אוסף של ביופסיות שריר השלד מהתאי העליון של השרירים האנושיים Tibialis הקדמי להערכה מכנית

Summary

דו"ח טכני זה מתאר וריאציה של טכניקת Bergström שונה לביופסיה של השרירים tibialis הקדמי המגביל את נזק סיבים.

Abstract

המאפיינים המכניים של סיבי השלד מתכווץ הם אינדיקטורים מכריעים של בריאות השריר הכוללת, פונקציה, וביצועים. ביופסיות שריר השלד האנושי נאספות לעתים קרובות עבור מאמצים אלה. עם זאת, תיאורים טכניים מעטים יחסית של הליכי ביופסיה, מחוץ לחלל העצום הידוע בדרך כלל, זמינים. למרות טכניקות ביופסיה מותאמים לעתים קרובות כדי להתאים את המאפיינים של כל שריר תחת מחקר, דוחות טכניים מעטים לשתף שינויים אלה לקהילה הגדולה. לכן, רקמת שריר ממשתתפים אנושיים מבוזבזת לעתים קרובות כמו המפעיל ממציא מחדש את הגלגל. הרחבת החומר הזמין על ביופסיות ממגוון רחב של שרירים יכול להפחית את האירוע של ביופסיות כושלות. דו"ח טכני זה מתאר וריאציה של טכניקת Bergström שונה על הקדמי השרירים tibialis המגביל את נזק סיבים ומספק אורכי סיבים מתאימים להערכה מכנית. הניתוח הוא הליך אשפוז שניתן להשלים כך גם בעוד שעה. תקופת ההחלמה של הליך זה היא מיידית לפעילות קלה (כלומר, הליכה), עד שלושה ימים לצורך חידוש פעילות גופנית רגילה, וכשבוע לטיפול בפצעים. הרקמה שחולצו יכולה לשמש לניסויים בכוח מכני וכאן אנו מציגים נתוני הפעלה מייצגים. פרוטוקול זה מתאים לרוב מטרות האיסוף, הניתן להתאמה פוטנציאלית לשרירי השלד האחרים, ועשוי להיות משופר על-ידי שינויים במחט האיסוף.

Introduction

המחקר של פיזיולוגיה שריר אנושי למטרות קליניות או מחקר לעתים קרובות דורש ביופסיות שרירים. לדוגמה, אתגר מרכזי בפיזיולוגיה שרירים אנושיים וביומכניקה הוא להבחין ולהבין את ההתאמות השונות של ביצועי שרירים להתאמן. התאמות ביצועים אינן כוללות רק התאמות מבניות (למשל, שינויים בחלבונים מתכוובים, ארכיטקטורת שרירים) אלא^{גם כוללים התאמות עצביות 1}, שקשה מאוד, אם לא בלתי אפשרי, להעריך בנפרד בעת בדיקה ללא פגע בשרירים האנושיים situ. ניסויים ברמת הסיבים מסירים רכיבים אלה בסדר גבוה יותר ומאפשרים הערכה ישירה יותר של התכווצות שרירים ותוכלים לאסוף אותם באמצעות טכניקות ביופסיה. ביופסיות שרירים נאספו מאז לפחות 1868². כיום, הטכניקה הדומיננטית לאיסוף ביופסיות שרירים היא טכניקת Bergström^{שונה 3,4,}5 ,^{למרות טכניקות}אחרות זמינות כולל השימוש של Weil-Blakesley conchotome⁶ או מה שנקרא^{מחט עדינה 7,8}. כל הטכניקות האלה משתמשות בכלים מיוחדים כמו מחט שנועדו לעבור לשריר ולחתוך חתיכת רקמה. באופן ספציפי, טכניקת Bergström שונה משתמשת מחט שונה גדול (5 מ"מ גודל מחט כאן; איור 1) שיש לו חלון קרוב לקצה המחט וtrocar פנימי קטן יותר שזז למעלה ומטה המחט, חיתוך השריר בעת מעבר על חלון המחט. בתוך הטרוקאר הזה הוא נגח שזז למעלה ומטה הפיר של trocar ודוחף את הביופסיה לכיוון חלון המחט. כדי למשוך את השריר לתוך חלון המחט, צינור יניקה מחובר, אשר שואב אוויר מהמחט וממשוך את השריר לתוך חלון המחט באמצעות לחץ שלילי.

