JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

אנו מציגים פרוטוקול שניתן להשתמש בו לביצוע בדיקות תרופתיות טיפוליות עם אורגנואידים מסרטן השחלות שמקורם במטופלות.

Abstract

סרטן השחלות הוא סרטן גינקולוגי קטלני והגורם החמישי למוות מסרטן בקרב נשים בארצות הברית. פיתוח טיפולים תרופתיים חדשים חיוני לקידום שירותי הבריאות ולשיפור תוצאות המטופלים. אורגנואידים הם איברים זעירים תלת-ממדיים תלת-ממדיים רב-תאיים. מודלים אורגנואידים שמקורם במטופלות (PDO) של סרטן השחלות עשויים להיות אופטימליים לבדיקת תרופות מכיוון שהם משחזרים בצורה מדויקת יותר רקמות מעניינות מאשר מודלים של תרביות תאים דו-ממדיות והם זולים בהשוואה לקסנוגרפטים שמקורם במטופל. בנוסף, PDOs של סרטן השחלות מחקים את המיקרו-סביבה המשתנה של הגידול ואת הרקע הגנטי שנצפה בדרך כלל בסרטן השחלות. כאן מתוארת שיטה שניתן להשתמש בה לבדיקת תרופות קונבנציונליות וחדשניות על PDOs שמקורם ברקמת סרטן השחלות ומיימת. בדיקת אדנוזין טריפוספט (ATP) מבוססת לומינסנציה משמשת למדידת כדאיות, קצב גדילה ורגישות לתרופות. ניתן להשלים בדיקות תרופתיות ב- PDO תוך 7-10 ימים, בהתאם לקצב היווצרות האורגנואידים והטיפולים התרופתיים.

Introduction

למרות נדיר, סרטן השחלות הוא אחד מסוגי הסרטן הגינקולוגיים הקטלניים ביותר 1,2. אתגר בפיתוח טיפולים חדשים הוא שסרטן השחלות הוא הטרוגני, והמיקרו-סביבה של הגידול שונה מאוד בין המטופלות. בנוסף, סרטני שחלות רבים מפתחים עמידות לכימותרפיה מבוססת פלטינום ולמעכבי פולימראז (ADP-ריבוז), המדגישים את הצורך באפשרויות טיפוליות גדולות יותר 3,4,5.

גישה אחת שעשויה להיות שימושית בזיהוי טיפולים חדשים היא שימוש באורגנואידים שמקורם במטופל (PDOs). אורגנואידים הם צבירים תלת-ממדיים של סוגי תאים מרובים המתארגנים בעצמם ויוצרים במבחנה "מיני-איברים"6,7,8,9,10. אורגנואידים יכולים לשחזר מורפולוגיה חשובה של רקמות ופרופילי ביטוי גנים11,12. חלק מהאורגנואידים הראשונים נגזרו מתאי סרטן המעיים, הקיבה והמעי הגס הן מעכברים והן מבני אדם 8,9,13. תרביות אורגנואידים ארוכות חיים הוקמו ממגוון רחב של רקמות שפירות וממאירות, כולל שלפוחית השתן, המעי הגס, הקיבה, הלבלב, המוח, הרשתית והכבד 14,15,16. בעבר הדגמנו שיטות לקביעת PDOs מגידולים סרטניים בשחלות ודגימות מיימת17. PDOs יכולים לשמש לחקר מאפיינים מולקולריים, מנגנונים תאיים וטיפולים תרופתיים חדשניים 18,19,20. ל-PDOs יש מספר יתרונות על פני תרביות תאים ראשוניים דו-ממדיות מסורתיות לבדיקת תרופות. למרות שתרביות דו-ממדיות ראשוניות הן שיטה זולה למסכי תרופות, תרביות תאים ראשוניות הן מסוג חד-תאי וחסרות את הארכיטקטורה התלת-ממדית של גידולים 21,22,23. עם זאת, PDOs הם משאב יקר, ויש צורך בפרוטוקולים חסכוניים כדי לייעל את השימוש בהם בסינון תרופות טיפוליות.

מאמר זה מתאר שיטה במבחנה לשימוש ב- PDO של סרטן השחלות כדי לבדוק את ההשפעות של תרופות ידועות או מועמדות. בעוד שמסכי תרופות בתפוקה בינונית וגבוהה המשתמשים ב-PDO דורשים מכשירי ניפוק אוטומטיים יקרים 24,25,26, שיטה חסכונית זו משתמשת בחומרי מעבדה בסיסיים זמינים ובבדיקת כדאיות תאים מבוססת ATP בתבנית צלחת סטנדרטית של 96 בארות (איור 1A). שיטה זו תאפשר בדיקות מקדימות של תרופות חדשות לסרטן השחלות לפני הרחבה למסכים גדולים יותר27,28. למרות PDOs סרטן השחלות משמשים כאן, שיטה זו יכולה להיות מיושמת על מודלים אחרים אורגנואידים סרטן.

Protocol

אוסף הדגימות האנושיות למחקר זה אושר על ידי ועדת הסקירה המוסדית של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת וושינגטון. לכל המטופלות הזכאיות מעל גיל 18 הייתה אבחנה או אבחנה משוערת של סרטן שחלות סרוסי בדרגה גבוהה והן היו מוכנות ומסוגלות לספק הסכמה מדעת. רקמת הגידול מאתרים ראשוניים או גרורתיים, בנוסף למיימת ונוזל פלאורלי, התקבלו מחולים מוסכמים בזמן הטיפול.

1. בחירת PDOs מבוססים לבדיקת כדאיות

הערה: בדרך כלל, אורגנואידים אלה נמצאים בתוך חמשת הקטעים הראשונים. כפי שתואר קודם לכן, PDOs של סרטן השחלות נוצרים על ידי השעיה מחדש של תרחיף תאים ראשוני בתמצית קרום מרתף (BME) כגון Cultrex או Matrigel17 (ראה טבלת חומרים).

  1. PDOs צריכים להיות בעלי זמן הכפלה נתפס של 24-72 שעות לקבלת היעילות הטובה ביותר של הבדיקה. הערך את זמן ההכפלה הנתפס על ידי קביעה חזותית של מספר הימים שלוקח לאורגנואידים להיווצר לאחר העברה/ציפוי.
    הערה: מניסיוננו, אורגנואידים שלוקח להם יותר משלושה ימים להיווצר לא יכולים לשמש לבדיקת עיכוב גדילה זו.
  2. זהה תרופות ובחר טווח ריכוזים לבדיקה (לדוגמה, Carboplatin, 0-50 μM, ראה טבלת חומרים).
  3. קבע את הגדרת הצלחת. בדיקה זו תבוצע בשילוש, תוך הגבלת מספר התרופות והריכוזים שניתן לבדוק על צלחת אחת.
    הערה: יש להקפיד על קווי PDO נבחרים לפני ביצוע הבדיקה. PDOs מבוססים של סרטן השחלות יוצרים כדורים רב-תאיים, מוצקים וחלולים עם צורות ניצנים דמויות גידול (איור 1B). יש להשוות את המורפולוגיה של PDO, הפרופיל הגנומי וכו' לזה של דגימת המטופל (במידת האפשר) לפני ביצוע הבדיקה29-33. PDO של סרטן השחלות יכול להיווצר מדגימות גידול ראשוניות וגרורתיות ומיימת17.

2. הכנת מגיב לבדיקת הכדאיות

  1. מדיית בסיס: ל-DMEM/F12 מתקדם, יש להוסיף 1% (v/v) פניצילין-סטרפטומיצין, 1x גלוטמקס ו-1% (v/v)HEPES17 (ראה טבלת חומרים).
  2. הכינו מדיה אורגנואידית מתקדמת לאורגנואידים של סרטן השחלות בעקבות דו"ח17 שפורסם בעבר.

3. ציפוי אורגנואידים (~ יום -2)

הערה: שלב זה חייב להתבצע 1-3 ימים לפני הוספת התרופות. לפני שמתחילים, יש לחמם את כל הריאגנטים (Base Media, Advance Organoid Media ו-organoid dissociation reagent; ראו טבלת חומרים) ל-37°C באמבט מים. הפשיר BME באמבט מי קרח.

  1. השתמש במיקרוסקופ שדה בהיר כדי לאשר אם אורגנואידים בעלי עניין הם 70%-90% חופפים.
    הערה: מומלץ לשמור תמונות של האורגנואידים לעיון עתידי.
  2. הוסף 1-2 מ"ל של מצע בסיס מחומם לבאר המכילה אורגנואידים ופיפטה למעלה ולמטה כדי לנתק מכנית את האורגנואידים המכילים BME. מעבירים את התמיסה כולה לצינור חרוטי 15 מ"ל17.
    הערה: בדרך כלל, 1-2 מ"ל של מדיה מספיק כדי לדלל כראוי את BME. ניתן לשלב אורגנואידים של אותו חולה ומעבר.
  3. מערבולת במשך 5-10 שניות כדי לנתק עוד יותר את התאים, וצנטריפוגה ב 1107 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר (RT).
  4. מוציאים את הסופרנאטנט עם פיפטה חד-ערוצית ומשליכים. השהה אורגנואידים במגיב דיסוציאציה אורגנואידי 1 מ"ל (ראה טבלת חומרים) והעבר לצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מ"ל. יש לדגור במשך 7 דקות ב-37°C.
    1. אם הגלולה עדיין ג'לטינית בגלל ה- BME הנותר, הוסף 1 מ"ל נוספים של מדיה בסיסית, מערבולת עבור 5-10 שניות, וצנטריפוגה חוזרת.
  5. צנטריפוגה ב 1107 x גרם במשך 5 דקות ב RT. להסיר ולהשליך את supernatant ו resuspend את גלולת התא ב 1 מ"ל של מדיה בסיסית.
  6. ספור את מספר התאים בכל תרבית PDO באמצעות מונה תאים אוטומטי (ראה טבלת חומרים) או המוציטומטר.
  7. תאי השהיה מחדש ב- 20,000 תאים לכל 10 מיקרוליטר של 25% מדיה בסיסית ו- 75% BME. עשה זאת על ידי השעיה מחדש של האורגנואידים בתקשורת וערבוב עם BME.
  8. לוחית אחת של 3 μL טיפות של תאי BME + PDO מרחפים לתוך באר אחת של צלחת אטומה שחורה בת 96 בארות (ראה טבלת חומרים). מניחים את הטיפות במרכז כל באר. צלחת ריכוז כל תרופה משולשת.
    הערה: מאחר שבדיקת הכדאיות של התא מבוססת על עוצמת האור, עדיף להשתמש בלוחות אטומים שחורים כדי להימנע מרקע. ניתן להשתמש בלוחות שקופים כדי לדמיין אורגנואידים במהלך הבדיקה, אך יש לכסות את תחתית הלוחות בסרט אטום לפני מדידת ההארה.
  9. דגירה על צלחת באינקובטור תרבית תאים בטמפרטורה של 37°C למשך 15 דקות.
  10. הוסף 100 μL של מדיה אורגנואידית מתקדמת לכל באר. צלחת הדגירה במשך 24-72 שעות (לקבוע על פי זמן הכפלת PDO נתפס). הוסף 100 μL של מדיה אורגנואידית מתקדמת לבאר ריקה לשימוש ריק.
    הערה: המטרה היא לאפשר לאורגנואידים להיווצר.
  11. אופציונלי: לניתוח קצב צמיחה, לוחית PDO משולש נוסף בלוח נפרד. זה ישמש לספירת תאים בזמן = 0 ויש לבדוק אותו ביום 0 באמצעות בדיקת הכדאיות המתוארת בסעיף 5.

4. הוספת תרופות לבדיקת הכדאיות ביום 0

הערה: יום 0 מתייחס ליום שבו התרופות מתווספות לאורגנואידים שנוצרו במלואם.

  1. יש לדלל תרופות נבחרות במצע אורגנואיד מתקדם לריכוזים הרצויים. דילולים יכולים להתבצע בצינורות 1.5 מ"ל או בצלחת 96 באר מוגדרת מראש, שתאפשר שימוש בפיפט רב ערוצי לחלוקת המדיה.
    הערה: תרופות חייבות להיות מושעות מחדש בממס המוצע על ידי היצרן, כגון dimethyl sulfoxide. במחקר זה נעשו הדילולים הבאים של קרבופלטין במדיה אורגנואידית מתקדמת: 1, 5, 10, 25, 50 ו-75 מיקרומטר.
  2. הסר מדיה מכל באר עם פיפטה אחת או רב ערוצית, תוך זהירות שלא לגעת או להפריע לטיפת PDO/BME.
  3. הוסף 100 μL של חומר אורגנואיד מתקדם ותרופות רצויות לכל באר. הקפד להוסיף מדיה טרייה לשלוש בארות הבקרה.
    הערה: ריכוזי התרופות ישתנו ויהיו תלויים בשאלה המדעית ובמנגנון הפעולה של התרופה. כאשר אנו מחליטים באילו ריכוזים להשתמש, אנו מתחילים עם ריכוזי תרופות שנקבעו בעבר בשורות תאים דו-ממדיות דומות (למשל, שורות תאים של סרטן שחלות אימורטלי). ייתכן שיהיה צורך להגדיל את הריכוזים אם לא נצפתה השפעה על אורגנואידים.
  4. רענן מדיה ותרופות לפי הצורך (חזור על שלבים 4.1-4.3). השאלה אם יהיה צורך לרענן את המדיה תלויה באורך הבדיקה, בפעילות הביולוגית של התרופה ובמחצית החיים של התרופה. עבור בדיקות במשך שבוע, יהיה צורך לרענן את המדיה לפחות פעם אחת.

5. סיום בדיקת הכדאיות לקריאה (~ יום 7)

הערה: ניתן לבצע שלב זה בימים 7-10. אורך הבדיקה חייב להיקבע על פי זמן מחצית החיים והפרמקודינמיקה של התרופות הנבדקות.

  1. אפשרו לריאגנטים של בדיקת הכדאיות להגיע לטמפרטורת החדר בחושך. אחסנו את הריאגנטים בטמפרטורה של 4°C למשך הלילה (בחושך) כדי להפחית את זמן ההפשרה.
  2. מוציאים את צלחת הבדיקה מאינקובטור תרביות התאים ומאפשרים לה להתאקלם לטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. הצלחת לא צריכה להתאקלם בחושך.
  3. הוסף 100 μL של מגיב בדיקת כדאיות (ראה טבלת חומרים) לכל באר (לנפח כולל של 200 μL), ומניחים על שייקר צלחת למשך 5 דקות (80 סל"ד). מוציאים את הצלחת מהשייקר ודגרים 25 דקות נוספות בטמפרטורת החדר. ודא שהצלחת תמיד מוגנת מפני אור על ידי כיסויה בנייר כסף או בקופסה אטומה.
  4. הפעל את קורא הלוחות bioluminescence ופתח את תוכנת i-control (ראה טבלת חומרים).
  5. תחת התחבר אל: שם מכשיר, בחר infinite 200Pro.
  6. בחר Luminescence וסקריפט ברירת מחדל.
  7. בתפריט הנפתח, בחר סוג צלחת [BD96fb_Falcon-BD] Falcon 96 Flat Black.
  8. קבע אילו בארות לקרוא והדגש את הבארות המתאימות תחת חלק מהצלחת.
  9. תחת 'מדידות' בצד שמאל של המסך, גררו ושחררו Luminescence מתחת לחלק של לוחית.
  10. בחר את פרמטרי ההארה: הנחתה: ללא; זמן אינטגרציה: 1000 אלפיות השנייה; זמן יישוב: 0 מטר/שניה.
  11. הסירו את המכסה מהצלחת והעמיסו אותו בקורא הלוחות. לחץ על התחל כדי להתחיל.
  12. בסיום, לייצא נתונים ולשמור.

6. ניתוח נתונים

  1. חשב את אחוז הכדאיות של התא.
    1. החסרו את ה"ריק" מכל באר עבור הקריאות המתוקנות של הריק. לאחר מכן, חשב ממוצע בקרה על ידי ממוצע שלוש בארות הבקרה.
    2. השתמש במשוואה הבאה כדי לחשב את אחוז התאים בני קיימא בכל באר: (באר ניסוי / ממוצע בקרה) x 100
    3. צור גרף של הנתונים המתקבלים בתוכנת הניתוח (ראה טבלת חומרים).
  2. בחן את מדדי קצב הצמיחה (GR).
    1. חישוב ידני של מדדי GR על פי הדו"חשפורסם 34.
    2. לחלופין, השתמש במחשבון GR המקוון (ראה טבלת חומרים) כדי ליצור את המדדים35. השתמש במדידות יום 0 כ"cell_count_time0", המשקפות את קצב הצמיחה של PDO שלא טופלו.
    3. ייצוא נתונים וגרף.

תוצאות

תוצאות אלה ממחישות את התגובה של שני PDO לתרופה הכימותרפית קרבופלטין, המשמשת לטיפול בסרטן השחלות. אורגנואידים נגזרו מביופסיה של הגידול (PDO #1) וממיימת (PDO #2). אורגנואידים אלה נבחרו על סמך זמן ההכפלה הנתפס שלהם (1-2 ימים) והמראה המורפולוגי שלהם (היווצרות של אורגנואידים גדולים רבים). גם PDO #1 וגם PDO #2 צ...

Discussion

מאמר זה מתאר שיטה שניתן להשתמש בה כדי להעריך את ההשפעות הטיפוליות של תרופות קונבנציונליות או חדשניות על PDO של סרטן השחלות. על החוקרים לשקול מספר סוגיות לפני ביצוע בדיקת הכדאיות במודל PDO.

ראשית, בעת בחירת PDO לשימוש בבדיקת הכדאיות, יש לקבוע את סוג האורגנואיד האידיאלי (גידול ל?...

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

המחקר שדווח בפרסום זה נתמך על ידי המכון הלאומי לסרטן של המכונים הלאומיים לבריאות תחת פרס מספר R01CA243511. התוכן הוא באחריותם הבלעדית של המחברים ואינו מייצג בהכרח את הדעות הרשמיות של המכונים הלאומיים לבריאות. המחברים מודים לדבורה פרנק על הערות העריכה שלה.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1.5 mL Plastic Tubes
15 mL Plastic Tubes
96 well Flat Black PlatesMidSci781968
Advance Organoid Media see Graham et al 2022 (Jove)
Advanced DMEM/F12Thermo Fisher12634028
Automated Cell CounterThermo FisherAMQAX1000
Brightfield Microscope
Carboplatin Teva Pharmaceuticals USANDC 00703-4246-01
CellTiter-Glo 3D Viability PromegaG9681
CultrexR & D Systems3533-010-02
DMSOSigma AldrichD2650-100ML
GlutamaxLife Technologies35050061
GR Calculator http://www.grcalculator.orgOnline calculator
GraphPad PrismGraphPad Software, Inc.
HEPESLife Technologies15630080
MatrigelCorning354230
Microsoft ExcelMicrosoft
Penicillin-StreptomycinThermo Fisher15140122
Plate Rocker
Sterile P10, P200, and P1000 Barrier Sterile Pipette Tips
Sterile P10, P200, and P1000 Pipettes
Tecan Infinte 200Pro Plate Reader; i-Control SoftwareTecan
TrypLEThermo Fisher12605010Organoid dissociation reagent

References

  1. Matulonis, U. A., Sood, A. K., Fallowfield, L., Howitt, B. E., Sehouli, J. m., Karlan, B. Y. Ovarian cancer. Nature Reviews Disease Primers. 2 (1), 16061 (2016).
  2. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2019. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).
  3. Christie, E. L., Bowtell, D. D. L. Acquired chemotherapy resistance in ovarian cancer. Annals of Oncology. 28 (suppl_8), viii13-viii15 (2017).
  4. Wang, L., Wang, Q., Xu, Y., Cui, M., Han, L. Advances in the treatment of ovarian cancer using PARP inhibitors and the underlying mechanism of resistance. Current Drug Targets. 21 (2), 167-178 (2020).
  5. Wang, Q., Peng, H., Qi, X., Wu, M., Zhao, X. Targeted therapies in gynecological cancers: a comprehensive review of clinical evidence. Signal Transduction and Targeted Therapy. 5 (1), 137 (2020).
  6. Hofer, M., Lutolf, M. P. Engineering organoids. Nature Reviews Materials. 6 (5), 402-420 (2021).
  7. Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies. Science. 345 (6194), 1247125 (2014).
  8. Sato, T., et al. Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and barrett's epithelium. Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).
  9. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  10. Spence, J. R., et al. Directed differentiation of human pluripotent stem cells into intestinal tissue in vitro. Nature. 470 (7332), 105-109 (2011).
  11. Schutgens, F., Clevers, H. Human organoids: Tools for understanding biology and treating diseases. Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 15 (1), 211-234 (2020).
  12. Zhao, Z., et al. Organoids. Nature Reviews Methods Primers. 2 (1), 94 (2022).
  13. Barker, N., et al. Lgr5(+ve) stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro. Cell Stem Cell. 6 (1), 25-36 (2010).
  14. Corrò, C., Novellasdemunt, L., Li, V. S. W. A brief history of organoids. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 319 (1), C151-C165 (2020).
  15. Kim, J., Koo, B. K., Knoblich, J. A. Human organoids: model systems for human biology and medicine. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 21 (10), 571-584 (2020).
  16. Simian, M., Bissell, M. J. Organoids: A historical perspective of thinking in three dimensions. Journal of Cell Biology. 216 (1), 31-40 (2017).
  17. Graham, O., et al. Generation and culturing of high-grade serous ovarian cancer patient-derived organoids. Journal of Visualized Experiments. 191, e64878 (2023).
  18. Liu, C., Qin, T., Huang, Y., Li, Y., Chen, G., Sun, C. Drug screening model meets cancer organoid technology. Translational Oncology. 13 (11), 100840 (2020).
  19. Driehuis, E., Kretzschmar, K., Clevers, H. Establishment of patient-derived cancer organoids for drug-screening applications. Nature Protocols. 15 (10), 3380-3409 (2020).
  20. Zhou, Z., Cong, L., Cong, X. Patient-derived organoids in precision medicine: drug screening, organoid-on-a-chip and living organoid biobank. Frontiers in Oncology. 11, 762184 (2021).
  21. Costa, E. C., Moreira, A. F., de Melo-Diogo, D., Gaspar, V. M., Carvalho, M. P., Correia, I. J. 3D tumor spheroids: an overview on the tools and techniques used for their analysis. Biotechnology Advances. 34 (8), 1427-1441 (2016).
  22. Foo, M. A., et al. Clinical translation of patient-derived tumour organoids- bottlenecks and strategies. Biomarker Research. 10 (1), 10 (2022).
  23. Kapałczyńska, M., et al. 2D and 3D cell cultures - a comparison of different types of cancer cell cultures. Archives of Medical Science. 14 (4), 910-919 (2018).
  24. Bergdorf, K., et al. High-throughput drug screening of fine-needle aspiration-derived cancer organoids. STAR Protocols. 1 (3), 100212 (2020).
  25. Phan, N., et al. A simple high-throughput approach identifies actionable drug sensitivities in patient-derived tumor organoids. Communications Biology. 2 (1), 78 (2019).
  26. Putker, M., et al. Medium-throughput drug- and radiotherapy screening assay using patient-derived organoids. Journal of Visualized Experiments. 170, e62495 (2021).
  27. Dahlin, J. L., Inglese, J., Walters, M. A. Mitigating risk in academic preclinical drug discovery. Nature Reviews Drug Discovery. 14 (4), 279-294 (2015).
  28. Honkala, A., Malhotra, S. V., Kummar, S., Junttila, M. R. Harnessing the predictive power of preclinical models for oncology drug development. Nature Reviews Drug Discovery. 21 (2), 99-114 (2022).
  29. de Witte, C. J., et al. Patient-derived ovarian cancer organoids mimic clinical response and exhibit heterogeneous inter- and intrapatient drug responses. Cell Reports. 31 (11), 107762 (2020).
  30. Hill, S. J., et al. Prediction of DNA repair inhibitor response in short-term patient-derived ovarian cancer organoids. Cancer Discovery. 8 (11), 1404-1421 (2018).
  31. Kopper, O., et al. An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity. Nature Medicine. 25 (5), 838-849 (2019).
  32. Maenhoudt, N., Vankelecom, H. Protocol for establishing organoids from human ovarian cancer biopsies. STAR Protocols. 2 (2), 100429 (2021).
  33. Nanki, Y., et al. Patient-derived ovarian cancer organoids capture the genomic profiles of primary tumours applicable for drug sensitivity and resistance testing. Scientific Reports. 10 (1), 12581 (2020).
  34. Hafner, M., Niepel, M., Chung, M., Sorger, P. K. Growth rate inhibition metrics correct for confounders in measuring sensitivity to cancer drugs. Nat Methods. 13 (6), 521-527 (2016).
  35. Clark, N. A., et al. GRcalculator: an online tool for calculating and mining dose-response data. BMC Cancer. 17 (1), 698 (2017).
  36. Senkowski, W., et al. A platform for efficient establishment and drug-response profiling of high-grade serous ovarian cancer organoids. Developmental Cell. 58 (12), 1106.e7-1121.e7 (2023).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

PDOATP

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved