיות כותנה משמשות להסרת דם משדה הניתוח.
  4. שימוש במיקרוסקופ הניתוחי, גבחת ממוקמת, והמניפולטורים stereotaxic מותאמים עד ספחת תרגיל סיבוב המ"מ 1.0 מתאפסת בגבחת.
  5. אז ספחת התרגיל עבר ל1.6 מ"מ קדמי ו -5.2 מ"מ לרוחב לגבחת.
  6. חור ספחת שחודר את הגולגולת נקדח לcannאולא המיקום (איור 1). פסולת ודם עודף נמחקים ללא הרף באמצעות צמר גפן.

בשלב זה, מדריך צינורית יכולה להיות מוכנסת (צעד 7) או הזרקת ET-1 ישירה דרך חור הספחת ניתן לבצע (להמשיך ישירות לשלב 16).

  1. חורים בשלב בא, ספחת ל3 ברגי הרכבה הם קדחו בעובי חלקי של הגולגולת באמצעות 1.0 מ"מ קונוס תרגיל ספחת הפוכה (איור 1). חור אחד קדח בכל עצם חזיתית על 1-2 מ"מ קדמי לתפר העטרה ורוחב 1-2 מ"מ לתפר sagittal. חור אחד קדח בעצמות הקודקודית על 2-3 מ"מ אחורי לתפר העטרה ורוחב 2-3 מ"מ לתפר ipsilateral לחור מדריך צינורית ספחת sagittal. שלושה 0-80 x 3/32 ברגי הרכבה ממוקמים בספחת החורים האלה ויספקו תמיכה למלט מחזיק בצינורית. את הברגים צריכים להיות רק כך מתקדמים 2 או 3 סיבובים לא לפגוע עניין הדורה.
  2. מדריך הצינורית ממוקמת בבעל צינורית stereotaxic וגבחת ממוקמת.
  3. המניפולטורים stereotaxic מותאמים עד מדריך הצינורית מתאפסת בגבחת. הצינורית היא עברה לחור הספחת ממוקם 1.6 מ"מ קדמי ו -5.2 מ"מ לרוחב לגבחת.
  4. לבסוף, מדריך הצינורית שמוחדרת אל חור הספחת עם עמדת הקצה הסופית של 4.5 מ"מ גחון לגבחת.
  5. מיקום הליזר דופלר זרימת חללית (אופציונלי)
    1. כדי לעקוב אחר זרימת דם במוח באמצעות LDF, בעל חללית ניתן להציב לתוך עמדה לפני הדבקת צינורית המדריך במלט שיניים.
    2. בעל בסיס חללית גזוז סומק עם דום פרט לכרטיסייה בצורת טריז קטנה.
    3. אז בעל החללית ממוקם אחורי למדריך הצינורית ופשוט המדיאלי לרכס הגולגולת הרוחבית עם אורינטצית כרטיסיית מדיאלית (איור 1).
    4. בעל החללית וגרמהuide צינורית הם מודבקים יחדיו באמצעות מלט שיניים.
  6. אז מלט שיניים משמש כדי לאבטח את הצינורית במקום. המלט נמצא בקשר עם כל השלושה הברגים ומקיף את כל הבסיס של הצינורית.
  7. המלט צריך להיות יבש לחלוטין לפני הסרתו של בעל הצינורית. זה לוקח בערך 5 דקות.

לאחר פעולות אלה, החתך הניתוחי יכול להיות סגור ודמה הצינורית יכול להיות מוברג לתוך צינורית המדריך. לחלופין, ET-1 המושרה MCAO יכול להתבצע על העכברוש לאחר תקופה של התאוששות מניתוח השתלת הצינורית. לשיטה זו, שלב 19 יש לבצע לצד וניתן לבצע את פעולות 14-18 במועד מאוחר יותר. כדי לבצע השתלת צינורית מדריך והזרקת ET-1 במהלך אותו הניתוח, שלב 14 יש לבצע הבא.

  1. מזרק העירוי טעון עם ET-1 (בדילול עד 80 מיקרומטר בPBS) ולאחר מכן עלה בstereotaxic המזרק.
  2. המניפולטורים stereotaxic מותאמים עד קצה המחט מתאפס בשולי המדריך קנולה.
  3. קצה המחט הוא הוריד דרך צינורית המדריך לעמדה של 17.2 מ"מ גחון לשפת המדריך קנולה. אם מדריך צינורית אינה בשימוש, קצה המחט מתאפס בגבחת והוריד דרך חור הספחת ל8.7 מ"מ עמדת גחון לגבחת.
  4. 3 μl של 80 מיקרומטר ET1 הוא החדיר בשיעור של 1 לכל μl דקות.
  5. המזרק שנותר במקום במשך 3 דקות לאחר העירוי הוא מלא ולאחר מכן הוציא באיטיות.
  6. החתך נסגר עם תפר 3.0 ניילון ודמה הצינורית הוא מוברג בצינורית.
  7. מינון של משככי כאבים המתאימים (כלומר עצירות ב0.05-0.1 מ"ג / ק"ג) יש להשתמש לאחר הניתוח כדי למזער את כאב ואי נוחות בתקופת ההתאוששות.
  8. העכברוש יוסר מחדרי הניתוח והוצב באזור התאוששות חם ויבש כדי למנוע היפותרמיה, עם גישה חופשיה, קלה למזון ומים רכים.

תוצאות

1. הערכת נוירולוגית שלאחר הניתוח

אחרי בעלי החיים חוזרים להכרה, מגוון רחב של בדיקות ניתן להשתמש כדי להעריך את גירעונות נוירולוגיות, כוללים איזון, כוח האחיזה, צבת כפה, יציבה וסימטרית מדרגות לטפס. משימת זרעי החמניות היא הערכה גסה של מנ?...

Discussion

ET-1 המושרה MCAO הוא מודל ותיק של שבץ איסכמי ניסיוני המשמש באופן קבוע בזני חולדות מרובות. משתנים רבים, כגון מתח חולדה, גיל חיה, טמפרטורת גוף, שיטת הרדמה, ומומחיות מפעיל יכולים להוביל לשונות גדלו בכרכי אוטם בעת שימוש במודל זה 5, 14. עם זאת, מספר חוקרים הראו כי יתרונות של ...

Disclosures

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים משותפי איגוד לב האמריקאים רבתי הדרום (09GRNT2060421), איגוד הרפואה האמריקנית, ומאוניברסיטת פלורידה קליני ומדעי Translational המכון. אדם מכה היא עמית predoctoral NRSA NIH / NINDS, (F30 NS-060335). רוברט Regenhardt קבל תמיכת מלגה predoctoral מאוניברסיטת תכנית הכשרה רבה התחומית בפלורידה יתר לחץ דם (T32 HL-083810).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
  1. בעלי חיים:, זכר, ספראג Dawley חולדות שמונה בן שבועות (River חוות צ'ארלס, Wilmington, מסצ'וסטס, ארה"ב) שוקלים 250-300 ג'בעת הניתוח.
  2. הרדמה
    1. מערכת הרדמת משאיפת (VetEquip Inc, Pleasanton, קליפורניה, ארה"ב)
    2. הרדמת isoflurane (רוקחות בקסטר, Deerfield, IL, ארצות הברית)
  3. Stereotaxic המערכת (דוד קופף מכשירים, Tujunga, קליפורניה, ארה"ב)
    1. מערכת stereotaxic חיה קטנה
    2. ברים ללא קרע אוזן לחולדות
    3. בעל ראש הרדמת גז לחולדות
  4. ויסות טמפרטורה
    1. BAT-12 מדחום microprobe (עולם Precision מכשירים, Inc, סרסוטה, פלורידה, ארה"ב)
    2. T / משאבה, TP600 שמיכת תרמית (Gaymar תעשיות, Inc, אורצ'רד הפרק, ניו יורק, ארה"ב)
  5. מכשירי ניתוח
    1. ידית אזמל ו# 11 להב, אירוס מלקחיים, גרף מלקחיים, מפשק בולדוג קלאמפ, מברג, 10 מזרק עם מחט μl משופעת מד 26 (מכשירי Precision העולם, Inc, סרסוטה, פלורידה, ארה"ב)
    2. תרגיל micromotor ובעל stereotaxic, משוכלל Stereotaxic Injector (Stoelting, עץ דייל, אילינוי, ארה"ב)
    3. סיבוב ספחת 1.0 מ"מ תרגיל, 1.0 מ"מ קונוס הפוכה תרגיל הספחת (Roboz כירורגי Instrument ושות, Inc, גייתרסבורג, מרילנד, ארה"ב)
  6. ציוד כירורגי
    1. הרכבת ברגים 0-80 X 3/32 עם 2.4 מ"מ אורך מוט, מדריך לצינורית 21-מד [4 מ"מ ארוך מתחת להדום] ודמה צינורית (פלסטיקה 1, Roanoke, VA, ארצות הברית)
    2. אקריליק ג'ט תותבת ונוזלית (לאנג שיני הייצור ושות, בע"מ, Wheeling, IL, ארצות הברית)
    3. 3.0 ניילון תפר (אואזיס, Mettawa, אילינוי, ארה"ב)
    4. ספוגיות כותנה, משחת העין Puralube (הפישר scientifiג, פיטסבורג, פנסילבניה, ארה"ב)
    5. קוצץ שיער חשמלי (אוסטר, פרובידנס, רוד איילנד, ארה"ב)
  7. כימיקלים
    1. אנדותלין-1 (האמריקאי פפטיד, סאניווייל, קליפורניה, ארה"ב)
    2. כלורהקסידין 2% (Agrilabs, סנט ג'וזף, מיזורי, ארה"ב)
    3. העצירות HCl (Hospira בע"מ, בלייק פורסט, אילינוי, ארה"ב)
  8. ציוד הדמיה
    1. מיקרוסקופ הניתוחי (כלי סיילר וייצור; סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)
    2. פנס סיבים אופטי (TechniQuip קורפ, ליברמור, קליפורניה, ארה"ב)
  9. ליזר דופלר flowmetry מערכת (ADInstruments, Inc, קולורדו ספרינגס, קולורדו, ארה"ב)
    1. Probe עיפרון הרגיל
    2. בעל Probe
    3. Flowmeter דם
    4. Powerlab 4/30 עם 7 LabChart
  10. מדידה של נפח אוטם
    1. מוח חולדההמטריצה ​​(Zivic-מילר מעבדה., Inc, אליסון הפרק, פנסילבניה, ארה"ב)
    2. כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium (סיגמא אולדריץ ושות, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב) דולל ל 0.05% ב PBS
    3. סורק (Epson Perfection V30, אפסון אמריקה, Inc, לונג ביץ', קליפורניה, ארה"ב)
    4. תמונת J תוכנה (ImageJ 1.42q תוכנה, מכוני בריאות הלאומי של ארה"ב, Bethesda, מסצ'וסטס, ארה"ב)