ביופסיות שריר נרכשות לעתים קרובות כדי ללמוד שינויים בתוכן חלבון, ביטוי גנים, או מורפולוגיה הנגרמת על ידי מחלה או בתגובה^{לתוכנית פעילות גופנית 1,9,10,11}. שימוש קריטי נוסף עבור ביופסיות שרירים הוא ניסויים מכניים כגון מדידה של כוח כיווץ סיבים, נוקשות סיבי שריר, ומאפייני שריר תלויי היסטוריה^{12,13,14,15,16}. סיבים בודדים או סיבים מכניקה נמדדים על ידי חיבור סיבים בין מנוע אורך ומתמר כוח על אסדות מיוחדות לשלוט אורך סיבים ובו זמנית מדידת כוח. על ידי חריצות (למשל, skinning) סיבים, קרום סרקומה הופך חדיר כימיקלים בתמיסת האמבטיה, המאפשר שליטה הפעלה על ידי ריכוז סידן משתנה. יתר על כן, ההשפעה של תכונות כיווץ על כימיקלים / תרופות / חלבונים אחרים ניתן בקלות להעריך על ידי הוספת reagent המדובר לפתרון האמבטיה. עם זאת, בעוד טכניקה זו משמשת מאוד במודלים אחרים של בעלי חיים, באופן ניכר פחות מחקרים ערכו בדיקות מכניות על סיבים עור^{ים 17,18,19}. אחת הסיבות לכך היא כי כלים ביופסיה ונהלים נועדו להסיר כמה שיותר רקמת שריר עם פחות התייחסות לרמה של נזק מבני שנגרם במהלך הפקת רקמות. אכן, פרוטוקול ביופסיה האחרונה מציע לנהוג מחט הביופסיה לתוך השריר ולאסוף 2-4 נתחים של שריר³. התהליך עצמו אינו פוגע בחומר ה-DNA או החלבון, אך לעתים קרובות הורס סיבים ומבנים סרקומריים באופן כזה שהפעלת סיבי שריר הופכת לבלתי יציבה או בלתי אפשרית. יתר על כן, האורך היחסי של סיבים בתוך הביופסיה הם בדרך כלל קצרים (<2 מ"מ) ולא מטופלים בקלות לבדיקות מכניות. לבדיקות מכניות, הסיבים האידיאליים ארוכים (3-5 מ"מ) ולא פגומים מבחינה מבנית.

טכניקות מתקדמות יותר להפקת רקמות יכולות לשמש להגבלת נזק לסיבים. לדוגמה, קבוצה^{אחת 20} ניצלה את "ניתוחים פתוחים" שתוכננו קודם לכן של זרועות (למשל, תיקון שבר עצם), שבו השרירים נחשפו באופן מלא ומנתח הצליח לדמיין את מבנה השריר ולנתח בזהירות דגימות גדולות יחסית ולא ניזוקו מבחינה מבנית של רקמת שריר (15 מ"מ x 5 מ"מ x 5 מ"מ). טכניקת "ביופסיה פתוחה" זו מועדפת כאשר המשתתפים עוברים הליך שתוכנן מראש, ולכן מגבילה את מאגר המשתתפים הפוטנציאליים, במיוחד עבור מבוגרים בריאים, שבהם לא היו מתרחשים ניתוחים בדרך אחרת. לכן, ביופסיות רבות שנערכו למטרות מחקר נעשות כהליך אשפוז ואתר החתך נשמר קטן ככל האפשר כדי להגביל את הסיכון לזיהום, הצטלקות, וזמן ריפוי. לכן, רוב הביופסיות נאספות באופן עיוור (כלומר, המפעיל אינו יכול לראות את מחט האיסוף כפי שהוא עובר דרך fascia לתוך השריר). זה מרמז על כך שאיכות הביופסיה מבוססת כמעט לחלוטין על המיומנות והניסיון של המפעיל. לכל שריר יש קשיים משלו בעת איסוף רקמות, כגון סיכונים להפר את העצבים וכלי הדם, בחירת עומק אוסף אידיאלי ומיקום, ולהחליט על מיקום הגוף המתאים כדי לשמור על השריר רפוי ככל האפשר. למרבה הצער, רוב הכישורים ספציפיים לשרירים אינם כתובים ולכן כל רופא חייב "להמציא מחדש את הגלגל" בעת ביצוע ביופסיות על השרירים החדשים להם. חוסר ניסיון זה מוביל בדרך כלל מספר אוספים באיכות נמוכה עד הרופא מזהה את שיטות העבודה הטובות ביותר עבור ביופסיות על שריר זה. רופאים מתחילים לעתים קרובות ללמוד את המיומנות באמצעות שיחות עם עמיתיהם המנוסים יותר, אבל יחסית מעט אינפורמטיבי וטקסטים ביקורת עמיתים קיימים בנושא, במיוחד עבור שרירים שאינם משמשים באופן מסורתי עבור איסוף ביופסיה. אם נשקול את המידע הנ"ל, יחד עם הקושי לגייס מתנדבים אנושיים לביופסיות, ברור שיש צורך במידע לימודי נוסף שממקסם את סיכויי ההצלחה של כל משתתף.

לכן, מטרת מאמר זה הייתה להציג טכניקת ביופסיה שריר המספק פרוטוקולים לאוסף מוצלח של ביופסיות שרירים עם ארוך, שברי סיבים לא ניזמים לבדיקות מכניות. ביופסיות שרירים אנושיות מתבצעות בדרך כלל על, ואת החלק הארי של חומר אימון ביופסיה הוא על, השרירים vastus lateralis. גודל השריר הגדול יחסית שלו ומיקומו הפשטי יחסית לעור מאפשר איסוף של רקמת שריר נאותה, תוך מזעור אי נוחות המטופל^{וטראומה פיזית 1,21}. עם זאת, יש כמה מגבלות לשימוש בvass lateralis ללימודי אימון אורכי. לדוגמה, במהלך פרוטוקולים ניסיוניים הכוללים תוכנית אימונים, על המשתתפים להימנע מהכשרה נוספת מחוץ למחקר לתקופה המשתרעת לעתים קרובות על פני 2-6 חודשים. עבור ספורטאים, זה לעתים קרובות לא אפשרי, כמו lateralis vastus הוא בדרך כלל מאומן במהלך תרגילים טיפוסיים (למשל, סקוואט, קופץ), או משמש בדרך כלל עבור הספורט (למשל, ריצה, רכיבה על אופניים). חוויות אימון נפרדות אלה הרחק ממטרת המחקר יכולות לגרום להתאמות שרירים שמשנות את מכניקת השרירים, הארכיטקטורה והפיזיולוגיה באופן כזה שקשה או בלתי אפשרי לדעת את ההשפעה האמיתית של הפרוטוקול הניסיוני של המחקר על תכונות שרירים. עבור סוגים אלה של מחקרים, זה יהיה אידיאלי לבחור שריר היעד כי הוא לעתים קרובות לא המוקד של גדודי אימון. השרירים השוקיאליים הקדמיים (ת"א) הוא שריר יעד אידיאלי העונה על הדרישות לעיל. בנוסף, ניתן למקד התערבויות אימון כלפי ת"א באמצעות גישות הניתנות לשליטה, כגון שימוש בדינומטר. אין כמעט חומר אימון הנוגע לביופסיה של השריר של ת"א. לכן, פיתחנו פרוטוקול שונה לאיסוף ביופסיות שרירים שלא ניזתם באופן יחסי מת"א.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

הערה: להלן, אנו מתארים פרוטוקול לקצירת סיבים לא ניזמים מכנית מת"א של מתנדבים שנרשמו למחקר מתמשך נפרד. פרוטוקול זה דומה לזה שתואר על ידי Shanely et al.³, שתיארו את טכניקת Bergström שונה בvasstrus lateralis. המידע המוצג כאן כבר מעודן על ידי קבוצת המחקר שלנו, אבל לא יכול להיות אידיאלי עבור כל קבוצות המעבדה או הגדרות ארגוניות. אנו נותנים רק הנחיות, ולהציע בתוקף כי מעבדות חדשות אוסף ביופסיה להתייעץ עם קבוצות מעבדה מנוסות לפני ניסיון כל ניסויים בבני אדם.

