JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

הפרשות המוח ממלאות תפקיד מרכזי בהתפתחות ובתפקוד תקין של מערכת העצבים המרכזית. במאמר זה אנו מספקים פרוטוקול מפורט לבידוד הפרשות המוח מתרביות פרוסות מוח ex vivo .

Abstract

הפרשות המוח מורכבות מחלבונים המופרשים באופן פעיל או נשפכים מפני השטח של התא על ידי מחשוף פרוטאוליטי במטריצה החוץ-תאית של מערכת העצבים. חלבונים אלה כוללים בין היתר קולטני גורמי גדילה וחלבונים טרנסממברניים, המכסים קשת רחבה של תפקידים בהתפתחות ובתפקוד תקין של מערכת העצבים המרכזית. ההליך הנוכחי להפקת ההפרשה מנוזל המוח השדרתי הוא מסובך וגוזל זמן, וקשה לבודד חלבונים אלה ממוחות של בעלי חיים ניסיוניים. במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול חדשני לבידוד הפרשות המוח מתרביות פרוסות מוח של עכברים. ראשית, המוחות בודדו, נחתכו ותרבו ex vivo. לאחר מכן סונן מדיום התרבית ורוכז לבידוד חלבונים על ידי צנטריפוגה לאחר מספר ימים. לבסוף, החלבונים המבודדים נפתרו באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד נתרן דודציל-סולפט (SDS-PAGE) ולאחר מכן נבדקו לאפיון טוהר על ידי Western Blot. ניתן להשתמש בהליך בידוד זה של הפרשות המוח מתרביות פרוסות מוח ex vivo כדי לחקור את ההשפעות של ההפרשה על מגוון מחלות נוירו-התפתחותיות, כגון הפרעות בספקטרום האוטיזם.

Introduction

המטריצה החוץ-תאית של מערכת העצבים מורכבת מחלבונים המופרשים באופן פעיל או נשפכים מפני השטח של התא, הנקראים "הפרשה". הפרשות המוח מכילות חלבונים כגון קולטני גורמי גדילה וחלבונים טרנסממברניים1, המקיפים קשת רחבה של תפקידים בהתפתחות ובתפקוד תקין של מערכת העצבים המרכזית. מספר רב של חלבונים המופרשים על ידי תאי הגליה, כולל מיקרוגליה ואסטרוציטים בפרט, משקפים מגוון רחב של מצבי גליה, כולל דלקת עצבית במערכת העצבים המרכזית2. הוכח כי ל-Protein Secretome יש גם השפעות נוירו-פרוטקטיביות וגם נוירוטוקסיות. לדוגמה, גנים המקודדים נוירוליגין, חלבון טרנסממברני הקיים בפוסט-סינפסות המווסת את המבנה והתפקוד של צמתים סינפטיים3, נמצאו כגורם סיכון להפרעות בספקטרום האוטיזם. נוירוליגין עובר תהליך הנקרא שפיכת אקטודומיין, שבו האקטודומיינים של חלבונים טרנסממברניים משתחררים משטח התא על ידי מחשוף מהממברנה בצורה של הפרשה 4,5.

ניתן לזהות חלבונים רבים בהפרשה בתוך המוח בנוזל השדרה; לפיכך, ניתוח פרוטאומי של נוזל זה יכול לסייע בזיהוי מנגנונים פיזיולוגיים ופתולוגיים חדשים וסמנים ביולוגיים של מחלות נוירולוגיות 6,7. רבים מהתפקודים הפיזיולוגיים של חלבוני הפרשה במוח נותרו לא ידועים ודורשים חקירה נוספת. הקמת הליך יעיל למיצוי הפרשות המוח היא קריטית למחקרים אלה. עם זאת, ההליך הנוכחי להפקת ההפרשה מנוזל המוח השדרתי הוא מסובך וגוזל זמן, וקשה לבודד חלבונים אלה ממוחות של בעלי חיים ניסיוניים8. במאמר זה אנו מציגים פרוטוקול חדש לבידוד ההפרשה מפרוסות מוח של עכברים.

פרוסות מוח שגודלו במבחנה מכילות את אותם סוגי תאים ומבנה תאים תלת מימדי כמו רקמת המוח, תוך שמירה על מעגלים סינפטיים תקינים ושלמים, הפצת קולטנים, העברת משדרים ופונקציות פיזיולוגיות אחרות. המודל מחקה את הצמיחה והתפקוד של תאי עצב בעכברים כאשר פרוסות מוח ממוקמות במדיום תרבית מתאים כדי להבטיח צמיחה והישרדות מתמשכת של תאים. במחקר זה, פרוסות המוח של העכבר המשיכו להפריש חלבונים נוירו-הפרשתיים9, והמוח המבודד נותח והונח על מסנן בתנאים סטריליים. תוספות המסנן הונחו בצלחות של 6 בארות המכילות את מדיום התרבית. בהתחשב בכך שחלבונים המופרשים על ידי נוירונים ותאי גליה יכולים לחדור לקרום התוסף אך לא לתאים, ניתן לאסוף את הפרשות המוח ממדיום התרבות המותנה.

מאמר זה מתאר את ההליכים הבסיסיים עבור (i) בידוד של פרוסות מוח, (ii) איסוף פרוסות מוח, (iii) איסוף תרביות פרוסות מוח ממדיום מותנה, (iv) ניתוחי כתמים מערביים, ו-(v) ניתוח פרוטאומי (איור 1).

Protocol

פרוטוקול זה אושר ועוקב אחר הנחיות הטיפול בבעלי חיים שנקבעו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה הדרומית למדע וטכנולוגיה (SUSTech-JY202112006). במחקר זה נעשה שימוש בעכברים זכרים ונקבות C57BL/6J בוגרים (בני 6-8 שבועות, 22-30 גרם). עכברים שוכנו בטמפרטורה של 22-25 מעלות צלזיוס במחזור צירקדי של 12 שעות אור ו-12 שעות חושך, עם גישה אד-ליביטום למזון ולמים. שלבי הפרוטוקול מפורטים כדלקמן.

1. בידוד פרוסות מוח

  1. הכן את כלי הניתוח: פינצטה לכיפוף עיניים, כוסות (250 מ"ל, 500 מ"ל), נייר פילטר, מספריים, סכין גילוח, להב חד צדדי ועט מברשת. מניחים את הכלים הללו בקופסת קצף מלאה בקרח כתוש להתקררות.
  2. פתח את השסתום לגז המעורב המכיל 95% O2 ו-5% CO2. נקה את ראש צינור הגז על ידי הכנסתו לכוס מים טהורים במיוחד.
  3. הכן את מאגר החיתוך הקר כקרח באמצעות הרכיבים הבאים: 225 מ"מ סוכרוז, 2.5 מ"מ KCl, 1.25 מ"מ NaH2PO4, 26 מ"מ NaHCO3, 11 מ"מ D-גלוקוז, 5 מ"מ חומצה L-אסקורבית, 3 מ"מ נתרן פירובט, 7 מ"מ MgSO4 ו-0.5 מ"מ CaCl2. התאם את ה-pH ל-7.3-7.4.
  4. הכן את תמיסת התרבית עם הרכיבים הבאים: 122 מ"מ NaCl, 2.5 מ"מ KCl, 1.25 מ"מ NaH2PO4, 26 מ"מ NaHCO3, 11 מ"מ D-גלוקוז, 7 מ"מ MgSO4 ו- 0.5 מ"מ CaCl2. התאם את ה-pH ל-7.3-7.4, ולאחר מכן סנן והוסף 10% תמיסת פניצילין-סטרפטומיצין (P/S) לתמיסת התרבית.
  5. חמצן את תמיסת התרבית ותמיסת הדיסקציה למשך 30 דקות לפני הקרבת העכברים. שוברים את סכין הגילוח כדי לקחת מחצית מהפרוסה ואז מרכיבים אותו על הפורס. התקן את הבסיס ומחזיק הכלי של הפורס.
  6. הקריבו את העכברים על ידי פריקת צוואר הרחם, או על ידי שימוש באיזופלואורן של 2%-3% להרדמה.
    1. השתמש במספריים כדי לחתוך את הגולגולת בצוואר. חותכים את העור באמצע הגולגולת כדי לחשוף את כל הגולגולת.
    2. השתמש במספריים עיניים כדי לחתוך את הגולגולת לאורך הקו החציוני והשתמש במלקחיים מעוקלים כדי לחתוך את הגולגולת.
    3. לבסוף, השתמש במלקחיים מעוקלים כדי להגיע לבסיס הגולגולת ולחתוך את עצב הבסיס; כעת ניתן להסיר את כל המוח.
  7. הכניסו במהירות את המוח למאגר דיסקציה קר כקרח. השתמש בלהב חד, מעוקר וחד-צדדי כדי לחתוך חלקים עודפים של המוח, כולל החלק התחתון.
  8. הדביקו את רקמת המוח למיכל באמצעות דבק מתאים. יוצקים את תמיסת החיתוך למיכל, מוודאים שרקמת המוח מכוסה, וממשיכים לחמצן.
  9. התאם את הפרמטרים של הוויברטום כדי לפרוס את הרקמה לחלקים בעובי 300 מיקרומטר. המהירות והתדירות של הפורס ששימש במחקר זה היו 0.3 מ"מ לשנייה ו-70 הרץ, בהתאמה.
  10. השתמש במברשת כדי לבחור את פרוסות המוח ולהניח אותן בצלחת עם תמיסת התרבות. לאחר מכן, העבירו שתיים עד ארבע פרוסות על כל תוספת תרבית רקמה בגודל 30 מ"מ, 0.4 מיקרומטר בגודל נקבוביות בצלחות של 6 בארות המכילות 1.5 מ"ל מתמיסת התרבית, במרחק שאינו מאפשר לפרוסות לצמוח זו לזו.
  11. דגרו על הרקמות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2 ו-95% לחות למשך 14 שעות.

2. אוסף פרוסות מוח

  1. שאפו את מדיום התרבות מהכיסוי והעבירו בעדינות את פרוסת המוח לצינור 1.5 מ"ל בעזרת מברשת.
  2. הוסף 200-400 מיקרוליטר של תמיסת מלח מאוזנת (HBSS) של הנקס המכילה 1 ממול/ליטר פניל-מתיל-סולפוניל פלואוריד (PMSF) לשפופרת. מתנדנדים בקפדנות ומערבבים ליצירת תמיסה הומוגנית באמצעות מטחנת רקמות. התדירות והזמן ששימשו במחקר זה היו 800 הרץ ו-60 שניות, בהתאמה.
  3. צנטריפוגה את המתלה ב-700 x גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, אספו את הסופרנטנט לתוך צינור צנטריפוגה חדש של 1.5 מ"ל.
  4. הוסף 20-40 מיקרוליטר של 20% טריטון X-100 לסופרנטנט וסובב את הדגימה עם שייקר נדנדה ב-4 מעלות צלזיוס למשך שעה.
  5. צנטריפוגה את המתלים ב-13,000 x גרם למשך 20 דקות ב-4 מעלות צלזיוס ואספו את הסופרנטנט. נרמל את כל דגימות פרוסות המוח לריכוז חלבון של 2 מיקרוגרם/מיקרוליטר באמצעות ערכת בדיקת חלבון חומצה ביצינצ'ונינית (BCA).
  6. מערבבים את הסופרנטנט במאגר העמסה של נתרן דודציל סולפט (SDS) 5x (10% SDS, 10 מ"מ דיתיותרייטול [DTT], 250 מ"מ Tris-HCl [pH 6.8], 30% [v/v] גליצרול ו-0.05% [w/v] צבע כחול ברומופנול) ומרתיחים את הדגימה למשך 5 דקות ב-95 מעלות צלזיוס.
  7. מקפיאים את הדגימות המוכנות בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס. לאחר מכן הם יהיו נתונים לגילוי על ידי אלקטרופורזה ושיטות כתמים מערביות.

3. אוסף מדיום מותנה של תרבית פרוסות מוח (CM)

  1. שאפו את מדיום התרבות לאחר 14 שעות וסננו את ה-CM באמצעות פילטר של 0.22 מיקרומטר.
  2. רכז את המדיום הממוזג עד 100 מיקרוליטר עם צינור צנטריפוגה אולטרה-סינון של 10 kDa ב-9,000 x גרם למשך 50 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. נרמל את כל הדגימות הבינוניות לריכוז חלבון של 0.8 מיקרוגרם/מיקרוליטר באמצעות ערכת בדיקת החלבון BCA.
  3. יש להוציא את המדיום הממוזג במאגר טעינה SDS 5x ולהרתיח במשך 5 דקות בטמפרטורה של 95 מעלות צלזיוס.
  4. מקפיאים את הדגימות המוכנות בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס. לאחר מכן הם יהיו נתונים לגילוי על ידי אלקטרופורזה ושיטות כתמים מערביות.

4. ניתוחי כתמים מערביים

  1. הכן ג'ל נתרן דודציל-סולפט פוליאקרילאמיד ג'ל (SDS-PAGE) ג'ל כפי שתואר קודם לכן10. טען את פרוסת המוח והדגימה הבינונית על ג'ל SDS-PAGE מוכנים מראש. הפרד את הדגימות במתח קבוע של 80 וולט למשך 30 דקות בתחילה, ולאחר מכן במתח קבוע של 120 וולט למשך 70 דקות.
  2. העבירו את החלבונים לממברנות פוליווינילידן דיפלואוריד (PVDF) וחסמו עם 5% אלבומין בסרום בקר (BSA) בתמיסת מלח-טווין 20 (TBST; 150 מ"מ NaCl, 20 מ"מ טריס, 0.1% טווין-20, pH 7.4) למשך שעה אחת.
  3. הוסף נוגדנים ראשוניים ב-TBST באופן הבא: anti-sAPP-α של עכבר (יחס דילול נוגדנים של 1:5,000), אנטי-אשכולין ארנב (יחס דילול נוגדנים של 1:5,000), אנטי-MAP2 של עכבר (יחס דילול נוגדנים של 1:5,000), אנטי-GAPDH של עכבר (יחס דילול נוגדנים של 1:5,000), ואנטי-אקטין של עכבר (יחס דילול נוגדנים של 1:5,000), ודגירה למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס על נדנדה.
  4. שוטפים את הממברנה שלוש פעמים עם TBST למשך 15 דקות כל אחת.
  5. הוסף נוגדן משני מתאים במאגר TBST באופן הבא: m-IgGκ BP-HRP (דילול של 1:5,000), IgG-HRP נגד ארנב בעכבר (יחס דילול נוגדנים משני של 1:5,000). דגירה למשך 1-2 שעות.
  6. שוטפים את הממברנה שלוש פעמים באמצעות TBST למשך 15 דקות כל אחת.
  7. סרוק והדמיה את הממברנות באמצעות מערכת הדמיה מתאימה.

5. ניתוח פרוטאומי

  1. במחקר זה, אסוף את מדיום התרבית (CM) בהתאם לשלב 3.1 ולאחר מכן רכז אותו לנפח סופי של 80 מיקרוליטר באמצעות שפופרת ריכוז של 3 kDa ב-9,000 x גרם למשך 40 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. אחסן את דגימת ה-CM על קרח, ממתין לניתוח ספקטרומטריית מסה.
  2. לבצע את שיטות הזיהוי והניתוח הפרוטאומיות לדגימות בהתאם לפרוטוקולים כמתואר במאמרים קודמים 11,12,13.

תוצאות

כדי לכמת את הפרשת החלבונים החוץ-תאיים בפרוסות המוח, בחנו את ריכוזי החלבון של דגימות פרוסות המוח ודגימות מדיום מותנות באמצעות ניסויי בדיקת BCA. דגימות פרוסות מוח ודגימות מדיום מותנות היו כולן עם ריכוזי חלבון גבוהים (טבלה 1 ואיור 2). מצאנו ש...

Discussion

הפרשות המוח מתייחסות לאוסף של מולקולות איתות, הידועות כתוצרים נוירו-הפרשתיים או נוירופפטידים, המשתחררות על ידי נוירונים או תאי גליה לסביבה החוץ-תאית. הפרשות המוח ממלאות תפקידים קריטיים בתהליכים ביולוגיים ופיזיולוגיים רבים במערכת העצבים17,18...

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי אינטרסים.

Acknowledgements

מחקר זה נתמך על ידי מרכז המחקר הקליני של שנזן להפרעות נפשיות (20210617155253001), קרן שנזן להתמחויות מפתח קליניות ברמה גבוהה של מחוז גואנגדונג (SZGSPO13), ועדת החדשנות במדע וטכנולוגיה של שנזן (JCYJ20200109150700942), תוכנית המחקר והפיתוח של אזור המפתח של מחוז גואנג דונג (2019B030335001), וקרן בניית המשמעת הרפואית המרכזית של שנזן (SZXK042) אנו אסירי תודה על הסיוע של מעבדת המפתח המחוזית של גואנגדונג ביו-חומרים מתקדמים.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.22 μm Non-Sterile Millex Syringe Filters with PES MembraneMilliporeSLGPR33RB
1,4-Dithio-DL-threitol (DTT)Merck (Sigma Aldrich)DTT-RO
6-well platesCORNING3516
Actin antibodyCell Signaling Technology #3700
APP AntibodyCell Signaling Technology2452
BioRad Mini-Protean TGX precast gelsBioRad#1610185
Bovine serum albumin (BSA)Merck (Sigma Aldrich)10735094001
Bromophenol BlueMerck (Sigma Aldrich)B0126
Brush penDeli1.00008E+11
CaCl2Merck (Sigma Aldrich)C1016
CF3COOHMerck (Sigma Aldrich)302031
CH3CNMerck (Sigma Aldrich)34851
Clusterin antibodyCell Signaling Technology#42143
D-GlucoseMerck (Sigma Aldrich)G8270
Easy-nLC1200Thermo Fisher ScientificEasy-nLC1200
Filter paperROHUROHU-DLLZ00105
GAPDH antibodyCell Signaling Technology# 5174S
GlycerolMerck (Sigma Aldrich)G5516-100ML
Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS)Invitrogen (Gibco)14175095
Human/Rat NLGN2 AntibodyR&D SystemsAF5645
ICH2CONH2Merck (Sigma Aldrich)I6125
Immun-Blot PVDF membranesBIO-RAD#1620177
KClMerck (Sigma Aldrich)P3911
L-Ascorbic AcidMerck (Sigma Aldrich)A92902
Map2 antibodyCell Signaling Technology# 4542S
MgSO4Merck (Sigma Aldrich)M7506
m-IgGκ BP-HRPSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-516102
Millicell-CM 0.4 μmMilliporePIHP03050
Millipore AmiconUltra-0.5MLMilliporeUFC5010
mouse anti-rabbit IgG-HRPSANTA CRUZ BIOTECHNOLOGYsc-2357
NaH2PO4Merck (Sigma Aldrich)S0751
NaHCO3Merck (Sigma Aldrich)S5761
NH4HCO3Merck (Sigma Aldrich)A6141
ParenzymeThermo Fisher ScientificR001100
Penicillin-Streptomycin Solution(P/S)Invitrogen (Gibco)15070063
Pierce BCA Protein Assay KitThermo Fisher Scientific23225
QEactiveThermo Fisher ScientificIQLAAEGAAPFALGMAZR
Rabbit Anti-Goat IgG (H&L)-HRP ConjugatedEasybioBE0103-100
Razor bladeBFYING EAGLEHX-L146-1H
Sodium chloride NaClMerck (Sigma Aldrich)S6150
Sodium dodecylsulfate (SDS)Merck (Sigma Aldrich)V900859
Sodium PyruvateMerck (Sigma Aldrich)P2256
SpeedVac SRF110 Refrigerated Vacuum Concentrator (German)Thermo Fisher ScientificSRF110P2-115
SucroseMerck (Sigma Aldrich)G8270
Tissue grinderSCIENTZSCIENTZ-48
Tris (Hydroxymethyl)Merck (Sigma Aldrich)TRIS-RO
TritonX-100Merck (Sigma Aldrich)T8787
Tween-20Merck (Sigma Aldrich)P1379
Vibratory slicerLeicaLeica VT 1000S

References

  1. Martín-de-Saavedra, M. D., et al. Shed CNTNAP2 ectodomain is detectable in CSF and regulates Ca2+ homeostasis and network synchrony via PMCA2/ATP2B2. Neuron. 110 (4), 627-643 (2022).
  2. Jha, M. K., et al. The secretome signature of reactive glial cells and its pathological implications. Biochimica et Biophysica Acta. 1834 (11), 2418-2428 (2013).
  3. Maćkowiak, M., Mordalska, P., Wędzony, K. Neuroligins, synapse balance and neuropsychiatric disorders. Pharmacological Reports. 66 (5), 830-835 (2014).
  4. Suzuki, K., et al. Activity-dependent proteolytic cleavage of neuroligin-1. Neuron. 76 (2), 410-422 (2012).
  5. Venkatesh, H. S., et al. Targeting neuronal activity-regulated neuroligin-3 dependency in high-grade glioma. Nature. 549 (7673), 533-537 (2017).
  6. Shen, F., et al. Proteomic analysis of cerebrospinal fluid: toward the identification of biomarkers for gliomas. Neurosurgical Review. 37 (3), 367-380 (2014).
  7. Suk, K. Combined analysis of the glia secretome and the CSF proteome: neuroinflammation and novel biomarkers. Expert Review of Proteomics. 7 (2), 263-274 (2010).
  8. Pegg, C. C., He, C., Stroink, A. R., Kattner, K. A., Wang, C. X. Technique for collection of cerebrospinal fluid from the cisterna magna in rat. Journal of Neuroscience Methods. 187 (1), 8-12 (2010).
  9. Bossu, J. L., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Gähwiler, B. H. Somatic voltage-gated potassium currents of rat hippocampal pyramidal cells in organotypic slice cultures. The Journal of Physiology. 495, 367-381 (1996).
  10. Hirano, S. Western blot analysis. Methods in Molecular Biology. 926, 87-97 (2012).
  11. Davey, J. R., et al. Integrated expression analysis of muscle hypertrophy identifies Asb2 as a negative regulator of muscle mass. Journal of Clinical Investigation Insight. 1 (5), e85477 (2016).
  12. Ren, H., et al. Identification of TPD52 and DNAJB1 as two novel bile biomarkers for cholangiocarcinoma by iTRAQ-based quantitative proteomics analysis. Oncology Reports. 42 (6), 2622-2634 (2019).
  13. Li, J., et al. Identification and characterization of 293T cell-derived exosomes by profiling the protein, mRNA and MicroRNA components. PLoS One. 11 (9), 0163043 (2016).
  14. Kuhn, P. H., et al. Systematic substrate identification indicates a central role for the metalloprotease ADAM10 in axon targeting and synapse function. eLife. 5, e12748 (2016).
  15. Chiasserini, D., et al. Proteomic analysis of cerebrospinal fluid extracellular vesicles: a comprehensive dataset. Journal of Proteomics. 106, 191-204 (2014).
  16. Dislich, B., et al. Label-free quantitative proteomics of mouse cerebrospinal fluid detects β-site APP cleaving enzyme (BACE1) protease substrates in vivo. Molecular and Cellular Proteomics. 14 (10), 2550-2563 (2015).
  17. Chenau, J., Michelland, S., Seve, M. Secretome: definitions and biomedical interest. La Revue de Médecine Interne. 29 (7), 606-608 (2008).
  18. Assunção-Silva, R. C., et al. Exploiting the impact of the secretome of MSCs isolated from different tissue sources on neuronal differentiation and axonal growth. Biochimie. 155, 83-91 (2018).
  19. Ardianto, C., et al. Secretome as neuropathology-targeted intervention of Parkinson's disease. Regenerative Therapy. 21, 288-293 (2022).
  20. Willis, C. M., Nicaise, A. M., Peruzzotti-Jametti, L., Pluchino, S. The neural stem cell secretome and its role in brain repair. Brain Research. 1729, 146615 (2020).
  21. Pandamooz, S., et al. Modeling traumatic injury in organotypic spinal cord slice culture obtained from adult rat. Tissue and Cell. 56, 90-97 (2019).
  22. Peixoto, R. T., et al. Transsynaptic signaling by activity-dependent cleavage of neuroligin-1. Neuron. 76 (2), 396-409 (2012).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

ex vivoSDS PAGE

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved