A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
קומפקטי פעמו לייזר דיודה מבוססי שולחן העבודה המבוסס פוטואקוסטית טומוגרפיה (PLD-PAT) מערכת מוכיחה עבור דינמי במהירות גבוהה ב-vivo הדמיה של בעלי חיים קטנים קליפת הגוף.
פוטואקוסטית (PA) טומוגרפיה (PAT) הדמיה היא הדמיה ביורפואית המתעוררים שימושי ביישומים שונים פרה וקליניים. מותאם אישית מערך עגול טבעת מבוססת מערכות מבוססות ומגושם קונבנציונאלי: YAG/פופו לייזרים לעכב את התרגום של מערכת PAT למרפאות. אולטרה קומפקטי דיודות לייזר פעמו (PLDs) נמצאים כעת בשימוש כמקור חלופי של עירור הקרוב אינפרא אדום עבור הדמיה של הרשות הפלסטינית. דינמי במהירות גבוהה ב vivo הדמיה הפגינו באמצעות מערכת קומפקטית PLD מבוססי שולחן העבודה PAT (PLD-פט). הפרוטוקול הנסיוני דמיינו באמצעות מערכת PLD-PAT שולחן העבודה מסופק בעבודה זו עבור דינמי הדמיה vivo המוח. הפרוטוקול מתאר את התצורה של שולחן העבודה PLD-PAT, הכנת בעל חיים עבור דימות כלי דם במוח, והליך הדמיה דינמית של indocyanine ירוק (ICG) ספיגת צבען תהליך הסיווג בקליפת המוח של חולדה.
טומוגרפיה ממוחשבת של פוטואקוסטית (ברית/פט) היא מודאליות מבטיחה לא פולשנית הדמיה ביו-רפואית המשלבת ניגודיות אופטית עשירה עם רזולוציה גבוהה ultrasond1,2,3,4, 5. כאשר ננו השנייה פעמו לייזר מרבצי אנרגיה על האור סופג כרומטוes נוכח בתוך כל רקמה ביולוגית, הטמפרטורה המקומית מגביר הרחבה התרמואלסטית והתכווצות של הרקמה, וכתוצאה מכך הדור של גלי לחץ. גלי הלחץ הללו מוכרים כגלי אולטרסאונד או כגלים פוטואקוסטיים (PA), אשר ניתן לאתרם על-ידי התמרה אולטרסאונד סביב המדגם. אותות pa שאותרו משוחזרים באמצעות אלגוריתמים שחזור שונים6,7,8,9 כדי ליצור תמונות מוצלבות החוצה. הדמיה של הרשות הפלסטינית מספקת מידע מבני ופונקציונלי מאיברים מאקרוסקופיים ועד לאורגלים מיקרוסקופיים עקב התלות באורך הגל של כרומטוגניים כרומניים המצויים בתוך הגוף10. פט הדמיה כבר בשימוש בהצלחה עבור זיהוי סרטן השד1, לימפה סנטינל צומת הדמיה11, מיפוי של אוקסיהמוגלובין (HbO2), המוגלובין (hbr), ריכוז המוגלובין הכולל (HBR), רווית חמצן (SO 2היכל ה. מיכל בן 12 , 13, הגידול אנגיוגנזה14, גוף קטן חיה הדמיה כולה15, ויישומים אחרים.
Nd: לייזרים YAG/פופו הם מקורות עירור קונבנציונאלי עבור מערכות PAT הדור הראשון, כי הם בשימוש נרחב בקהילה פוטואקוסטית עבור הדמיה בעלי חיים קטנים הדמיה רקמות עמוק16. לייזרים אלה לספק ~ 100 mJ פולסים אנרגיה בשיעורי חזרה נמוכה של ~ 10-100 Hz. פט הדמיה מערכות באמצעות אלה לייזרים יקרים ומגושם אינם מתאימים הדמיה במהירות גבוהה עם מתתמרים חד רכיבי אולטרסאונד (SUTs), בשל קצב החזרה מוגבלת הדופק. זה מעכב ניטור בזמן אמת של שינויים פיזיולוגיים המתרחשים במהירויות גבוהות בתוך החיה. באמצעות מערך מבוסס-מדידה כמו ליניארי, חצי עגול, עגול, מערכים נפחי עם Nd: לייזר YAG עירור, מהירות גבוהה הדמיה אפשרית. עם זאת, מפרידי המערך האלה יקרים ומספקים רגישויות נמוכות יותר בהשוואה ל-SUTs; עם זאת, מהירות ההדמיה מוגבלת על-ידי קצב החזרה הנמוך של הלייזר. מערכות הסכם חד-הורית משוכלל ביותר עם מערך מותאם אישית של טבעת מלאה להשיג את נתוני הרשות הפלסטינית ב-50 Hz שיעורי מסגרת17. אלה מערכות מגבירי הצורך מורכבים back-end מקבל אלקטרוניקה מגברי האות, מה שהופך את המערכת הכוללת יקר יותר וקשה לשימוש קליני.
גודל קומפקטי שלהם, דרישות עלות נמוכה יותר, קצב החזרה דופק גבוה (סדר KHz) לעשות דיודות לייזר פעמו (PLDs) מבטיח יותר עבור הדמיה בזמן אמת. בשל יתרונות אלה, PLDs משמשים באופן פעיל כמקור עירור חלופי במערכות הדור השני פט. Pld מבוססי מערכות PAT הוכחו בהצלחה עבור הדמיה שיעור גבוהה מסגרת באמצעות מערך המתמרים18, רקמות עמוק הדמיה המוח19,20,21, אבחון מחלות לב וכלי דם22 ו ראומטולוגיה אבחון23. כמו SUTs הם רגישים מאוד וזול פחות לעומת מערך הצירים, הם עדיין משמשים בהרחבה עבור הדמיה PAT. סיבים מבוססי מערכת PLD הוכחו עבור הדמיה פנטום24. המערכת הניידת PLD-PAT הוכח בעבר על ידי טעינת PLD בתוך הסורק PAT25. עם סורק מעגלי SUT אחד, הדמיה פנטום בוצעה במהלך 3 s זמן הסריקה, ו ב vivo rat הדמיה המוח בוצעה במהלך תקופה של 5 באמצעות זה PLD-PAT מערכת19.
יתר על כן, שיפורים נעשו זה pld-PAT מערכת כדי להפוך אותו לקומפקטי יותר ליצור מודל שולחן העבודה באמצעות שמונה מחזיר אקוסטי מבוסס רכיב יחיד מערכות אולטרסאונד (sutrs)26,27. כאן, SUTs הוצבו אנכית במקום כיוון אופקי בעזרת מחזיר אור אקוסטית 90° 28. מערכת זו יכולה להיות מועסק עבור זמני סריקה של עד 0.5 s ו-~ 3 ס מ עמוק הדמיה רקמות ובvivo קטן בעלי חיים במוח הדמיה. בעבודה זו, שולחן העבודה PLD-PAT מערכת משמש כדי לספק את ההדגמה החזותית של ניסויים עבור הדמיה המוח vivo בבעלי חיים קטנים עבור ויזואליזציה דינמית של ספיגת ותהליך הסיווג של מינהל המזון והתרופות (FDA)-אושרה indocyanine ירוק (ICG) לצבוע במוח חולדה.
כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו על פי ההנחיות והתקנות שאושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים והשתמש בוועדה של Nanyang באוניברסיטה הטכנולוגית, סינגפור (פרוטוקול בעלי חיים מספר ARF-SBS/NIE-A0331).
1. תאור המערכת
2. הכנת בעלי חיים לדימות מוח חולדה
הערה: חולדות נקבה בריאים (ראה טבלת חומרים) שימשו כדי להדגים את שולחן העבודה המתואר לעיל pld-PAT מערכת הדמיה של בעלי חיים בקליפת הגוף הקטנה.
3. דינמי הדמיה vivo של תהליך ספיגת והסיווג של ICG במוח חולדה
4.
הערה: 1.25 מ ג של אבקת ICG היה שוקל באמצעות מכונת מיקרו שקילה מעורבב עם 5 מ ל של מים מזוקקים כדי להשיג ריכוז של 323 μM עבור פתרון ICG.
5. המשך
הערה: A-lines שנרכש במהלך זמן סריקה של 0.5 s משמשים להפקת תמונה חוצת-חתך אחת. יש פער זמן של ~ 0.4 – 0.6 s בין כל סריקה.
איור 1: סכמטית של מערכת PLD-PAT של שולחן העבודה. (A) סכמטי של שולחן העבודה pld-פט להגדיר. PLD: דיודות לייזר פעמו, OD: מפזר אופטי, SUTR: מכשיר מחזיר אקוסטי מבוסס חד אלמנט אולטרסאונד מתמר, AM: מכונת הרדמה, CSP: צלחת סריקה מעגלית, SM: מנוע stepper, LDU: יחידת נהיגה בלייזר, AMP: מגבר, DAQ: כרטיס רכישת נתונים. (ב) הסדר מעגלי של שמונה שרתים מסביב למרכז הסריקה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
הפוטנציאל של שולחן העבודה המתואר PLD-PAT מערכת דינמית בדימות המוח vivo כבר לראווה בפרוטוקול זה עם התוצאות המתאימות. יכולת הדמיה במהירות גבוהה של שולחן העבודה PLD-PAT מערכת הפגינו על ידי ביצוע הדמיה vivo המוח של חולדות נקבה בריאים. אותות הרשות נאספו באמצעות שמונה SUTRs מסתובבת 360 ° ו 45 ...
עבודה זו מציגה פרוטוקול להשתמש PLD שולחן העבודה מערכת לניהול ניסויים על בעלי חיים קטנים כמו חולדות עבור vivo המוח הדמיה דינמי מהיר ספיגת ותהליך הסיווג של סוכני ניגוד כמו ICG. מגושם, יקר מערכות פופו-PAT להימשך מספר דקות (2-5 דקות) כדי לרכוש החתך אחד בתמונה vivo. קומפקטי, בעלות נמוכה, הדור הראשון ניידים ...
למחברים אין אינטרסים פיננסיים רלוונטיים או קונפליקטים פוטנציאליים של עניין לגלות.
המחקר נתמך על ידי המועצה הלאומית לחקר הרפואה של משרד הבריאות של סינגפור (NMRC/OFIRG/0005/2016: M4062012). המחברים רוצים להודות למר צ'או וואי הואנג. לתמיכה בחנות המכונות
Name | Company | Catalog Number | Comments |
12 V power supply | Voltcraft | PPS-11810 | To supply operating voltage for PLD |
Acoustic reflector | Olympus | F102 | 45 degree reflector augmented to the ultrasound transducer |
Acrylic water tank | NTU workshop | Custom-made | It is used to hold water that acts as an acoustic coupling medium between animal brain and detector |
Anesthetic Machine | Medical plus pte ltd | Non-Rebreathing Anaesthesia machine with oxygen concentrator. | Supplies oxygen and isoflurane to animal |
Animal distributor | In Vivos Pte Ltd, Singapore | Animal distributor that supplies small animals for research purpose | |
Animal holder | NTU workshop | Custom-made | Used for holding animal on its abdomen |
Breathing mask | NTU workshop | Custom-made | Used along with animal holder to supply anesthesia mixture to the animal |
Circular Scanner | NTU workshop | Custom-made | Scanner is made out of aluminum |
DAQ (Data acquisition) Card | Spectrum | M2i.4932-exp | 16 bit, 30 Ms/s, 8 channels, 1 Gs, PCIe |
Data acqusition software | National Instruments Corporation,Austin,TX,USA) | NI LabVIEW 2015 SP1 (32 bit) | LabVIEW based program developed in our laboratory for controlling the stepper motor and acquring the PA singnals from the detector |
Data processing software | Matlab (Mathworks, Natick, MA, USA) | Matlab R2015b | Matlab code developed in our laboratory for reconstructing cross-sectional PA images |
Function generator | RIGOL | DG1022 | To change the repetition rate of the PLD. It will provide TTL signal to synchronize the DAQ with the laser excitation. |
Low noise signal amplifier | Genetron | Custom-made using Mini-circuits, ZFL-500LN-BNC | To receive, and amplify the PA signal from SUTR. Its gain is 24 dB. |
Optical diffuser | Thorlabs | DG-120 | Used to to make the laser beam homogeneous |
Pulsed laser diode | Quantel, France | QD-Q1924-ILO-WATER | It is the excitation laser source with specifications of 816 nm wavelength, 3.4 mJ per pulse energy, 107 ns pulse width, 2 KHz maximum pulse repitition rate, dimensions : 13.0 x 7.6 x 5.0 cm |
Rats | In Vivos Pte Ltd, Singapore | NTac:SD, Sprague Dawley / SD | Female, weight 100±10g, strain of rats: Sprague Dawley, age: 4-5 weeks |
Stepper motor with gearbox | LIN Engineering (Servo Dynamics) | Motor: CO-5718L-01P-RO, Gearbox: DPL64/1; Power supply PW-100-24 | To move the detector holder in a circular geometry. Torque: 2.08 N-m, Rotor inertia: 2.6 kg-cm2 |
Ultrasound gel | Progress/parker acquasonic gel | PA-GEL-CLEA-5000 | Clear ultrasound gel |
Ultrasound Transducer | Olympus | V309-SU/ U8423013 | Ultrasonic sensors used for photoacoustic detection. Central freqency 5 MHz, 0.5 in |
Variable high voltage power supply | Elektro-Automatik | EA-PS 8160-04 T | To change the laser output power |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved