JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

אנו כאן לתאר assay phagocytosis באמצעות תאים עובריים מפוזרים של תסיסנית . זה מאפשר לנו בקלות ובמדויק לכמת רמות phagocytosis vivo , וכדי לזהות מולקולות חדשות הנדרשות phagocytosis של תאים אפופטוטיים.

Abstract

המנגנונים המולקולריים שבבסיס phagocytosis של תאים אפופטוטיים צריך להיות בהבהרה בפירוט רב יותר בשל תפקידה של מחלות דלקתיות ומחלות דלקתיות. פיתחנו שיטה ניסיונית לחקור phagocytosis כמותית באמצעות זבוב פירות תסיסנית , שבו רשת הגן השליטה התגובות התגלות הוא שימור evolutionally מ יונקים. על מנת לאתר במדויק ולספור phagocytes בולע ו un -ulfing באמצעות חיות שלמות, עוברי תסיסנית היו homogenized להשיג תאים מפוזרים, כולל phagocytes ותאים אפופטוטיים. השימוש בתאי מפוזר עובריים מאפשרת לנו למדוד in vivo רמות phagocytosis כאילו ביצענו assay phagocytosis במבחנה שבה אפשר להתבונן כל פגוציטים ותאי אפופטוטיים עוברים שלם ומדויק לכמת את רמת phagocytosis. אישרנו כי שיטה זו משחזרת את אלה של מחקרים קודמיםאשר זיהו את הגנים הנדרשים עבור phagocytosis של תאים אפופטוטיים. שיטה זו מאפשרת ניתוח של תאים מתים כדי להיות מנותח, וכאשר בשילוב עם הגנטיקה החזקה של תסיסנית , יגלה את התגובות phagocytic מורכבים המורכבת של הגירה, הכרה, בליעה, והשפלה של תאים אפופטוטיים על ידי phagocytes.

Introduction

אצל בעלי חיים metazoan, למשל נמטודות Caenorhabditis elegans , זבוב הפירות תסיסנית melanogaster , ועכברים ובני אדם, מספר רב של תאים עוברים אפופטוזיס במהלך הפיתוח כדי לעצב את גופם בבגרות כדי לשמור על הומאוסטזיס 1 , 2 . תאים אפופטוטיים יש להסיר במהירות כי הם גורמים לדלקת ברקמות הסובבות על ידי שחרור חומרים תאיים immunogenic אם לא הוסר לחלוטין 3 . על מנת להקל על הסרה מהירה, תאים אפופטוטיים מציגים את מה שמכונה "אותות האכילה" המוכרים על ידי קולטני ההטיה של פגוציטים, ומוסרים על ידי phagocytosis 3 , 4 , 5 , 6 . לפיכך, phagocytosis משחק תפקיד מכריע תחזוקה של הומאוסטזיס מארח, ומכאן, הבהרת המולקא מנגנוני lar שבבסיס phagocytosis של תאים אפופטוטיים הוא בעל חשיבות.

המנגנונים האחראים על phagocytosis של תאים אפופטוטיים נראה שימור evolutionally בין המינים של נמטודות, זבובים, ועכברים 7 . כמה מבחני phagocytosis זמינים כעת כדי להעריך את ההטיה של תאים אפופטוטיים אלה בעלי חיים מודל. ב C. elegans , 131 תאים סומטיים עוברים מוות התא מתוכנת במהלך הפיתוח, גופות תאים הם phagocytosed על ידי תאים סמוכים, אשר פגוציטס לא מקצועי 8 . לפיכך, ספירת מספר גופות תאים שנותרו ב C. elegans מציין את רמת phagocytosis ב vivo . על ידי חיפוש מוטציות nematode המציגות מספר גדל של תאים מתים, מספר גנים הדרושים phagocytosis זוהו ו מאופיינים גנטית 9 , 10 ,S = "xref"> 11 , 12 .

Ex vivo phagocytosis מבחני עם phagocytes התרבות הראשית, בדרך כלל מקרופאגים, מנוצלים לעתים קרובות בעכברים. תאים אפופטוטיים מוכנים באמצעות שורות תאים כגון תאי Jurkat, והם מעורבים עם phagocytes הראשי. לאחר הדגירה במשך מספר שעות, את המספר הכולל של phagocytes ו phagocytes משתלט נספרים על מנת להעריך את רמת phagocytosis. כמו שינוי מתוחכם של שיטה זו, קבוצה של Nagata פיתחה assay vago vago vagocytosis לשעבר עם תאים להביע ICP עמיד ICP (מעכבת של DNase המופעל Caspase), שבו תאים אפופטוטיים לא עוברים פיצוץ DNA אפופטוטיים, אבל DNA הוא עדיין מתוחכם כאשר תאים הם phagocytosed. כאשר תאים אלה משמשים מטרות אפופטוטיים assay phagocytosis, רק ה- DNA של תאים אפופטוטיים אפוף הוא מקוטע, ומוכתמת על ידי TDT בתיווך DUTP סוף סוף תיוג (TUNEL). לכן, את leveL של תא אפופטוטי תא נמדדת על ידי ספירת אותות TUNEL בתערובת של phagocytes ותאים אפופטוטיים 13 .

ב ד melanogaster , phagocytes מקצועי בשם hemocytes, מקרופאגים תסיסנית , אחראים phagocytosis של תאים אפופטוטיים 14 , 15 . בנוסף מבחני phagocytosis מבחנה עם שורות תאים התרבות, ב vivo מבחני phagocytosis עם עוברי תסיסנית מלאים זמינים. עוברים תסיסנית הם כלי רב עוצמה לבחינת רמת התא אפופטוטיים תא כי תאים רבים עוברים אפופטוזיס והם phagocytosed על ידי hemocytes במהלך התפתחות עובריים 14 , 15 , 16 . דוגמה של vivo phagocytosis assay היא השיטה שפותחה על ידי הקבוצה של פרנק. בשיטה שלהם, hemocytes הם דההנגוע על ידי immunostaining של peroxidasin, סמן hemocyte, תאים אפופטוטיים מוכתמים באמצעות צבע גרעיני, 7-אמינו actinomycin D בכל עוברי תסיסנית , ומספר תאים חיוביים כפולים נספר כאות של phagocytosis 17 . דוגמה נוספת של assay phagocytosis על עוברים מבוסס על הרעיון של השיטה של ​​Nagata המתואר לעיל; עם זאת, in vivo phagocytosis מוערך באמצעות העוברים של dCAD (דרוזופילה caspase-מופעל DNase) זבובים מוטנטיים 18, 19. אלה מבחני phagocytosis vivo שימושיים עבור התבוננות ישירה phagocytosis באתרו . עם זאת, קשיים קשורים עם למעט כל הטיה אפשרית בשלב של ספירת תאים phagocytosing כי קשה לראות את כל phagocytes ותאים אפופטוטיים בעוברים שלמים בשל עובי שלה.

כדי להתגבר על מגבלה זו, אנו מפתחיםEd assay phagocytosis חדש בעוברים תסיסנית . בשיטה שלנו, על מנת לספור בקלות hemocytes phagocytosing, עוברים שלמים הם homogenized להכין תאים עובריים מפוזרים. Phagocytes מזוהים על ידי immunostaining של סמן phagocyte, ותאים אפופטוטיים מזוהים על ידי TUNEL עם תאים אלה עובריים מפוזרים. השימוש בתאים מפוזרים עובריים מאפשר לנו למדוד ברמות phagocytosis vivo כאילו בצענו assay phagocytosis במבחנה ב שדווקא מכמת את רמת phagocytosis. כל genotypes של זבובים ניתן להשתמש assay זה אם הם מתפתחים לשלב 16 של עוברי 20 , שלב התפתחותי שבו אפופטוזיה התא אישור על ידי phagocytosis הוא בשפע ביותר. שיטה זו יש את היתרון של הערכת רמת phagocytosis כמותית, ולכן, עשוי לתרום זיהוי של מולקולות חדשות המעורבים phagocytosis של תאים אפופטוטיים in vivo .

Protocol

1. הכנה

  1. הכנת טריים ענבים אגר צלחות
    1. מוסיפים 100 מ"ל מים ל -4.4 גרם של אגר, ומחממים את התערובת בתנור מיקרוגל כדי לפזר אגר.
    2. הוסף 80 מ"ל של מיץ ענבים טריים, 5 מ"ל של חומצה אצטית, ו 5 מ"ל של אתנול לפתרון אגר.
    3. יוצקים כ 1.5 מ"ל של הפתרון עם פיפטה על כל שקופית זכוכית, ולאפשר לו לחזק.
  2. הכנת 6 ס"מ צלחות agarose צלחת
    1. מוסיפים 50 מ"ל מים ל 0.5 גרם של agarose, לחמם את התערובת בתנור מיקרוגל כדי להמיס agarose.
    2. יוצקים כ 2.5 מ"ל של תמיסת agarose על צלחת 6 ס"מ עם פיפטה.

2. שלב 16 אוסף העובר

  1. איסוף זבובים למבוגרים, ולהוסיף 200 נקבות ו 200 גברים לתוך צינור חרוטי 50 מ"ל.
  2. שים צלחת של אגר ענבים טריים על שמרים לתוך צינור 50 מ"ל, ולסגור עם ספוג ספוגעמ '
  3. דגירה זבובים ב 16 מעלות צלזיוס באור למשך 2-3 ימים. שנה את הצלחת פעם ביום.
  4. להעביר את הזבובים בחושך על 25 מעלות צלזיוס למשך 1 שעות.
  5. לשנות את צלחת הישן אחד חדש ללא שמרים. אפשר זבובים להטיל ביצים עבור 2 שעות.
  6. לאסוף את הצלחת דגירה על 16 מעלות צלזיוס במשך 26 שעות.
  7. איסוף העוברים מן הצלחת עם מברשת צבע לתוך 1 מ"ל של PBS המכיל 0.2% (V / V) טריטון X-100.
  8. לשטוף עוברי פעמיים עם 1 מ"ל של PBS המכיל 0.2% (V / V) טריטון X-100.
  9. כדי להסיר את הסיסית, להוסיף 1.2 מ"ל של תמיסת hypochlorite נתרן (2.2 - 3.4% Cl) לעוברים במשך 3 דקות.
  10. לשטוף עוברי 4 פעמים עם 1 מ"ל של PBS המכיל 0.2% (V / V) טריטון X-100.
  11. מקום עוברים על 6 ס"מ צלחות agarose צלחת. לאסוף שלב 16 עוברי תחת מיקרוסקופ כפי שתואר על ידי רוברטס 20 . איסוף כ 50 עוברי ב 1.5-מ"ל Treff מיקרו צינור הבדיקה עם micropipette.

3. PrepaRation של תאים עובריים

  1. לשטוף עוברי פעמיים עם 150 μL של PBS.
  2. Homogenize עוברים 30 פעמים ב 1.5 מ"ל צינור בדיקה מיקרו מערבל גלולה בנוכחות μL 200 של collagenase (0.25% (w / v)) ב PBS.
  3. לפזר תאים עובריים ידי pipetting 10 פעמים, ולהזיז את ההשעיה התא לצינור 1.5 מ"ל. דגירה תאים על 37 מעלות צלזיוס למשך 1 דקות באמבט מים. חזור על פעולה זו פעמיים.
  4. הוסף 800 μL של PBS ההשעיה התא, צנטריפוגות ב 1400 x גרם ב 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
  5. הסר את supernatant ולהוסיף 200 μL של טריפסין (0.25% (w / v)) ב PBS לתאים. לפזר תאים עובריים ידי pipetting 50 פעמים.
  6. תסנן את ההשעיה התא עם מסננת 70 מיקרומטר Cell.
  7. על מנת להפסיק פעילות trypsin, להוסיף 40 חום μL- חום מעובה בסרום שור עוית ​​ההשעיה תא מסוננים. הוסף 800 μL של PBS ו צנטריפוגות ב 1,400 x גרם ב 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
  8. הסר את supernataNt, להשעות תאים זירז 200 μL של PBS, צנטריפוגות ב 1400 x גרם ב 4 מעלות צלזיוס במשך 5 דקות.
  9. הסר את supernatant, ו להשעות תאים זירז 30 μL של PBS.
  10. הר ההשעיה תא מוכן על aminopropyl triethoxysilane מצופה שקופיות זכוכית, ולחכות 10 - 15 דקות עד התאים לצרף את השקופיות זכוכית.
  11. הסר את הפתרון הנותר על שקופיות זכוכית עם פיפטה. הר 60 - 70 μL של PBS המכיל 4% (w / V) PFA (paraformaldehyde) על תאים 10 - 15 דקות עבור קיבעון.
  12. הסר את פתרון קיבוע, ומכניסים שקופיות זכוכית לתוך PBS במשך יותר מ 1 דקות.

4. מכתים של Hemocytes

  1. Immunostaining עם נוגדן אנטי Croquemort
    1. מקורית להשרות שקופיות זכוכית מתנול במשך 10 דקות, ב PBS המכיל 0.2% (V / V) טריטון X-100 במשך 10 דקות, ולאחר מכן ב- PBS במשך 10 דקות.
    2. הר 20 μL של 5% (V / V) בסרום חזיר שלם PBS containiNg 0.2% (v / v) Triton X-100 על תאים לחסימה. דגירה שקופיות בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות.
    3. הסר את הפתרון מן שקופיות זכוכית, ועל הר 20 μL של antiserum אנטי Croquemort 19, 21 (0.1% (v / v)) ב PBS המכיל 0.2% (v / v) טריטון X-100 על תאים. דגירה שקופיות על 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
    4. להשרות שקופיות זכוכית PBS המכיל 0.2% (V / V) Triton X-100 במשך 10 דקות 5 פעמים.
    5. ספוג שקופיות זכוכית PBS במשך 10 דקות.
    6. הר 20 μL של פוספטז אלקליין שכותרתו נגד עכברוש IgG (0.5% (v / v)) ב PBS המכיל 0.2% (v / v) טריטון X-100 ו 5% (v / v) בסרום חזיר שלם על תאים בחדר טמפרטורה עבור 1 שעות.
    7. להשרות שקופיות זכוכית PBS המכיל 0.2% (V / V) Triton X-100 במשך 10 דקות 5 פעמים.
    8. להשרות שקופיות זכוכית במאגר המכיל 100 מ"מ Tris-HCl, pH 9.5, 100 מ"מ NaCl, ו 50 מ"מ MgCl 2 במשך 10 דקות.
    9. הר תמיסת המצע phosphatase המכיל 0.23 מ"ג / מ"ל ​​5-bromo-4כלור-3-אינדוליל-פוספט (BCIP), 0.35 מ"ג / מ"ל ​​nitro כחול tetrazolium (NBT), 100 מ"מ טריס HCl, pH 9.5, 100 מ"מ NaCl, ו 50 מ"מ MgCl 2 על תאים.
    10. התבונן בתאים תחת מיקרוסקופ עבור מכתים נכונה. כאשר אותות סגולים חזקים מופיעים גרגירים של hemocytes, להסיר את הפתרון המצע, ו להשרות שקופיות זכוכית במאגר המורכב 10 מ"מ טריס HCl, pH 8.5 ו 1 מ"מ EDTA. מכתים כ 5 - 10 דקות מומלץ.
  2. Immunostaining עם נוגדן אנטי GFP (אפשרות נוספת מכתים של hemocytes)
    1. Serial להשרות שקופיות זכוכית מתנול במשך 10 דקות, PBS המכיל 0.2% (V / V) טריטון X-100 במשך 10 דקות, ו PBS במשך 10 דקות.
    2. הר 20 μL של 5% (V / V) בסרום חזיר שלם PBS המכיל 0.2% (V / V) טריטון X-100 על תאים לחסימה. דגירה שקופיות בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות.
    3. הסר את הפתרון על שקופיות זכוכית, ואת הר 20 μL של נוגדנים נגד נוגדנים GFP (1% (V / V)) / PBS געל 0.2% (v / v) טריטון X-100 על תאים. דגירה שקופיות בטמפרטורת החדר למשך הלילה.
    4. להשרות שקופיות זכוכית PBS המכיל 0.2% (V / V) Triton X-100 במשך 10 דקות 5 פעמים.
    5. ספוג שקופיות זכוכית PBS במשך 10 דקות.
    6. הר 20 μL של הפוספטאז אלקליין שכותרתו נגד עכבר IgG (0.5% (V / V)) ב PBS המכיל 0.2% (V / V) טריטון X-100 ו 5% (V / V) סרום חזיר שלם על תאים בחדר טמפרטורה עבור 1 שעות.
    7. להשרות שקופיות זכוכית PBS המכיל 0.2% (V / V) Triton X-100 במשך 10 דקות 5 פעמים.
    8. להשרות שקופיות זכוכית במאגר המורכב 100 מ"מ טריס HCl, pH 9.5, 100 מ"מ NaCl, ו 50 מ"מ MgCl 2 במשך 10 דקות.
    9. הר הפתרון phosphatase המצע המכיל 0.23 מ"ג / מ"ל ​​BCIP, 0.35 מ"ג / מ"ל ​​NBT, 100 מ"מ טריס HCl, pH 9.5, 100 מ"מ NaCl, ו 50 מ"מ MgCl 2 על תאים.
    10. התבונן בתאים תחת מיקרוסקופ עבור מכתים נכונה. כאשר אותות סגולים מופיעים hemocytes שלם, להסיר את הפתרון המצע ולספוג שקופיות במאגר המורכבשל 10 מ"מ Tris-HCl, pH8.5 ו 1 מ"מ EDTA. מכתים כ 10 - 15 דקות מומלץ.

5. כתם תאים אפופטוטיים על ידי TUNEL

  1. לשטוף שקופיות זכוכית PBS במשך 5 דקות.
  2. חזור עם PBS חדש.
  3. הר חיץ איזון (ראה חומרים לוח) על תאים במשך 10 דקות.
  4. הסר את הפתרון משקופיות זכוכית, ואת הר 20 μL של פתרון TdT המכיל 5 μL של טרנזיט deoxynucleotidyl מסוף ו 15 μL של תגובה למאגר על תאים ב 37 מעלות צלזיוס למשך 1 שעות.
  5. הסר את הפתרון משקופיות זכוכית, ולספוג שקופיות במאגר המורכב של 0.5 מ"ל STOP / לשטוף חיץ ו 17 מ"ל של מים.
  6. משרים שקופיות PBS במשך 5 דקות 3 פעמים.
  7. הר 20 μL של אנטי Digoxigenin-peroxidase על תאים בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.
  8. לשטוף שקופיות זכוכית PBS במשך 5 דקות 4 פעמים.
  9. להשרות שקופיות זכוכית תמיסת המצע peroxidase בהיקף של 30 מ"ל של 50 מ"מ טריס HCl, pH7.5 מכיליםGa מלא spatula מיקרו של 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrichloride (DAB), ו 0.002% (v / v) H 2 O 2 במשך 30 s.
  10. חזור על שלב 5.9 עד תאים אפופטוטיים מוכתמים חום. השריה שקופיות זכוכית במים כדי לעצור את התגובה peroxidase.
  11. צרף תאים עם מים לתצפית.

6. למדוד את רמת phagocytosis של תאים אפופטוטיים

  1. לבחון דגימות תחת מיקרוסקופ אור על מנת להעריך את רמת phagocytosis. Count Crocemort חיובי תאים או תאים GFP חיובי כמו hemocytes, תאים TUNEL חיובי כמו תאים אפופטוטיים, ותאים חיוביים כפול כמו hemocytes phagocytosing.
  2. מדד phagocytic מוגדר כמספר תאים חיוביים כפול למספר הכולל של תאים חיוביים Croquemort או תאים חיוביים GFP. מומלץ כי יותר מ 300 hemocytes הם נצפו.

תוצאות

על מנת לבחון את phagocytosis של תאים אפופטוטיים, עוברים תסיסנית של שלב 16 ההתפתחותי נאספו והוכנו כמו תאים מפוזרים. Hemocytes, מקרופאגים תסיסנית , היו מוכתמים על ידי immunocytochemistry עבור סמן hemocyte "Croquemort" 17 , 22 באמצעות נוגד...

Discussion

אנו כאן תיאר assay phagocytosis באמצעות עוברים תסיסנית . על ידי שימוש בתאים עובריים מפוזרים למדוד phagocytosis כמותית, hemocytes, phagocytes מקצועי תסיסנית , הם immunostained עבור סמן hemocyte Croquemort או srpHemo מונע GFP, תאים אפופטוטיים מזוהים על ידי TUNEL בפרוטוקול זה. רמת phagocytosis מתבטא כמו אי?...

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

Acknowledgements

אנו מודים Kaz Kazaosa ו Akiko Shiratsuchi על עצתם.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
whole swine serumMP Biomedicals55993For bloking
Treff micro test tube(easy fit)  Dnase, Rnase free tube, 1.5 mLTreffLab96. 4625. 9. 01For  homogenization
pellet mixer  1.5 mLTreffLab96. 7339. 9. 03For  homogenization
CollagenaseSigma-AldrichC-0130For preparation of embryonic cells
TrypsinThermo Fisher SCIENTIFIC27250-018For preparation of embryonic cells
Kpl Anti-Rat IgG (H+L) Ab MSA, APKPL475-1612secondary antibody for
stainig hemocytes with an anti-Croquemort antibody
5-bromo-4-chloro-
3-indolyl-phosphate		Roche11383221001BCIP, For staining of hemocytes
nitro blue tetrazoliumRoche11383213001NBT, For staining of hemocytes
Anti-Croquemort antibodydescribed previously in Manaka et al., J. Biol. Chem., 279, 48466-48476
 Anti-GFP
from mouse IgG1κ (clones 7.1 and 13.1) 		Roche11814460001For staining of hemocytes
Goat Anti-Mouse IgG-AP ConjugateBio-Rad170-6520secondary antibody for stainig hemocytes with an anti-Croquemort antibody
Apop Tag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection KitMilliporeS7100For staining of apoptoitc cells. This kit includes Equilibration buffer, Reaction buffer, STOP/Wash buffer, TdT enzyme, and Anti-Digoxigenin-Peroxidase.
3,3'-diaminobenzidine
tetrahydrichloride		nacalai tesque11009-41DAB, For staining of apoptoitc cells
Table of Fly Strains
NameStock centerStock IDComments
w1118Control flies, described in Freeman et al., Neuron, 38, 567-580
drprΔ5drpr mutant, described in Freeman et al., Neuron, 38, 567-580
Itgbn2Itgbn mutant, described in Devenport et al., Development, 131, 5405-5415
srpHemoGAL4 UAS-EGFPdescribed in Brückner et al., Dev. Cell., 7, 73-84
UAS-drpr-IRVDRC4833-
UAS-Itgbn-IRNIG-fly1762R-1-

References

  1. Danial, N. N., Korsmeyer, S. J. Cell death: critical control points. Cell. 116 (2), 205-219 (2004).
  2. Vaux, D. L., Korsmeyer, S. J. Cell death in development. Cell. 96 (2), 245-254 (1999).
  3. Savill, J., Fadok, V. Corpse clearance defines the meaning of cell death. Nature. 407 (6805), 784-788 (2000).
  4. Lauber, K., Blumenthal, S. G., Waibel, M., Wesselborg, S. Clearance of apoptotic cells: getting rid of the corpses. Mol Cell. 14 (3), 277-287 (2004).
  5. Ravichandran, K. S., Lorenz, U. Engulfment of apoptotic cells: signals for a good meal. Nat Rev Immunol. 7 (12), 964-974 (2007).
  6. Ravichandran, K. S. Beginnings of a good apoptotic meal: the find-me and eat-me signaling pathways. Immunity. 35 (4), 445-455 (2011).
  7. Nakanishi, Y., Nagaosa, K., Shiratsuchi, A. Phagocytic removal of cells that have become unwanted: implications for animal development and tissue homeostasis. Dev Growth Differ. 53 (2), 149-160 (2011).
  8. Reddien, P. W., Horvitz, H. R. The engulfment process of programmed cell death in caenorhabditis elegans. Annu Rev Cell Dev Biol. 20, 193-221 (2004).
  9. Hedgecock, E. M., Sulston, J. E., Thomson, J. N. Mutations affecting programmed cell deaths in the nematode Caenorhabditis elegans. Science. 220 (4603), 1277-1279 (1983).
  10. Ellis, R. E., Jacobson, D. M., Horvitz, H. R. Genes required for the engulfment of cell corpses during programmed cell death in Caenorhabditis elegans. Genetics. 129 (1), 79-94 (1991).
  11. Gumienny, T. L. CED-12/ELMO, a novel member of the CrkII/Dock180/Rac pathway, is required for phagocytosis and cell migration. Cell. 107 (1), 27-41 (2001).
  12. Hsu, T. Y., Wu, Y. C. Engulfment of apoptotic cells in C. elegans is mediated by integrin alpha/SRC signaling. Curr Biol. 20 (6), 477-486 (2010).
  13. Hanayama, R. Identification of a factor that links apoptotic cells to phagocytes. Nature. 417 (6885), 182-187 (2002).
  14. Tepass, U., Fessler, L. I., Aziz, A., Hartenstein, V. Embryonic origin of hemocytes and their relationship to cell death in Drosophila. Development. 120 (7), 1829-1837 (1994).
  15. Gold, K. S., Bruckner, K. Macrophages and cellular immunity in Drosophila melanogaster. Semin Immunol. 27, 357-368 (2015).
  16. Abrams, J. M., White, K., Fessler, L. I., Steller, H. Programmed cell death during Drosophila embryogenesis. Development. 117 (1), 29-43 (1993).
  17. Franc, N. C., Heitzler, P., Ezekowitz, R. A., White, K. Requirement for croquemort in phagocytosis of apoptotic cells in Drosophila. Science. 284 (5422), 1991-1994 (1999).
  18. Mukae, N., Yokoyama, H., Yokokura, T., Sakoyama, Y., Nagata, S. Activation of the innate immunity in Drosophila by endogenous chromosomal DNA that escaped apoptotic degradation. Genes Dev. 16 (20), 2662-2671 (2002).
  19. Manaka, J. Draper-mediated and phosphatidylserine-independent phagocytosis of apoptotic cells by Drosophila hemocytes/macrophages. J Biol Chem. 279 (46), 48466-48476 (2004).
  20. Roberts, D. B. . Drosophila: A Practical Approach. , 3868-3878 (1998).
  21. Kuraishi, T., et al. Pretaporter, a Drosophila protein serving as a ligand for Draper in the phagocytosis of apoptotic cells. Embo j. 28 (24), 3868-3878 (2009).
  22. Franc, N. C., Dimarcq, J. L., Lagueux, M., Hoffmann, J., Ezekowitz, R. A. Croquemort, a novel Drosophila hemocyte/macrophage receptor that recognizes apoptotic cells. Immunity. 4 (5), 431-443 (1996).
  23. Kuraishi, T. Identification of calreticulin as a marker for phagocytosis of apoptotic cells in Drosophila. Exp Cell Res. 313 (3), 500-510 (2007).
  24. Nagaosa, K. Integrin betanu-mediated phagocytosis of apoptotic cells in Drosophila embryos. J Biol Chem. 286 (29), 25770-25777 (2011).
  25. Nonaka, S., Nagaosa, K., Mori, T., Shiratsuchi, A., Nakanishi, Y. Integrin alphaPS3/betanu-mediated phagocytosis of apoptotic cells and bacteria in Drosophila. J Biol Chem. 288 (15), 10374-10380 (2013).
  26. Fujita, Y., Nagaosa, K., Shiratsuchi, A., Nakanishi, Y. Role of NPxY motif in Draper-mediated apoptotic cell clearance in Drosophila. Drug Discov Ther. 6 (6), 291-297 (2012).
  27. Bruckner, K., et al. The PDGF/VEGF receptor controls blood cell survival in Drosophila. Dev Cell. 7 (1), 73-84 (2004).
  28. Nonaka, S., et al. Signaling Pathway for Phagocyte Priming upon Encounter with Apoptotic Cells. J Biol Chem. 292 (19), 8059-8072 (2017).
  29. Hanayama, R. Autoimmune disease and impaired uptake of apoptotic cells in MFG-E8-deficient mice. Science. 304 (5674), 1147-1150 (2004).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

126phagocytosisIn vivo

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved