Mekanik Değerlendirme için İnsan Musculus Tibialis Anterior Üstün Bölmesi İskelet Kas Biyopsileri Toplama

Özet

Bu teknik rapor, lif hasarını sınırlayan musculus tibialis anterior biyopsisi için modifiye Bergström tekniğinin bir varyasyonu açıklanmaktadır.

Özet

İskelet liflerinin mekanik özellikleri genel kas sağlığı, fonksiyon ve performansın önemli göstergeleridir. İnsan iskelet kas biyopsileri genellikle bu çabalar için toplanır. Ancak, biyopsi prosedürleri nispeten az teknik açıklamalar, yaygın olarak kullanılan musculus vastus lateralis dışında, mevcuttur. Biyopsi teknikleri genellikle çalışma altında her kas özelliklerini karşılamak için ayarlanmış olsa da, birkaç teknik raporlar büyük topluluk için bu değişiklikleri paylaşmak. Böylece, insan katılımcıların kas dokusu genellikle operatör tekerleği yeniden icat olarak israf edilir. Çeşitli kaslardan biyopsiler üzerinde mevcut malzeme genişletilmesi başarısız biyopsiler olayını azaltabilir. Bu teknik rapor, musculus tibialis anterior üzerindeki modifiye Bergström tekniğinin lif hasarını sınırlayan ve mekanik değerlendirme için yeterli lif uzunluklarını sağlayan bir varyasyonu açıklamaktadır. Ameliyat bir saat içinde tamamlanabilecek bir ayakta tedavi prosedürüdür. Bu işlem için iyileşme süresi hafif aktivite için hemen (yani, yürüyüş), normal fiziksel aktivitenin devamı için üç güne kadar, ve yara bakımı için yaklaşık bir hafta. Çıkarılan doku mekanik kuvvet deneyleri için kullanılabilir ve burada temsili aktivasyon verileri salıyoruz. Bu protokol çoğu toplama amacıyla uygundur, potansiyel olarak diğer iskelet kaslarına uyarlanabilir ve toplama iğnesindeki değişikliklerle geliştirilebilir.

Giriş

Klinik veya araştırma amaçlı insan kas fizyolojisi çalışma genellikle kas biyopsisi gerektirir. Örneğin, insan kas fizyolojisi ve biyomekanik önemli bir sorun arasında ayrım yapmak ve egzersiz kas performansı çeşitli adaptasyonları anlamaktır. Performans adaptasyonları sadece yapısal adaptasyonları içermez (örneğin, kontraktil proteinlerdeki değişiklikler, kas mimarisi) ama aynı zamanda insan kaslarında sağlam test yaparken ayrı ayrı değerlendirmek için çok zor, imkansız olmayan sinirsel adaptasyonlar^1'ide içerir. Lif düzeyindedeneyler bu yüksek seviye bileşenleri kaldırmak ve kas kasılması daha doğrudan değerlendirilmesi için izin ve biyopsi teknikleri ile toplanabilir. Kas biyopsileri en az 1868²yılından beri toplanmıştır. Bugün, kas biyopsileri toplamak için baskın teknik modifiye Bergström tekniği^3,4,5, diğer teknikler bir Weil-Blakesley conchotome kullanımı da dahil olmak üzere kullanılabilir olmasına rağmen⁶ veya sözde ince iğne^7,8. Tüm bu teknikler kas içine geçmek ve doku bir parça kesmek için tasarlanmış özel iğne benzeri aletler kullanın. Özellikle, modifiye Bergström tekniği büyük bir modifiye iğne kullanır (5 mm iğne boyutu burada; Şekil 1) bu iğne ucuna yakın bir pencere ve iğne pencereden geçerken kas kesme, aşağı ve aşağı iğne hareket eden daha küçük bir iç trocar vardır. Bu hallow trocar içinde yukarı ve aşağı trocar şaft hareket eder ve iğne penceresine doğru biyopsi iter bir ramrod olduğunu. İğne penceresiiçine kas çekmek için, bir emme hortumu, hangi iğne hava emer ve negatif basınç ile iğne penceresiiçine kas çeker eklenir.

Kas biyopsileri genellikle protein içeriği değişiklikleri incelemek için elde edilir, gen ekspresyonu, ya da morfoloji hastalığın neden olduğu ya da bir egzersiz programına yanıt^{olarak 1,9,10,11}. Kas biyopsileri için bir diğer kritik kullanım, lif kontraktil kuvvetinin ölçülmesi, kas lifsertliği ve geçmişe bağlı kas özellikleri¹²,^{,13,,14,15,16}gibi mekanik deneylerdir. Tek elyaf veya lif demeti mekaniği aynı anda kuvvet ölçerken lif uzunluğunu kontrol özel teçhizatları üzerinde bir uzunluk motoru ve kuvvet transdüser arasında lifler takArak ölçülür. Geçirimsizleştirici (örn. deri yüzme) lifleri ile sarkolemma membran, banyo çözeltisindeki kimyasallara geçirilebilir hale gelir ve kalsiyum konsantrasyonunu değiştirerek aktivasyon kontrolü sağlar. Ayrıca, kontraktil özelliklerinin kimyasallar/farmasötikler/diğer proteinler üzerindeki etkisi, söz konusu reaktifin banyo çözeltisine eklenmesiyle kolayca değerlendirilebilir. Ancak, bu teknik son derece diğer hayvan modellerinde kullanılırken, belirgin daha az çalışma insan kas biyopsileri^17,18,,19derili lifler üzerinde mekanik testler yaptı. Bunun nedenlerinden biri, biyopsi araçları nın ve protokollerinin doku çıkarma sırasında oluşan yapısal hasar seviyesine daha az göz önünde bulundurularak mümkün olduğunca çok kas dokusunu çıkarmak üzere tasarlanmış olmasıdır. Nitekim, yeni bir biyopsi protokolü kas içine biyopsi iğne sürücü ve^kas3 2-4 parçaları toplamak öneriyor. Sürecin kendisi DNA veya protein materyaline çok az zarar verir, ancak genellikle lif ve sarkoerik yapıları kas liflerinin aktivasyonu kararsız veya imkansız hale gelir şekilde yok eder. Ayrıca biyopsi deki liflerin göreceli uzunluğu genellikle kısadır (<2 mm) ve mekanik testler için kolayca işlenmez. Mekanik testler için ideal lifler uzundur (3-5 mm) ve yapısal olarak hasar görmemişlerdir.

Daha gelişmiş doku çıkarma teknikleri lif hasarı sınırlamak için kullanılabilir. Örneğin,²⁰ kişilik bir grup, kasların tam olarak maruz kaldığı ve bir cerrahın kas yapısını görselleştirebildiği ve nispeten büyük ve yapısal olarak hasar görmemiş kas dokusu (15 mm x 5mm x 5 mm) örneklerini dikkatlice inceleyebildiği ön kolların önceden planlanmış "açık ameliyatlarından" (örn. kemik kırığı onarımı) yararlandı. Bu "açık biyopsi" tekniği, katılımcılar daha önce planlanmış bir prosedürden geçerken tercih edilir ve bu nedenle, özellikle sağlıklı yetişkinler için, aksi takdirde hiçbir ameliyat ların gerçekleşeceği potansiyel katılımcıların havuzunu sınırlar. Böylece, araştırma amaçlı yapılan birçok biyopsi ayakta tedavi işlemi olarak yapılırken, enfeksiyon, yara izi ve iyileşme süresini sınırlamak için kesi bölgesi mümkün olduğunca küçük tutulmaktadır. Bu nedenle, en biyopsiler körü körüne toplanır (yani, operatör kas içine fasya geçer gibi toplama iğne görmek mümkün değildir). Bu biyopsi kalitesi neredeyse tamamen operatör beceri ve deneyime dayalı olduğu anlamına gelir. Her kas doku toplarken kendi zorlukları vardır, sinirler ve kan damarları ihlal riskleri gibi, ideal bir toplama derinliği ve yer seçimi, ve mümkün olduğunca gevşek kas tutmak için uygun bir vücut pozisyonu karar. Ne yazık ki, kas özgü skillsets çoğu yazılı değildir ve bu yüzden her hekim onlara yeni kaslar üzerinde biyopsi yaparken "tekerleği yeniden icat" gerekir. Hekim bu kas biyopsiler için en iyi uygulamaları tanımlayana kadar deneyim Bu eksikliği genellikle düşük kaliteli çeşitli koleksiyonlara yol açar. Acemi hekimler genellikle daha deneyimli meslektaşları ile konuşmaları yoluyla beceri öğrenmek, ancak nispeten az bilgilendirici ve hakemli metinler bu konuda var, geleneksel biyopsi toplama için kullanılmayan kaslar için özellikle. Yukarıdaki bilgileri göz önünde bulundurursak, biyopsiler için insan gönüllüleri işe almanın zorluğu ile birlikte, her katılımcı için başarı şansını en üst düzeye çıkaran daha fazla öğretim bilgisine ihtiyaç duyulduğu açıktır.

