השפעות של מצבי חיבור שונים של אלקטרוקופונקטורה על אלקטרוקרדיוגרמה והפרשות עצביות בחולדות

Summary

עד כה, אין שיטה אחידה לחיבור אלקטרו-אקופונקטורה במחקר קליני ובסיסי. אנו מציגים פרוטוקול שניסה להשוות את ההשפעות של שיטות חיבור שונות על אלקטרוקרדיוגרמה (ECG) ופריקה עצבית בחולדות כדי לחקור את הדרך המתאימה ביותר לחבר את מכשיר האלקטרו-אקופונקטורה.

Abstract

אלקטרו אקופונקטורה (EA) היא אחת השיטות הנפוצות ביותר בדיקור סיני ויש לה השפעה טובה על כאב, דיכאון, הפרעות תנועה חושיות ומחלות אחרות. היעילות של EA מושפעת מגורמים רבים, כגון דיוק בחירת נקודת הדיקור, משך ומהלך הטיפול ב-EA ופרמטרים של EA. עם זאת, לעתים רחוקות נדון האם לאלקטרודות החיוביות והשליליות של מכשיר ה-EA עם נקודות דיקור במיקומים ומרחקים שונים יש השפעה על האפקט המרפא. בניסוי זה, צפינו בהשפעות של חיבור מכשיר ה-EA לנקודות דיקור במיקומים ומרחקים שונים על א.ק.ג ופריקת עצבים מעורפלים בחולדות והסברנו מראש אם לשדה החשמלי שנוצר על ידי מצבים שונים של חיבור EA יש השפעה על תפקוד הגוף. מצבי החיבור של EA בניסוי זה כללו את אותן נקודות דיקור משני צידי הגוף, אותו מרידיאן או נקודות דיקור מרידיאניות שונות באותו צד של הגוף, ושתי מחטים באותו אזור דיקור. התוצאות הראו שכאשר הקוטב החיובי והשלילי חוברו לנקודות הדיקור משני צידי הגוף, הרישום של פעילות האק"ג והעצב הוואגלי הופרע (אותן גפיים קדמיות ואחוריות); כאשר נקודות הדיקור היו מחוברות באותו צד של הגוף, ככל שהמרחק בין שתי המחטים קטן יותר, כך ההשפעה על א.ק.ג ורישום פעילות עצבית נרתיקית קטנה יותר, וההשפעה גדלה עם הגדלת הזרם; כאשר נקודות הדיקור היו באותו אזור דיקור, רישום האק"ג ופעילות העצב הוואגלי לא הופרע אם שתי המחטים לא יצרו קצר חשמלי.

Introduction

אלקטרו אקופונקטורה (EA) הוא סוג של טיפול בדיקור סיני לטיפול במחלות על ידי הפעלת פלט זרם פועם ממכשיר לנקודות מרידיאניות בגוף האדם. ל-EA יתרונות של פרמטרי גירוי יציבים ומתכווננים, הניתנים לכימות, תזמון וחיסכון בעבודה, ויש לה יתרונות מיוחדים בטיפול ומחקר מדעי במחלות מסוימות, כגון חקר מנגנון הטיפול בהרדמה של נוירלגיה ודיקור שונים, שיכוך כאבים בדיקור וכן הלאה¹.

גורמים מסוימים משפיעים על היעילות של EA, כגון דיוק נקודת הדיקור, משך הטיפול ופרמטרים של EA, כגון צורת גל, עוצמת דופק ותדירות. ה- EA הקליני הנפוץ הוא EA דו-כיווני, הגורם פחות נזק לרקמות ומפריע פחות לתפקודים הפיזיולוגיים הרגילים של גוף האדם. זה יכול גם למנוע ולרפא מחלות. רקמות אנושיות הן מוליכות של אלקטרוליטים מורכבים המורכבים ממים, מלחים אנאורגניים וקולואידים טעונים². כאשר EA מופעל על גוף האדם, החלקיקים הטעונים בשדה החשמלי ינועו ויגרמו לשינויים בריכוז ובפיזור המשפיעים על תפקוד גוף האדם. שינויים בתנועה, בריכוז ובהתפלגות החלקיקים הם הבסיס לטיפול ב-EA¹.

במהלך העשור האחרון, מספר מחקרי EA גדל עבור מספר מחלות ^1,2,3. לגבי הקשר בין האלקטרודות החיוביות והשליליות של EA, מעט מחקרים נערכו כדי להבהיר זאת בפירוט. במהלך EA, יש לחבר את האלקטרודות החיוביות והשליליות במכשיר ה-EA לשתי מחטי דיקור כדי לשמש כגירוי חשמלי. נכון לעכשיו, המצבים הנפוצים הם כדלקמן: שתי מחטים בכל צד של הגוף מחוברות לאותן נקודות דיקור, ונקודות דיקור שונות באותו צד של הגוף מחוברות¹. עם זאת, יעילותן של שיטות חיבור אלה טרם הוכחה. חלק מהמדענים העריכו כי לא ניתן לחבר את שתי המחטים בכל צד של הגוף לקוטב החיובי והשלילי; אחרת, הזרם ישפיע על תפקוד הלב, אך ניתן לחבר את שתי הנקודות השונות באותו צד של הגוף לקוטב החיובי והשלילי³. חלק מהחוקרים מאמינים כי יש להשתמש במחטי דיקור המחברות בין האלקטרודות החיוביות והשליליות באזור נקודת הדיקור הבודדת כדי ליצור גירוי חשמלי בנקודת הדיקור כדי לקדם חישת מרידיאן².

אלקטרו אקופונקטורה בנקודות דיקור שונות יכולה להפעיל או לעכב פריקה עצבית ^4,5. מחקרים רבים מסבירים את ההשפעה המגרה של EA ב-Tsusanli (ST36) על עצב התועה ^6,7,8. עם זאת, מחקרים אלה לא הרחיבו על הקשר של EA ולא הסבירו את ההבדלים בהשפעות של אופנים שונים של חיבור EA. בהתחשב בפער במחקר זה, מחקר זה השתמש בטכניקות אלקטרופיזיולוגיות כדי להסביר את ההשפעות של קשרי EA שונים על א.ק.ג ופעילות עצבית. התוצאות מספקות ראיות נוספות לחיבור הנכון של ה-EA.

Protocol

פרוטוקול ניסיוני זה אושר על ידי סקירת האתיקה הסטנדרטית של חיות מעבדה של אוניברסיטת בייג'ינג לרפואה סינית מסורתית ונערך בהתאמה מלאה לפרוטוקול הניסוי (קוד סקירה אתית: BUCM-2023110901-4046).

1. בעלי חיים וקיבוץ

1. חיות
   1. השג 48 חולדות זכרים בריאים עם SPF (בני 8 שבועות) במשקל של כ-200-240 גרם.
      הערה: עבור מחקר זה, החיות סופקו על ידי חברת Vital River [מספר רישיון: SYXK (Beijing) 2020-0033].
   2. אכלס את כל החולדות במרכז הניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת בייג'ינג לרפואה סינית מסורתית. במהלך הניסוי, ודאו שלחולדות יש גישה חופשית למזון ולמים.
   3. שמור על סביבת ההזנה המבוססת על שינוי קצב צירקדי של 12 שעות ושלוט בטמפרטורת הסביבה ב-23 ±-2 מעלות צלזיוס.
   4. משרים את כל המכשירים הכירורגיים ב-75% אלכוהול וחיטוי. עקר את חדרי הטיפול בבעלי חיים עם מנורות UV.
   5. בצע את כל הניתוחים בבעלי חיים בהרדמה. להרדים את החולדה עם 20% הזרקת אורטן תוך צפקית (1 גרם/ק"ג) ולוודא שהחולדה ממשיכה לנשום באופן ספונטני.
   6. שמור על טמפרטורת הגוף של החולדה על 37 מעלות צלזיוס עם לוחות תרמוסטטיים במהלך הניתוח.
   7. שמור על עיני החולדה לחות עם משחת אריתרומיצין במהלך הניסוי.
   8. ערפו את ראשי החולדות והורגים אותן בהרדמה בסוף הניסוי ואחסנו את הדגימות/דגימות לפי הצורך.
2. קבוצות
   1. קבצו את החולדות באופן אקראי לפי מצבי החיבור. הקצו 8 חולדות לכל קבוצה באופן אקראי.
   2. קבוצת ביקורת (ללא דיקור): האכילו את החולדה כרגיל ללא כל טיפול.
   3. קבוצה A, נקודת דיקור בודדת בקבוצת הגפה הקדמית השמאלית: חבר את אלקטרודות ה-EA החיוביות והשליליות לנקודת Quchi ו-3 מ"מ מנקודת Quchi, בהתאמה (ראה איור 1A). אתר את נקודת הקוצ'י (LI11) בשקע הקדמי הצדדי של מפרק המרפק והכנס את המחט בניצב לעומק של ~5 מ"מ לאחר המיקום.
   4. קבוצה B, שתי נקודות דיקור בקבוצת הגפיים הקדמיות השמאליות: חברו את אלקטרודות ה-EA החיוביות והשליליות לנקודות Quchi (LI11) ו-Waiguan (TE5), בהתאמה (ראו איור 1B). אתר את נקודת ה-Waiguan (TE5) מחוץ לנקודת ה-1/6 התחתונה של האמה בתפרים הרדיאליים והאולנריים. הכנס את המחט לעומק של 2 מ"מ.
   5. קבוצה C, שתי נקודות הדיקור בקבוצת הגפיים הקדמיות והאחוריות השמאליות: חברו את האלקטרודות החיוביות והשליליות של EA לקוצ'י (LI11) ולצוסנלי (ST36) (ראו איור 1C). אתר את נקודת הצוסאנלי (ST36) 5 מ"מ מתחת לראש הסיבי והאחורי לברך והכנס את המחט בניצב לעומק של ~1 ס"מ.
   6. קבוצה D, אותן נקודות דיקור בשתי הגפיים האחוריות: חבר את אלקטרודות ה-EA החיוביות והשליליות עם Tsusanli דו-צדדי (ST36) (ראה איור 1D).
   7. קבוצה E, אותן נקודות דיקור בשתי הגפיים הקדמיות: חברו את האלקטרודות החיוביות והשליליות של EA לקוצ'י דו-צדדי (ראו איור 1E).

2. חיבור א.ק.ג

1. רסנו את החולדות במצב שכיבה לאחר הרדמה יסודית.
2. הכנס מחטי דיקור בגודל 1/2 אינץ' במקביל לעור פרק כף היד הימני הקדמי, הגפה האחורית הימנית והגפה האחורית השמאלית של החולדות, הימנע מהשריר.
3. חברו את ידיות המחט לאלקטרודות ההקלטה: האלקטרודה החיובית (הלבנה) בגפה הקדמית הימנית, האלקטרודה השלילית (האדומה) בגפה האחורית השמאלית, ואלקטרודת הייחוס (שחורה) לגפה האחורית הימנית של החולדה (ראו איור 2).
4. השתמש במקליט אותות פיזיולוגי כדי להקליט את א.ק.ג פני השטח הסטנדרטי של חולדות בזמן אמת (קצב דגימה: 1 קילו-הרץ, טווח סינון: מסנן חתך נמוך, 200 הרץ; מסנן חיתוך גבוה, 0.8 הרץ).

3. הפרדת עצב הנרתיק ורישום אותות הפריקה הנרתיקית

1. בצע חתך של 2-4 ס"מ לאורך קו האמצע של הצוואר בין הגרון לעצם החזה לאחר קיבוע שכיבה של החולדות המורדמות.
2. חתכו את גזע העצב התועה הימני בכ-1-2 ס"מ לאחר איתור מעטפת הצוואר הימנית (המכילה את עורק הצוואר, עצב הנרתיק והשרשרת הסימפתטית) (ראו איור 3A).
   הערה: העצב הסימפתטי ממוקם לרוחב עורק הצוואר ומלווה את עצב הנרתיק. העצב הסימפתטי של צוואר הרחם דק בהשוואה לעצב הנרתיק.
3. חבר את תא המטען עם זוג אלקטרודות וו נחושת והדק את אלקטרודת הייחוס לחתך כדי למנוע הפרעות. השתמשו במי מלח כדי לשמור על פעילות עצב התועה לאורך כל הניסוי (ראו איור 3B).
4. מכסים את פצע פני השטח בשמן מינרלי כדי לשמור על בידוד בין האלקטרודה לשריר.
5. השתמש במקליט אותות פיזיולוגי כדי להקליט את הפרשות העצבים של החולדות בזמן אמת (קצב דגימה: 5 קילו-הרץ, טווח סינון: מסנן חתך נמוך, 100 הרץ; מסנן חתך גבוה, 1000 הרץ).

4. התערבות EA

הערה: דיקור סיני של החולדות לאחר האק"ג והפרשות עצב התועה היו יציבים.

1. חבר את שתי ידיות המחט בנפרד לתפסי המחט של מכשיר ה-EA.
2. הגדר את גירוי ה-EA לגל מרובע דו-כיווני ברוחב גל של 0.3 אלפיות השנייה. הגדירו את עוצמת הגירוי ל-0.2 mA, את התדר ל-10 הרץ ואת זמן הגירוי ל-20 דקות.
3. התבונן בשינויים באק"ג ובפריקת העצבים של חולדות במצבי חיבור שונים של EA בזמן אמת. אסוף את הנתונים במשך 30 שניות ללא כל גירוי, 30 שניות לפני EA ו-30 שניות לאחר EA באמצעות מקליט האותות הפיזיולוגי.
4. רשום את השינויים בקצב הלב, צורות הגל של א.ק.ג והפרשות הנרתיק של החולדות באמצעות תוכנת הקלטה.

5. ניתוח סטטיסטי של נתונים

1. להשוות את השינויים באק"ג ובהפרשות עצביות בחולדות במצבים שונים של חיבור EA (לפני ואחרי EA).
2. בטא את כל נתוני הניסוי כממוצע ± שגיאת תקן.
3. בצע את מבחן ה-t של התלמיד כאשר הנתונים עוברים את מבחן ההתפלגות הנורמלית. בצע מבחן t של דגימות זוגיות כדי להשוות את השינויים לפני ואחרי EA ולשקול את p < 0.05 כמובהקות סטטיסטית.

תוצאות

השפעות של מצבי חיבור EA שונים על א.ק.ג בחולדות
בקבוצת הביקורת, האק"ג של חולדות רגילות נרשם (ראו איור 4A). נמצא כי תנאי הבסיס של החולדות היו שונים באופן משמעותי. קצב הלב של החולדות נע בין 258 ל-473 פעימות לדקה (ראה טבלה משלימה 1)...

Discussion

בניסוי זה צפינו בהשפעות של הדרכים השונות לחיבור האלקטרודות החיוביות והשליליות, כולל קצב הלב, תדירות פעילות העצב הוואגלי ומשרעת הפריקה. התוצאות הראו שכאשר הקוטב החיובי והקוטב השלילי היו מחוברים לשתי הגפיים הקדמיות של הגוף, זה השפיע על פליטת הביו-חשמל. כאשר הקוטב החיובי ו...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accupuncture Needle	Hwato	N/A
BL-420N physiological signal recorder	Techman	LAB-0017-0002-CDTM
Electroacupucture instrument	HANS	200A
Erythromycin ointment	Shuangji	N/A
Mineral oil	Solarbio	8012-95-1
Thermostatic rat plate	Techman	JR-30