מעקב מיקרוביאלית זיהום בסביבות קמעונאיות באמצעות פלורסנט אבקה - קמעונאות מעדני סביבת דוגמא

Summary

המטרה הכללית של מחקר זה הייתה כדי להדגים את מנגנון זיהום לחצות הפוטנציאלי של חיידקי ליסטריה הפתוגן במזון בהגדרת מעדנייה הקמעונאי. מתודולוגיה זו ניתן ליישם במגוון רחב של סביבות שונות כדי לעקוב אחר זיהום הפתוגן.

Abstract

זיהום צולב של פתוגנים במזון בסביבה הקמעונאית הוא בעיה משמעותית בבריאות הציבור לתרום לסיכון מוגבר למחלה במזון. מזון מוכן לאכילה (RTE) מעובד כגון מעדני בשר, גבינה, ובמקרים מסוימים תוצרת טרייה, היה מעורב בהתפרצות מחלות במזון עקב זיהום עם פתוגנים כגון חיידקי ליסטריה. עם כל כבוד לL. חיידקי, מכונה לחיתוך בשר מעדנייה הם לעתים קרובות המקור העיקרי של זיהום לחצות. מטרתו של מחקר זה הייתה להשתמש במתחם ניאון כדי לדמות זיהום חיידקים ולעקוב אחר זיהום זה בסביבה קמעונאית. מטבח מעדנייה מדומה שנועד לדמות את סביבת קמעונאית. בשר המעדנייה היה מחוסן עם מתחם הניאון ומתנדבים גויסו כדי להשלים סדרה של משימות דומה לאלה צפויים של עובד קמעונאות מזון. המתנדבים קבלו הוראה לחתוך, חבילה, ולאחסן את הבשר במקרר מעדנייה. הפוטנציאלזיהום לחצות היה במעקב בסביבה הקמעונאית מדומה על ידי ניגוב אזורים ספציפיים ומדידת הצפיפות האופטית של אזור swabbed עם ספקטרופוטומטר. התוצאות הצביעו על כך שאחיזת המקרר (כלומר מעדנייה מקרה) ובאזורים שונים במבצע היו בסיכון הגבוה ביותר לזיהום לחצות. התוצאות של מחקר זה עשויות לשמש לפיתוח חומרי הדרכה ממוקדים יותר לעובדים הקמעונאי. בנוסף, יכולים לשמש גם מתודולוגיות דומות כדי לעקוב אחר זיהום מיקרוביאלי בסביבות ייצור מזון (למשל משקים קטנים), בתי חולים, בתי אבות, ספינות שייט, ובתי מלון.

Introduction

זיהום צולב של פתוגנים במזון בסביבת הכנת המזון, ובמיוחד בסעיף הקמעונאי, הוא דאגה העיקרית בשל סיכון מוגבר למחלה במזון ממגוון רחב של מקורות, כולל בשרים, כמו גם הירקות ^1-5. לרוב, חיידקים פתוגנים להיכנס לסביבה הקמעונאית באמצעות מוצרי מזון מזוהמים ^6. מזונות מוכנים לאכילה שהוכנו ברמה הקמעונאית, הם מדאיגים במיוחד כמו בדרך כלל אין שום התערבות או טיפול (כלומר בישול או חימום) עוד לפני הצריכה ^7. יתר על כן, לאחר מכן ניתן להעביר פתוגנים הווה על מזון RTE מזוהם למוצרי מזון אחרים או משטחי מגע עם מזון בסביבת קמעונאית.

בעוד זיהום לחצות יכול להתרחש בתוך כמעט כל הסוג של סביבת קמעונאות מזון, מעדניות הן בעלי עניין מיוחד דווקא בגלל הקשר של מעדני בשר RTE עם monocytog יסטריה הפתוגןEnes ^2. בהתבסס על הערכת סיכוני ניתוחים שנערכו על ידי הרשות האמריקנית למזון והתרופות אמריקניות (FDA) והמחלקה לבטיחות מזון חקלאות ופיקוח שירות (USDA-FSIS) בארה"ב, מעדני בשר מזוהם צפוי אחראי ל90% ממקרים של ליסטריה - נדיר מחלות של בני אדם עדיין חמורות הנגרמות על ידי ל חיידקי - בארצות הברית ^8. באופן כללי, מעדני בשר הפרוס במפעלי שירות הקמעונאי ואוכל היה קשור לסיכון גבוה יותר של L. חיידקי בהשוואה למעדני בשר presliced ​​במפעל בדק משרד החקלאות האמריקאי על ידי היצרן ^9. זה יכול להיות בגלל הסבירות המוגברת של הקדמה של פתוגנים על ידי מפעיליו מזון, חומרי גלם נכנסים, או מזון מעובד שעשויה להיות מזוהם לאחר טיפול ^7. בסך הכל, ליסטריה מהווה כ 28% ממקרי המוות שנגרמו על ידי מחלה המוערכת במזון בשנה בארה"ב