Bu yazının amacı, mekanik testler için uzun, hasarsız lif parçaları ile kas biyopsilerinin başarılı bir şekilde toplanması için protokoller sağlayan bir kas biyopsisi tekniği sunmaktır. İnsan kas biyopsileri genellikle yapılır, ve biyopsi eğitim materyalinin toplu, musculus vastus lateralis. Onun nispeten büyük kas boyutu ve cilde göre yüzeysel konumu yeterli kas dokusunun toplanması için izin verir, hasta rahatsızlık ve fiziksel travma en aza indirirken^1,21. Ancak, uzunlamasına eğitim çalışmaları için vastus lateralis kullanarak bazı sınırlamalar vardır. Örneğin, bir eğitim programı içeren deneysel protokoller sırasında, katılımcılar genellikle 2-6 ay aşan bir süre için çalışma dışında ek eğitim kaçınmalısınız. Sporcular için bu genellikle mümkün değildir, çünkü vastus lateralis genellikle tipik egzersizler sırasında (örneğin, çömelmeler, atlar) veya genellikle spor için kullanılır (örn. koşu, bisiklet) için kullanılır. Çalışmanın amacından uzak bu ayrı eğitim deneyimleri kas mekaniği, mimari ve fizyolojiyi kas özellikleri üzerinde çalışmanın deneysel protokolünün gerçek etkisini bilmek zor ya da imkansız bir şekilde değiştiren kas adaptasyonlarına neden olabilir. Çalışmaların bu tür için, genellikle eğitim alayları odak noktası olmayan bir hedef kas seçmek için ideal olacaktır. Musculus tibialis anterior (TA) yukarıdaki gereksinimleri karşılayan ideal bir hedef kastır. Buna ek olarak, eğitim müdahaleleri bir dinamometre kullanımı gibi kontrol edilebilir yaklaşımlar kullanılarak TA'ya yönelik olarak hedeflenebilir. TA kas biyopsisi ile ilgili neredeyse hiçbir eğitim materyali yoktur. Bu nedenle, ta nispeten hasarsız kas biyopsileri toplamak için değiştirilmiş bir protokol geliştirdi.

Protokol

NOT: Aşağıda, devam eden ayrı bir çalışmaya kaydolan gönüllülerin TA mekanik olarak hasarsız liflerin hasat için bir protokol anahat. Bu protokol, vastus lateralis'te modifiye edilmiş Bergström tekniğini tanımlayan Shanely ve ark.³tarafından tanımlanan protokole benzer. Burada sunulan bilgiler araştırma grubumuz tarafından geliştirildi, ancak tüm laboratuvar grupları veya organizasyonel kurulumlar için ideal olmayabilir. Sadece yönergeler veriyoruz ve biyopsi toplamaya yeni gelen laboratuvarların herhangi bir insan deneyi denemeden önce deneyimli laboratuvar gruplarına danışmalarını öneriyoruz.

Bu yazıda yapılan tüm çalışmalar Ruhr Üniversitesi Bochum Spor Bilimleri Fakültesi Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. Katılımcılar çalışmaya katılmadan önce ücretsiz yazılı bilgilendirilmiş onay verdiler.

1. Deneysel hazırlık

1. Katılımcı konsültasyonu sırasında katılımcının ayrıntılı tıbbi geçmişini alırken dışlama kriterlerini değerlendirin (aşağıya bakın).
   1. Biyopsiye kadar geçen 6 hafta boyunca hedef kasta bir sakatlık geçiren katılımcıları hariç tinler. Katılımcıların genellikle sağlıklı olduğundan, kas veya pıhtılaşma bozukluğu olmadığını ve şu anda kan incelmesine (örneğin aspirin) neden olan ilaçlardan haberdar olmalarını sağlayın.
      NOT: Burada orta derecede aktif olan ve biyopsiden en az 3 gün önce yoğun veya alışık olmayan bacak egzersizlerinden kaçınmaları talimatı nı veren katılımcıları seçtik. Ancak, diğer araştırma soruları için, bu kriterler değişebilir.
2. Alman yasaları ve yaygın uygulama tarafından düzenlenen ve takım hekimi tarafından denetlenen^22,23,sterilizasyon ve aseptik teknikler, uymak . Bu işlem genellikle bir "başucu" prosedürü olarak veya ayakta tedavi cerrahi paketi yapılabilir. Rehberlik için yerel düzenleyici kuruma danışın.
3. Biyopsi ekibini oluşturun. Biyopsi ekibinde 4 kişiden oluşan bir biyopsi çalışması öneriyoruz. Bir hekim (veya biyopsi toplama eğitimli birey), hekim ile çalışan bir tıbbi asistan, izleyen ve katılımcı ile etkileşim bir asistan, ve ekstraksiyon hemen sonra kas biyopsisi kolları bir asistan. Bu sayılarla, işlem sırasında tıbbi bir acil durum oluşursa hızlı hasta bakımı uygulanabilir. Prosedür ile rahat ise, o zaman takım sadece iki kişiden yapılmış olabilir: hekim ve tıbbi asistan, birlikte hasta bakımı ve doku işleme aynı anda alacak.
4. Katılımcının kullanıcı onay formunu gözden geçirmek, tartışmak ve imzalamak için proje lideri/hekimle görüşmesini sağlamak. Ayrıntılı bir tıbbi geçmişi (alerji, yaralanma veya alt ekstremite ve TA ameliyatları) alın ve herhangi bir dışlama kriterlerini karşılıyorsa katılımcıhariç. İyileşme ve kesi hijyenini iyice tartışın.
   1. Katılımcıya, ameliyattan hemen sonra yanacaklarını ancak yürüyebileceklerini açıklayın; yamaçlarda veya merdivenlerden aşağı yürümek genellikle ilk 48 saat boyunca rahatsız edicidir ve genellikle 72 saat sonra tam aktivite geri döner. Son olarak, enfeksiyon ve mekanik aşınmaları sınırlamak için, kesi bölgesinin en az 1 hafta bandajlı kalması ve temiz tutulması gerektiğini açıklayın.

2. B-mode Ultrason ile Anterior Tibialis Görselleştirin

1. Katılımcıya rahat bir supine pozisyonunda uzanmasını ve bacak kaslarını mümkün olduğunca gevşetmesini öğretin. Özel yapım bir cihaz kullanın (aşağıya bakın) veya asistanın biyopsi sırasında yapılacak ları taklit etmek için ayak bileğini hafif çesitli bir pozisyonda tutmasını bekleyin.
   NOT: Katılımcının işlem sırasında kas özelliklerini taklit edebilmeleri için rahat bir TA'ya sahip olması önemlidir. Sınav sırasında, kas mimarisindeki değişikliklerin not edilebilsin diye katılımcıdan kas sözleşmesini yapmasını ve kaslarını gevşetmesini isteyin.
2. TA'nın yüzeysel ve derin bölmelerini görselleştirmek, kas mimarisini incelemek ve saldırının derinliğine ve iğne açısına karar vermek için ultrason sondası kullanın(Şekil 2A-B). Ciltteki simgeleri belirtin.
   1. Majör damarlar, arterler veya sinirler önler bir hedef alanı seçimiözellikle dikkat verin.
   2. TA kas göbeği içinde merkezi aponeurosis belirlemek amacıyla kas kesitini değerlendirmek (yaklaşık 1/3 bacak, diz distal, ve tibial arması 2 cm lateral) (Şekil 2B). Merkezi aponeurosis'in (genellikle 1,5-3 cm) yerini ve derinliğini kaydedin, böylece toplama (Bergström) iğnesini bu noktadan geçmemeye özen gösterebilir.
   3. Ultrason probu hedef konuma proksimal-distal oryantasyonda yerleştirin ve fasikül pennation ve kas kalınlığıgörselleştirmek(Şekil 2A). Başarılı bir şekilde (körü körüne) kas karnına toplama iğne sürücü yardımcı olmak için bu bilgileri kullanın. Cerrahi işlem sırasında ileride referans için her iki düzlemde de hedef sitenin görüntülerini kaydedin.
3. Bu bilgilerle, hedef alana doğru iğne hareketi için bir plan oluşturun.
   1. Kesiyi hedef biyopsi bölgesinden 1-3 cm distal yapmayı planlayın. İğne kas içine geçtikten sonra, ekstremite uzun ekseni boyunca cilde ~ 45% açı iğne döndürün, ve daha sonra biyopsi alanına doğru proksimal tahrik. Bu strateji, iğne çok sert itilirse, iğneyi merkezi aponeurosis içine sürme şansını sınırlar. Ayrıca, iğne operatörünün el inebağlı olarak, iğne distal veya proksimal olarak sürülebilir.

3. Biyopsi prosedürü

1. Katılımcıya ameliyat masasına supine bırakmasını ve bacak kaslarını gevşetmesini öğretin. Katılımcının biyopsi bölgesine görüş alanının bir perde tarafından kapatıldıklarından emin olun.
   1. Katılımcının uzvunu hafif dorsifle edilmiş bir pozisyona (nötrden 0-5°) sabitleyen bir cihaza yerleştirerek kas karnındaki pasif gerilimi ortadan kaldırın; Şekil 3). Hastaya hala kaslarını gevşetip gevşetemeyeceklerini sorun, çünkü çok fazla dorsifleksiyon rahatlamayı zorlaştırabilir.
      NOT: Dorsiflexed ayaktan biyopsi toplamanın, en fazla 5° nötr (yani, ayağın sapına dik taban) daha plantar esnemiş ayak bileği açılarından daha tutarlı ve daha büyük biyopsiler ürettiğini bulduk. Ayak bileği dorsiflexed tutan cihaz özel yapım bir cihazdır. Ancak, (ucuz) cihazların herhangi bir sayı hala istenilen sonucu üretmek imal edilebilir.
2. Standart uygulamalara göre seçilen kesi alanını tıraş edin, temizleyin²⁴ve dezenfekte edin.
   NOT: Katılımcının "temiz" alanı önerilen kesi bölgesinin yaklaşık 20 cm proksimal-distal ve 10 cm medial-lateral dir. Ancak, bu konuda her zaman kurumun ve/veya ulusal yönetmeliklere (varsa) danışın. Dezenfeksiyon protokolü, cildin temizlenmesini ve daha sonra tıbbi dereceli dezenfeksiyon spreyinin liberal kullanımıyla dört kez dezenfekte edilip dezenfekte edilebiyi içerir. Katılımcı herhangi bir nedenle masadan ayrılırsa, dezenfeksiyon protokolü yeniden başlatılmalıdır.
3. Lokal anestezik ve vazokonstriktör işlevi gören biyopsi yerinde Epinefrin ile %2 Xylocitin olmak üzere 1.5 cc suprafassiyal enjeksiyon uygulayın. ~20-30 dk'lık ayrılan etki süresini bekleyin.
   NOT: Bu ilaçlar miyotoksiktir ve bu nedenle asla kas içine enjekte edilmemelidir, sadece deri altı doku. Vazokonstriksiyona bir tepki olarak, enjeksiyon bölgesinin alanı beyaz (açık ten tonları) veya gri (koyu cilt tonları) açabilirsiniz.
4. Steril bir neşter ile deri perdeleri ve nazik dürtme ler ile ilaç etkisini doğrulayın.
5. Daha önce işaretlenmiş biyopsi yerinde, deri ve fasya ile keser steril bir neşter ile 1 cm proksimal-distal kesi yapmak, kas karın açığa. İğne künt ve fasya geçmeyecek çünkü tam fasya kesmek için özen.
6. Biyopsi iğnesini cilde dik bir oryantasyonla kas içine 0,5-1,0 cm itin(Şekil 2C, 2E).
   NOT: Operatör farklı doku tipleri ile iğne götürmek için gerekli gerginlik bir değişiklik hissedeceksiniz. Yağ dokusu kolaydır, fasya en zor, ve kas arasında (ama değişken olabilir, katılımcıya göre).
7. İğneyi bacağın uzun ekseni boyunca cilde ~45° açı konumuna getirin(Şekil 2D, 2F). İğne ucu kas içinde hedef konumda olana kadar kas içine başka bir 1-2 cm iğne itin.
   NOT: Hekim kas boyutlarıbireysel varyasyon uhesaba kaydedilen ultrason görüntüleri kullanmalıdır. Kesi sadece iğneyi sokacak kadar büyük olduğundan, doktor iğneyi körü körüne deriye doğru sürüklüyor. Biyopsi operatörünün deneyimle kazandığı bir "his" vardır. Bir acemi eğitimli bir biyopsi operatörü (tartışma bu konuda daha fazla) beceri öğrenmek gerekir.
8. Biyopsi iğnesine 100 mL şırınga ve hortum takın(Şekil 1G). İğnede negatif bir basınç oluşturmak ve kas dokusunu iğne penceresine emerek şırınganın pistonunu yaklaşık 15-20 mL çekerek Bergström iğnesine emme uygulayın. Daha sonra, iğne penceresi üzerinde trocar hızlı bir itme (es) ile kas çıkarmak.
   NOT: Emmeden önce ve sırasında, kasın iğneye girmesine yardımcı olmak için iğne penceresinin hemen üzerinde cilde hafif basınç yerleştirmek bazen yararlıdır.
9. İğneyi yavaşça bacaktan çıkarın, yavaşça döndürün. İğne çıkarılırken sadece ışık direnci olmalıdır. Daha fazla direnç varsa, bu kısmi biyopsi kesilmesine işaret edebilir. Bu oluşur, hedef konuma ihtiyacı dönmek ve doku toplama yeniden girişimi.
10. İç ramrod kullanarak iğne penceresine doğru excised doku itin.
11. Numuneyi dikkatlice iğneden çıkarın.
    NOT: İğnenin toplama çözeltisine batırış (lif hazırlama bölümüne bakınız) genellikle biyopsiyi iğneden çıkarır. Ayrıca, şırınga iğne ile hava sürücü ve örnek dışarı itmek için kullanılabilir. Bu teknikler biyopsiye cımbızla fiziksel olarak dokunma ihtiyacını ortadan kaldırır ve hasar olasılığını azaltır. İğneile temas eden aletler, eller (eldivenli veya değil) veya steril olmayan çözeltiler iğneyle temas ederse, işlem sırasında iğne ileri doğru kullanılamaz. Bu nedenle, ikinci bir acil biyopsi gerekiyorsa, o zaman yeni bir steril iğne kullanılmalıdır. Bu genellikle oluşur, bu yüzden rezerv birkaç steril iğneler korumak için en iyi uygulamadır.
12. Kas olarak doku tanımlayın ve yağ veya bağ dokusu değil. Kas dokusu, koyu kırmızı rengi nedeniyle diğer dokulardan kolayca tanımlanır (Şekil 4A). Bazen, toplanan doku kas değil, yağ veya bağ dokusu.
    1. Yeterli miktarda kas dokusu toplanırsa, protokole devam edin. Yeterli kas yoksa, biyopsiyi tekrar deneyin.
    2. İkinci bir biyopsi gerekirse, katılımcıyı dikkatlice izleyin, çünkü ikinci bir iğne itme zaman zaman katılımcıyı ilkinden daha rahatsız eder.
13. Kas örneklerini hemen bir toplama çözümünde yıkayın ve tek lif deneyleri için hazırlanın (bkz. kas biyopsisi işleme ve depolama).
    1. Deneyimli bir asistan örnek kalitesini kontrol (aşağıya bakın) ve ikinci bir biyopsi yapmak için ihtiyaç değerlendirmek var. Ayrı bir asistan biyopsiyi işleme için alır, takımın geri kalanı ise katılımcıyla devam eder.
14. Kesi alanını kapatın.
    1. Kesi yarasını steril Lökostrip bandı ile kapatın. Kesi bölgesinin kenarlarını kesinin uzun eksenine dik tutarak birleştirmek için bir veya daha fazla parça kullanın ve daha sonra çok yönlü yüklemeye karşı korumak için yıldız şeklinde bir desen daha fazla şeritler yatıyordu.
       NOT: Bu adımın doğru şekilde işlenmesi yara izini azaltacaktır. Yaranın dikilmesi yapılabilir, ancak gerekli değildir. Diğer seçenekler yara tutkal içerir.
    2. Enfeksiyona karşı korumak için insizyon bölgesinin üzerine steril yara pansumanı (örn. Leucomed T plus) yerleştirin.
    3. İlk kanamayı sınırlamak ve dış mekanik darbelere karşı korunmak için bacağı uyumlu elastik bandajlarla (örn. Unihaft) sarın.
    4. Kanamayı önlemek ve daha derin sargıların gevşemesini veya yok olmasını önlemek için bacağı akrillastik kompresyon bandajlarıyla sarın.

4. Biyopsi sonrası bakım

1. Katılımcıdan işlemden hemen sonra dolaşmasını isteyin. Lokalize ağrı olacak. Katılımcıya mümkün olduğunca normal yürümesini emredin.
2. Katılımcıya bandajları çıkarmamasını veya bandajları suyla ıslatmamasını emretin. En az bir gün devam etmelidir: akrillastik bandaj için bir gün, uyumlu elastik bandaj için üç gün ve yara pansumaniçin yedi gün. Katılımcıya, gerekirse yeniden bandajlanabileceklerini bildirin.
   1. Bir katılımcının biyopsi sonrası bakımını bireyin ihtiyaçlarına göre uyar. Eğitimli bir asistan veya hekim katılımcıyı değerlendirin ve uygun bir biyopsi sonrası bakım planı yapın. Bu işlem için, TA'nın daha fazla in vivo nöromüsküler testinin biyopsiden en az bir hafta ile ayrılmasını öneriyoruz.

5. Kas biyopsisi işleme ve depolama

1. Doku ekstraksiyonundan sonra, dokuyu hemen 5 mL'lik bir sertlik toplama çözeltisine yerleştirin (mM: Tris (50), KCl (2), NaCl (100), MgCl₂ (2), EGTA (1), proteaz inhibitörü tableti (1), pH 7.0) ve kanı yıkamak için 4-6 dakika hafifçe çalkalayın.
2. Taze sertlik için Rigor çözeltisi değiştirin, hafifçe 4-6 dakika sallayın ve sonra proteaz-inhibitör depolama çözeltisi ve kan değişimi sağlamak için 4 ° C 4 -6 h saklayın.
3. Gecerigor için Exchange Rigor çözeltisi (mM: Tris (50), KCl (2), NaCl (100), MgCl₂ (2), EGTA (1), proteaz inhibitörü tablet (1), 50:50 gliserol, pH 7.0) ve 12-18 saat boyunca 4 °C'de saklayın.
4. 50:50 toplama katır için bir gecede rigor değişimi: gliserol ve -20 °C'de 3 aya kadar veya bir yıl -80 °C dondurucuda saklayın.
   NOT: Bu işlem, hücreiçine ve dışına manuel kalsiyum eklenmesine olanak sağlayan lif zarını permeabilize eder. Bu süreç zaman alır ve farklı kaslar ve türler arasında farklı olabilir.

Sonuçlar

Bir katılımcı için tüm zaman taahhüdü yaklaşık bir saat (10 dk danışma, 10 dk ultrason, 20 dk cerrahi hazırlık ve anestezik uygulama, 10 dk cerrahi ve 10 dk kurtarma) idi. Çoğu zaman, katılımcılar bilinçsizce kendi TA aktive ve mümkün olduğunca rahat kas tutmak için tutarlı hatırlatmalar gerekli. Biyopsi iğnesi kasın içinde yken, katılımcılar genellikle biyopsi iğnesinin çevresindeki bölgede, ara sıra orta ve yoğun rahatsızlık dönemleri olan benzersiz bir "basınç" hissi bildirmiş...

Tartışmalar

Bu raporda, TA'dan yapısal olarak hasar görmemiş kas dokusubiyopsisi için bir teknik tanımlanmıştır. Biz bu prosedür kullanılabilir kas lifleri kabul edilebilir bir içerik verimleri bulundu (5-10 lif demeti preparatları başına 50 toplanan doku mg) mekanik testler için. Ayrıca mekanik, genetik ve proteomik deneylerin takibi için yeterli dokuya sahiptik.

Genellikle kas biyopsileri 3^,,⁴,^3,6

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
26 guage subcutaneous needle with 2 ml glass syringe	B. Braun Melsungen AG Carl-Braun-Straße 1 34212 Melsungen, Hessen Germany	4606027V	Drug administration
5mm Berstöm needle	homemade	N/A	Tissue collection. Similar to other Berstöm needles
Acrylastic	BSN medical GmbH 22771 Hamburg	269700	elastic compression bandage
Complete protease inhibitor cocktail	Roche Diagnostics, Mannheim, Germany	11836145001	Protease inhibitor tabeletes added to all solutions that hold muscle tissue.
Cutasept	PAUL HARTMANN AG Paul-Hartmann-Straße 12 89522 Heidenheim Germany	9805630	Disenfectant spray for the skin
Leucomed T plus	BSN medical GmbH 22771 Hamburg	7238201	Transparent wound dressing with wound pad to seal the wound and protect against infection
Leukostrip	Smith and Nephew medical Limitied 101 Hessle road, Hull Great Britain	66002876	wound closure
Surgical disposable scalpels	Aesculap AG Am Aesculap-Platz 78532 Tuttlingen Germany	BA200 series	Incision
Unihaft cohesive elastic bandage	BSN medical GmbH 22771 Hamburg	4589600	cohesive elastic bandage that protects against mechanical impact
Xylocitin 2% with Epinephrin	Milbe GmbH Münchner Straße 15 06796 Brehna Germany	N/A	Controlled substance anesthesia, vasoconstriction