כל המחקרים שנערכו בנייר זה אושרו על ידי ועדת האתיקה של הפקולטה למדעי הספורט באוניברסיטת רוהר בוכום. המשתתפים נתנו הסכמה מושכלת בכתב חינם לפני השתתפות במחקר.

1. הכנה ניסיונית

1. הערכת קריטריונים של הדרה בעת נטילת ההיסטוריה הרפואית המפורטת של המשתתף במהלך הייעוץ של המשתתף (ראה להלן).
   1. לא לכלול את המשתתפים אם הם סבלו מפציעה בשריר היעד במהלך 6 השבועות שקדמו לביופסיה. ודא המשתתפים הם בדרך כלל בריאים, מודעים ללא הפרעות שריר או קרישה, והם לא נוטלים כרגע תרופות הגורמים לדילול דם (למשל, אספירין).
      הערה: כאן בחרנו משתתפים שהיו פעילים במתינות והורו להם להימנע מתרגילי רגליים אינטנסיביים או לא רגילים לפחות 3 ימים לפני הביופסיה. עם זאת, עבור שאלות מחקר אחרות, קריטריונים אלה עשויים להשתנות.
2. לדבוק עיקור וטכניקות aseptic, כפי מוסדר על ידי החוק הגרמני ופרקטיקה נפוצה בפיקוח על ידי^{רופא הקבוצה 22,23}. הליך זה יכול לנוהל לעתים קרובות כהליך "ליד המיטה" או בסוויטה כירורגית אשפוז. יש להתייעץ עם הגוף הרגולטורי המקומי לקבלת הדרכה.
3. לחבר את צוות הביופסיה. אנו מציעים כי צוות הביופסיה כולל 4 אנשים. רופא (או אדם מיומן באוסף ביופסיה), עוזר רפואי אחד שעובד עם הרופא, עוזר אחד שמנטר ומתקשר עם המשתתף, ועוזר אחד שמטפל בביופסיית השריר מיד לאחר החילוץ. עם מספרים אלה, טיפול מהיר בחולים יכול להינתן אם מתרחש מצב חירום רפואי במהלך ההליך. אם נוח עם ההליך, אז הצוות יכול להיות עשוי משני אנשים בלבד: הרופא והעוזרת הרפואית, אשר יחד לקחת על טיפול בחולים ועיבוד רקמות בו זמנית.
4. רוצה שהמשתתף ייפגש עם ההונוה/רופא של הפרוייקט כדי לסקור, לדון ולחתום על טופס הסכמת המשתמש. יש לי לקחת היסטוריה רפואית מפורטת (אלרגיות, פציעות או ניתוחים לגפה התחתונה ולת"א) ואל תכלול את המשתתף אם הוא עומד באחד מקריטריוני ההחרגה. לדון ביסודיות בהיגיינת התאוששות וחתך.
   1. הסבירו למשתתף כי הם יהיו כואבים אך יוכלו להסתובב מיד לאחר ההליך; הליכה במורד מדרונות או מדרגות היא לעתים קרובות לא נוח במשך 48 השעות הראשונות, עם פעילות מלאה בדרך כלל חוזר אחרי 72 שעות. לבסוף, להסביר כי, כדי להגביל את הזיהום ושפשופים מכניים, אתר החתך צריך להישאר חבוש לפחות 1 שבוע ותשמור נקי.

2. לדמיין את השוקה הקדמית עם אולטרסאונד במצב B

1. הנחה את המשתתף לשכב בתנוחת עליונות נוחה ולהרגיע את שרירי הרגליים ככל האפשר. השתמש במכשיר מותאם אישית (ראה להלן) או שהעוזר יחזיק את הקרסול בתנוחה מעט דורסיפלקסית כדי לחקות את מה שנעשה במהלך הביופסיה.
   הערה: חשוב כי המשתתף יש ת"א רגוע, כך שהוא משכפל את מאפייני השריר במהלך ההליך. במהלך הבדיקה, בקשו מהמשתתפים להתכווץ ולהריע את השריר כך שניתן יהיה ל ציין את השינויים בארכיטקטורת השרירים.
2. השתמשו בבדיקה אולטרסאונד כדי לדמיין את התאים שטחיים ועמוקים של ת"א, כדי לסקור את ארכיטקטורת השריר ולהחליט על עומק הכניסה וזווית המחט של התקפה (איור 2A-B). ציין ציוני דרך על העור.
   1. לתת תשומת לב מיוחדת לבחירה של אזור היעד הימנעות ורידים ראשיים, עורקים, או עצבים.
   2. להעריך את חתך הרוחב של השריר, במטרה לזהות את הפנורוזיס המרכזי בתוך בטן השריר של ת"א (כשליש מהרגל, דיסטל עד הברך, ו-2 ס"מ לרוחב של ציצהשל השוקה) (איור 2B). להקליט את המיקום ואת העומק של aponeurosis המרכזי (בדרך כלל 1.5-3 ס"מ) כך שניתן לנקוט טיפול כדי לא לנהוג את האוסף (Bergström) מחט בעבר נקודה זו.
   3. מקם את גשושית אולטרסאונד בכיוון פרוקסימלי-דיסטל מעל מיקום היעד ולדמיין את הפניה fascicle ועובי שריר(איור 2A). השתמש במידע זה כדי לסייע בהצלחה לנהוג (עיוור) מחט האוסף לתוך בטן השריר. שמור תמונות של אתר היעד בשני המטוסים לעיון עתידי במהלך ההליך הכירורגי.
3. עם מידע זה, צור תוכנית לתנועת מחט לכיוון אזור היעד.
   1. מתכנן להפוך את החתך 1-3 ס"מ distal אזור ביופסיה היעד. לאחר המחט מועברת לתוך השריר, לסובב את המחט לזווית ~ 45% לעור לאורך הציר הארוך של האיבר, ולאחר מכן מונע פרוקסימלית לכיוון אזור הביופסיה. אסטרטגיה זו מגבילה את הסיכוי לנהוג את המחט לתוך aponeurosis המרכזי, אם המחט נדחפת קשה מדי. יתר על כן, המחט יכולה להיות מונעת באופן לא יציב או פרוקסימטלי, בהתאם לידיים של מפעיל המחט.

3. הליך ביופסיה

1. הנחה את המשתתף להניח על שולחן הניתוחים ולהניח את שרירי הרגליים. ודא שקו הראייה של המשתתף באתר הביופסיה חסום על ידי וילון.
   1. הסר מתח פסיבי מבטן השריר על-ידי הצבת איבר המשתתף במכשיר המתקן את הקרסול לתנוחה מעט דורסיפלקסית (0-5° מנייטרלי; איור 3). שאל את המטופל אם הם עדיין יכולים להרגיע את השריר שלהם, כמו יותר מדי dorsiflexion עלול לעשות את זה קשה להירגע.
      הערה: מצאנו כי איסוף ביופסיות מכף רגל דורסיפלקסית, לא יותר מ-5° של נייטרלי (כלומר, סוליית כף הרגל בניצב לשוק) מייצר ביופסיות עקביות וגדולות יותר מזוויות קרסול מכופפות יותר. ההתקן ששומר על הקרסול הוא מכשיר מותאם אישית. עם זאת, כל מספר של (זול) התקנים יכול להיות מפוברק שעדיין לייצר את התוצאה הרצויה.
2. לגלח, לנקות ולחטא את אזור החתך שנבחר, לפי שיטות עבודה סטנדרטיות²⁴.
   הערה: האזור ה"נקי" של המשתתף הוא כ-20 ס"מ פרוקסימלי-דיסטל ו-10 ס"מ-רוחב של אתר החתך המוצע. עם זאת, יש להתייעץ תמיד עם התקנות של המוסד ו/או הלאומי (אם בכלל) בנושא זה. פרוטוקול החיטוי כולל קרצוף העור נקי ולאחר מכן חיטוי ארבע פעמים עם שימוש ליברלי בתרסיס חיטוי ברמה רפואית. אם המשתתף עוזב את הטבלה מסיבה כלשהי, יש להפעיל מחדש את פרוטוקול החיטוי.
3. לתת הזרקה על-פשיסטית של 1.5 סמ"ק של 2% Xylocitin עם אפינפרין באתר הביופסיה, אשר מתפקד כמרדים מקומי ו- vasoconstrictor. המתן לזמן ההשפעה המוקצב של ~ 20-30 דקות.
   הערה: תרופות אלה הן מיוטוקסיות ולכן אסור להזריק לתוך השריר, רק רק את הרקמה התת עורית. כתגובה להתכוונויות כלי הדם, האזור של אתר ההזרקה עשוי להפוך ללבן (בגווני עור בהירים יותר) או אפור (גווני עור כהים יותר).
4. אשר אפקט סמים עם זריקות עור וחטטנים עדינים עם אזמל סטרילי.
5. באתר הביופסיה שסומן קודם לכן, לעשות חתך פרוקסימלי-דיסטלי 1 ס"מ עם אזמל סטרילי שחותך את העור fascia, חושף את הבטן שריר. הקפד לחתוך את fascia באופן מלא כי המחט היא בוטה ולא יעבור דרך fascia.
6. לדחוף את מחט הביופסיה 0.5-1.0 ס"מ לתוך השריר עם אוריינטציהניצבת לעור (איור 2C, 2E).
   הערה: המפעיל ירגיש שינוי במתח הדרוש כדי להניע את המחט דרך סוגי הרקמות השונים. רקמת השומן קלה, fascia הוא הקשה ביותר, והשריר הוא באמצע (אבל יכול להיות משתנה, בהתבסס על המשתתף).
7. כוון את המחט למיקום של זווית של כ-45° לעור, לאורך הציר הארוךשל הרגל (איור 2D, 2F). לדחוף את המחט עוד 1-2 ס"מ לתוך השריר עד קצה המחט הוא במיקום היעד בתוך השריר.
   הערה: הרופא צריך לנצל את תמונות אולטרסאונד שמורות כדי להסביר וריאציה בודדת של ממדי שריר. בגלל החתך הוא רק גדול מספיק כדי להכניס את המחט, הרופא מניע את המחט עיוור דרך העור. יש "תחושה" שמפעיל הביופסיה מרוויח עם ניסיון. טירון חייב ללמוד את המיומנות ממפעיל ביופסיה מיומן (עוד על זה בדיון).
8. לחבר את מזרק 100 מ"ל וצינור מחט ביופסיה(איור 1G). להחיל יניקה על מחט Bergström על ידי משיכת הבוכנה של המזרק על ידי כ 15-20 מ"ל כדי לייצר לחץ שלילי במחט ומוצץ את רקמת השריר לתוך חלון המחט. לאחר מכן, לסלק את השריר על ידי דחיפה מהירה(es) של trocar מעל חלון המחט.
   הערה: לפני ובמהלך יניקה, זה לפעמים מועיל לשים לחץ קל על העור מיד מעל חלון המחט כדי לעזור לדחוף את השריר לתוך המחט.
9. בעדינות להסיר את המחט מהרגל, מסתובב לאט. צריכה להיות התנגדות קלה רק בעת חילוץ המחט. אם יש התנגדות נוספת, זה עשוי להצביע על חתך ביופסיה חלקית. זה קורה, להחזיר את הצורך למיקום היעד, ולפתות מחדש איסוף רקמות.
10. לדחוף את הרקמה לחוץ לכיוון חלון המחט באמצעות ramrod הפנימי.
11. בזהירות להסיר את הדגימה מהמחט.
    הערה: שקוע המחט לתוך פתרון איסוף (ראה סעיף הכנת סיבים) לעתים קרובות מפרק את הביופסיה מהמחט. בנוסף, המזרק יכול לשמש כדי לנהוג אוויר דרך המחט ולדחוף את המדגם. טכניקות אלה להסיר את הצורך לגעת פיזית בביופסיה עם פינצטה ומפחית את האפשרות של נזק. אם כלים, ידיים (עם כפפות או לא) או פתרונות לא סטריליים באים במגע עם המחט, המחט לא יכולה לשמש המשך במהלך ההליך. לכן, אם יש צורך בביופסיה מיידית שנייה, אז יש להשתמש במחט סטרילית חדשה. זה קורה לעתים קרובות, אז זה תרגול הטוב ביותר כדי לשמור על כמה מחטים סטריליות במילואים.
12. זהה את הרקמה כשריר ולא שומן או רקמת חיבור. רקמת שריר מזוהה בקלות מרקמות אחרות בגלל הצבע האדום העמוק שלה(איור 4A). לפעמים, הרקמה שנאספו אינה שריר, אלא רקמת שומן או חיבור.
    1. אם נאספת כמות מספקת של רקמת שריר, המשך בפרוטוקול. אם אין מספיק שרירים, נסה שוב את הביופסיה.
    2. אם יש צורך בביופסיה שנייה, עקבו בקפידה אחר המשתתף, כאשר דחיפה שנייה של מחט גורמת למשתתף להרגיש לא בנוח יותר מהקודם.
13. לשטוף דגימות שרירים באופן מיידי בתמיסת איסוף ולהתכונן לניסויים סיבים בודדים (ראה טיפול ביופסיית שריר ואחסון).
    1. יש עוזר מנוסה לבדוק את איכות המדגם (ראה להלן) ולהעריך את הצורך לבצע ביופסיה שנייה. עוזר נפרד לוקח את הביופסיה לעיבוד, בעוד שאר הצוות ממשיך עם המשתתף.
14. סגור את אתר החתך.
    1. סגור את פצע החתך עם קלטת לוקוסטר סטרילית. השתמש בפיסה אחת או יותר כדי להצטרף לקצוות של אתר החתך על-ידי הנחתם בניצב לציר הארוך של החתך, ולאחר מכן הנח רצועות נוספות בתבנית בעלת צורה של כוכבים כדי להגן מפני טעינה רב-כיוונית.
       הערה: טיפול נכון בשלב זה יפחית את הצלקות. תפירת הפצע יכולה להיעשות אבל אין צורך. אפשרויות אחרות כוללות דבק פצע.
    2. מקום הלבשה פצע סטרילי (למשל, Leucomed T פלוס) מעל אתר החתך כדי להגן מפני זיהום.
    3. עטפו את הרגל בתחבושות אלסטיות מקובדות (לדוגמה, Unihaft) כדי להגביל את הדימום הראשוני ולהגן מפני פגיעה מכנית חיצונית.
    4. עטו את הרגל בתחבושות דחיסה קרילסטיות כדי למנוע דימום ולהגן על התחבושות העמוקות יותר מפני התרופפות או השמדתן.

4. טיפול לאחר ביופסיה

1. בקשו מהמשתתפים להסתובב מיד לאחר ההליך. יהיה כאב מקומי. הנחה את המשתתף ללכת כרגיל ככל האפשר.
2. הנחה את המשתתף לא להסיר את התחבושות או לאפשר למים להשרות את התחבושות. יש לשמור אותם לפחות: יום אחד לתחבושת הקרילסטית, שלושה ימים לתחבושת האלסטית המגושבת, ושבעה ימים לתחבושת הפצע. הודע למשתתף שניתן לחבוש אותו מחדש במידת הצורך.
   1. התאם את הטיפול שלאחר הביופסיה של משתתף לצרכים של הפרט. יש עוזר או רופא מיומן להעריך את המשתתף ולהכין תכנית טיפול מתאימה לאחר ביופסיה. להליך זה, אנו מציעים כי כל עוד בדיקות נוירו-שריריות של ת"א מופרדות על ידי לפחות שבוע מן הביופסיה.

5. טיפול ביופסיה שריר ואחסון

1. לאחר הפקת רקמות, מיד למקם את הרקמה לתוך בקבוקון 5 מ"ל המכיל פתרון איסוף קשיחות (ב mM: Tris (50), KCl (2), NaCl (100), MgCl₂ (2), EGTA (1), טבלית מעכב פרוטאז (1), pH 7.0) ולנער קלות במשך 4-6 דקות כדי לשטוף את הדם.
2. החליפו את פתרון הקשיחות בהקפדה טרייה, לנער קלות במשך 4-6 דקות ולאחר מכן לאחסן ב 4 °C עבור 4-6 שעות כדי לאפשר חילופי תמיסת אחסון מעכבי פרוטאז ודם.
3. פתרון קשיחות Exchange עבור קשיחות לילה (ב mM: Tris (50), KCl (2), NaCl (100), MgCl₂ (2), EGTA (1), מחשב מעכב פרוטאז (1), 50:50 גליצרול, pH 7.0), ולאחסן ב 4 ° C עבור 12-18 שעות.
4. החלף קשיחות לילה עבור 50:50 הקשיות איסוף: גליצרול ומאוחסן ב -20 °C עבור עד 3 חודשים, או שנה אחת במקפיא -80 ° C.
   הערה: תהליך זה מחלחל קרום הסיבים המאפשר תוספת ידנית של סידן לתוך ומחוץ לתא. תהליך זה לוקח זמן והוא יכול להיות שונה בין שרירים ומינים שונים.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

ההתחייבות הזמן כולו למשתתף היה כשעה אחת (10 דקות ייעוץ, 10 דקות אולטרסאונד, 20 דקות הכנה לניתוח ומינהל הרדמה, 10 דקות ניתוח, ו 10 דקות התאוששות). לעתים קרובות, המשתתפים הפעילו באופן לא מודע את ת"א שלהם ונזקקו לתזכורות עקביות כדי לשמור על השריר רגוע ככל האפשר. כאשר מחט הביופסיה הייתה בתוך השריר, המש?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

בדו"ח זה, תיארנו טכניקה לביופסיה של רקמת שריר לא פגומה מבחינה מבנית מת"א. מצאנו כי הליך זה מניב תוכן מקובל של סיבי שריר שנויים (5-10 תכשירים חבילת סיבים לכל 50 מ"ג של רקמה שנאספו) לבדיקות מכניות. יתר על כן, היו לנו מספיק רקמות לניסויים מכניים, גנטיים ופרוטונומיים למעקב.

ישנן מספר ש?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
26 guage subcutaneous needle with 2 ml glass syringe	B. Braun Melsungen AG Carl-Braun-Straße 1 34212 Melsungen, Hessen Germany	4606027V	Drug administration
5mm Berstöm needle	homemade	N/A	Tissue collection. Similar to other Berstöm needles
Acrylastic	BSN medical GmbH 22771 Hamburg	269700	elastic compression bandage
Complete protease inhibitor cocktail	Roche Diagnostics, Mannheim, Germany	11836145001	Protease inhibitor tabeletes added to all solutions that hold muscle tissue.
Cutasept	PAUL HARTMANN AG Paul-Hartmann-Straße 12 89522 Heidenheim Germany	9805630	Disenfectant spray for the skin
Leucomed T plus	BSN medical GmbH 22771 Hamburg	7238201	Transparent wound dressing with wound pad to seal the wound and protect against infection
Leukostrip	Smith and Nephew medical Limitied 101 Hessle road, Hull Great Britain	66002876	wound closure
Surgical disposable scalpels	Aesculap AG Am Aesculap-Platz 78532 Tuttlingen Germany	BA200 series	Incision
Unihaft cohesive elastic bandage	BSN medical GmbH 22771 Hamburg	4589600	cohesive elastic bandage that protects against mechanical impact
Xylocitin 2% with Epinephrin	Milbe GmbH Münchner Straße 15 06796 Brehna Germany	N/A	Controlled substance anesthesia, vasoconstriction