בגלל בסיכון מקומט של L. חיידקי לזיהום במעדני הבשר הפרוס ברמה הקמעונאית, מבצעה המעדנייה עצמו זוהה כגורם חשוב להעברת שטח של פתוגנים במזון בסביבה הקמעונאית ^2,10. כפי שצוין על ידי ¹ שין, חיתוך הוא צעד העיבוד האחרון שלפני הצריכה, ולכן מבצעה המעדנייה צריך להיחשב נקודת בקרה קריטית להבנה ומניעת זיהום צולב ^1.

המטרה הכללית של מחקר זה הייתה לפתח מתודולוגיה למעקב אחר זיהום בסביבת המעדנייה הקמעונאי באמצעות אבקת ניאון כגון Glo נבט. זהו מתחם ניאון שכבר נעשה שימוש כדי לדמות זיהום לחצות חיידקים ושיטות סניטריות ^11,12. מחקר זה תוכנן כדי לעקוב אחר העברת הפתוגן מבשר מזוהם למבצעה, את סביבתו, ומעדני בשר אחר. זה חיוני כדי להבין את המסלולים של המשךamination לפתח שני התערבויות יעילות וחומר חינוכי לעובדים ולמנהלים הקמעונאי. גישה דומה יכולה להיות מועסק כדי לדמות העברת הפתוגן בסביבות אחרות עיבוד (לדוגמא עופות ובקר), חוות ובתי חולים.

Protocol

1. עקומת סטנדרט

1. שוקל אבקת ניאון 37.5 מ"ג ולהתמוסס ב6 מיליליטר 200 אתנול הוכחה. הפוך דילולים סדרתי פי 2 מפתרון זה ב200 אתנול הוכחה.
2. מערבולת את כל הדגימות ל10 שניות ולמדוד את הספיגה ב 370 ננומטר.
3. לחשב את כמות אבקת ניאון לכל 1 מיליליטר 200 אתנול הוכחה.
4. הכן את עקומת הסטנדרט (ריכוז ב/ מיליליטר מ"ג על ציר ה-Y והספיגה ב 370 ננומטר על ציר ה-x) כדי להדגים את הספיגה המבוססת על ריכוז אבקת ניאון.

2. לחסן מעדניית בשר (בולוניה) עם אבקת פלורסנט

1. חותכים את הבשר למעדנייה כ 100 מ"מ דגימות עבות בעזרת סכין נקי וקרש חיתוך. הכן שלוש דגימות שכותרתו A, B, ו-C
2. מדגם מעיל באופן שווה עם אבקת ניאון באמצעות ספוג לח מעט, נקי. מורחים את האבקה על מדגם הבשר באופן שווה. לא לחסן דגימות B ו-C עם אבקת הניאון.
3. עטוף את הדגימות בניילון נצמד ותווית המדגם מצופה אבקת ניאון כמו א 'ונותר שתי דגימות כB ו-C עם קלטת.
4. מניחים את הדגימות במקרה המעדנייה או במקרר שנערך ב 4 ° C במטבח המדומה שבו הניסוי יבוצע.

3. מוק מעדניית מטבח הכנה

1. לספק כפפות נקיות ו70% תרסיס אתנול במטבח.
2. הר אורות פלורסנט קומפקטי שחורים עם 13 נורות W סביב אזור המבצע.
3. הכן 5 ס"מ X 5 ס"מ חיתוך של נייר אלומיניום, כדי לשמש כתבנית לשטיפה.
4. הכן 15 מיליליטר צינורות המכילים 6 מיליליטר אתנול 95%.

4. הגדרת וידאו

הר שלוש מצלמות וידאו במקומות אסטרטגיים כדי לשמור על כל תחומי המעדנייה מדומה באותו הזמן. הפעל את המצלמות לפני שמדמה את הליך מבצעה (כפי שהוסבר בפרוטוקול 5) ולנתח את התוצאות בו זמנית (כפיהסביר ב -7 לפרוטוקול).

5. מדמה נהלי מעדניית חיתוך כדי לעקוב אחר צלב זיהום

על מנת לשפר את גודל מדגם ולשלב וריאציה, לבצע מחקר זה על ידי משתתפי גיוס לאחר אישור הפרוטוקול על ידי דירקטוריון סקירה המוסדית של המוסד המתאים. המשתתף יכול להיות סטודנט אשר עשוי או לא עשוי להיות ניסיון בעבודה בסביבות מעדנייה הקמעונאי. ודא כי כל משתתף לובש כפפות ברגע שהם נכנסים למעדנייה. קח את "לפני" תמונה תחת אור הניאון השחור ואחריו "אחרי" תמונה עם השלמת המחקר. לספק הוראות בכתב ובעל פה ברורה לכל משתתף באופן הבא:

1. עבור למקרר.
2. הסר את הבשר שכותרתו "".
3. לגולל בשר ולשמור בניילון נצמד.
4. מניחים בשר על מגש כרכרה של מבצעה.
5. Secure בשר עם אחיזת בשר.
6. להפעיל מתג הפעלה.
7. התאם SLIידית מדד CER ל" 2 ".
8. פורסים ולוותר על 5 חתיכות של בשר על גבי נייר מעדנייה.
9. הפעל מתג כיבוי ולשחרר את אחיזת בשר.
10. מניחים פרוסות בשר בשקית ניילון שכותרתו "".
11. Rewrap בשר "" ולחזור למקרר.
12. חזור על שלבי 2-11 עם בשר שכותרתו "B" ו "C".

6. פלורסנט אבקת כימות

לכמת את אבקת הניאון לאחר השלמת החיתוך המדומה (סעיף 5.4) במטבח המעדנייה. לשם כך בצע את הפעולות הבאות:

1. השתמש x 5 תבנית סטרילי 5 סנטימטר סנטימטר רדיד האלומיניום ומניח אותו על האזורים המסומנים באיור 1.
2. השתמש במטלית הכותנה אלגינט סידן סטרילי הספוגה ב95% אתנול, ספוגית באזור, ומקום ב6 אתנול מיליליטר 95% בצינור פוליפרופילן סטרילי.
3. מערבולת הצינור ביסודיות והעברה לקובט זכוכית לקרוא את הספיגה ב 370 ננומטר.
4. עיין בstandarעקומת ד כדי לקבוע את כמות אבקת ניאון (Y) באמצעות המשוואה הבאה: y = mx + b כאשר x הוא ספיגה, מ 'הוא השיפוע של העקומה סטנדרטית, ואילו b הוא ליירט.
5. לנורמליזציה של נתונים, לחשב את האחוזים של אבקת ניאון לכל אזור נדגמו באמצעות הנוסחה הבאה:

7. ניתוח וידאו

קלטת וידאו את המשתתפים כלהשלים משימות שהם 5.1-5.12. לסנכרן ולשמור את קלטות וידאו לתקליטורי DVD, כך שניתן להציג את כל הזוויות באותו הזמן. צפה בסרטוני הווידאו כדי להקליט את מספר נגיעות יד (את מספר הפעמים מתנדבים לגעת אזורים במעדנייה מדומה) על משטחים שונים בסביבת המעדנייה (4 חוקרים שונים ינתחו את הנתונים מלאים להגדיר באופן עצמאי).

תוצאות

איור 1 מייצג את תחומי המבצע שחוטאו לאחר המתנדבים השלימו את המשימות שהוקצו. המתנדבים צולמו בוידאו כדי לנתח את התדירות של מגע יד הממוצעת על אלה משטחים שונים. התדירות של מגע יד נותחה על ידי ארבעה משקיפים שונים וממוצעת. תוצאות אלה הראו באיור 2. הנתונים מר...

Discussion

המטרה הכללית של מחקר זה הייתה כדי להדגים כיצד זיהום לחצות חיידקים יכול להתרחש בסביבת מעדנייה הקמעונאי על מנת לפתח אסטרטגיות כדי לשלוט ולהפחית את הסיכון למחלה במזון. יש סביבת המעדנייה הקמעונאי סיכון גבוה במיוחד לL. חיידקי לזיהום. משרד החקלאות-FSIS דיווח כי יש בשר מ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Glo Germ Powder	Glo Germ Co		Purchased from vendor
Ethanol	Sigma	E7023
Permanent markers	Sharpie		Purchased from stationary store
Gloves	VWR	82026-424
Deli Meat	NA	NA	Bologna Chub from regular grocery store
Cutting Board	NA	NA	A regukar kitchen cutting board
Knife	NA	NA	A regular kitchen knife
5 cm x 5 cm sterile templates	NA	NA	Aluminum foil templates cut into 5 cm x 5 cm templates and sterilized
15 ml Polypropylene centrifuge tubes	VWR	89039-664
Cotton swabs	Puritan	25-806
Glass cuvettes	VWR	470019-186
Vortex	VWR	58816-121
Flip camera	Flip Ultra HD	NA	Purchased online
Deli slicer	Bizerba	SE-12
Deli refrigerator	True Company	TDBD-722
Scale		NA
Spectrophotometer	Milton Roy Company	NA	Spectronic 20D