References

  1. Stroke--1989. Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke. 20, 1407-1431 (1989).
  2. Lloyd-Jones, D., et al. Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 119, 480-486 (2009).
  3. Mohr, J. P., Gautier, J. C., Hier, D., Stein, R. W., Barnett, H. J. M., Stein, B. M., Mohr, J. P., Yatsu, F. M. . Stroke: pathophysiology, diagnosis, and management. , 377-450 (1986).
  4. Robinson, M. J., Macrae, I. M., Todd, M., Reid, J. L., McCulloch, J. Reduction of local cerebral blood flow to pathological levels by endothelin-1 applied to the middle cerebral artery in the rat. Neurosci. Lett. 118, 269-272 (1990).
  5. Sharkey, J., Ritchie, I. M., Kelly, P. A. Perivascular microapplication of endothelin-1: a new model of focal cerebral ischaemia in the rat. J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 865-871 (1993).
  6. O'Neill, M. J., Clemens, J. A. Rodent models of focal cerebral ischemia. Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9 (Unit 9), (2001).
  7. Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion. Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).
  8. Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems. Exp. Transl. Stroke Med. 1, 8 (2009).
  9. Tomsick, T. A. Intravenous thrombolysis for acute ischemic stroke. J. Vasc. Interv. Radiol. 15, 67-76 (2004).
  10. Olsen, T. S., Lassen, N. A. A dynamic concept of middle cerebral artery occlusion and cerebral infarction in the acute state based on interpreting severe hyperemia as a sign of embolic migration. Stroke. 15, 458-468 (1984).
  11. Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).
  12. Gonzalez, C. L., Kolb, B. A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology. Eur. J. Neurosci. 18, 1950-1962 (2003).
  13. Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice. J. Vis. Exp. (51), e2879 (2011).
  14. Sharkey, J., Butcher, S. P. Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery. J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).
  15. Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences. J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).
  16. Mecca, A. P., et al. Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke. Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).
  17. Fisher, M., et al. Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations. Stroke. 40, 2244-2250 (2009).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

721doppleyflowmetry

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved