Effetti di diverse modalità di connessione dell'elettroagopuntura sull'elettrocardiogramma e sulla scarica nervosa nei ratti

Riepilogo

Fino ad ora, non esiste un metodo uniforme per la connessione dell'elettroagopuntura nella ricerca clinica e di base. Presentiamo un protocollo che ha tentato di confrontare gli effetti di diversi metodi di connessione sull'elettrocardiogramma (ECG) e sulla scarica neurale nei ratti per esplorare il modo più appropriato per collegare lo strumento di elettroagopuntura.

Abstract

L'elettroagopuntura (EA) è uno dei metodi più comunemente usati in agopuntura e ha un buon effetto su dolore, depressione, disturbi del movimento sensoriale e altre malattie. L'efficacia dell'EA è influenzata da molti fattori, come l'accuratezza della selezione dei punti di agopuntura, la durata e il decorso del trattamento con EA e i parametri EA. Tuttavia, è stato raramente discusso se gli elettrodi positivi e negativi dello strumento EA con agopunti in diverse posizioni e distanze abbiano un effetto sull'effetto curativo. In questo esperimento, abbiamo osservato gli effetti del collegamento dello strumento EA ai punti di agopuntura a diverse posizioni e distanze sull'ECG e sulla scarica nervosa vaga nei ratti e abbiamo spiegato preliminarmente se il campo elettrico formato da diverse modalità di connessione EA ha un effetto sulla funzione del corpo. Le modalità di connessione di EA in questo esperimento includevano gli stessi punti di agopuntura su entrambi i lati del corpo, lo stesso meridiano o diversi punti di agopuntura meridiani sullo stesso lato del corpo e due aghi nella stessa area di agopuntura. I risultati hanno mostrato che quando i poli positivo e negativo erano collegati ai punti di agopuntura su entrambi i lati del corpo, la registrazione dell'ECG e l'attività del nervo vagale erano disturbati (gli stessi arti anteriori e posteriori); quando i punti di agopuntura erano collegati sullo stesso lato del corpo, minore era la distanza tra i due aghi, minore era l'effetto sull'ECG e sulla registrazione dell'attività del nervo vagale e l'effetto aumentava con l'aumentare della corrente; quando i punti di agopuntura si trovavano nella stessa area di agopuntura, la registrazione dell'ECG e dell'attività del nervo vagale non veniva disturbata se i due aghi non formavano un cortocircuito.

Introduzione

L'elettroagopuntura (EA) è un tipo di terapia di agopuntura per il trattamento delle malattie che consiste nell'applicare la corrente pulsata emessa da uno strumento ai punti meridiani del corpo umano. EA presenta i vantaggi di parametri di stimolazione stabili e regolabili, che possono essere quantificati, temporizzati e con risparmio di manodopera, e presenta vantaggi speciali nel trattamento e nella ricerca scientifica di alcune malattie, come lo studio del meccanismo di trattamento per varie nevralgie e anestesia di agopuntura, analgesia di agopuntura e così via¹.

Alcuni fattori influenzano l'efficacia dell'EA, come l'accuratezza dei punti di agopuntura, la durata del trattamento e i parametri EA, come la forma d'onda, l'intensità dell'impulso e la frequenza. L'EA clinico comunemente usato è un EA a due vie, che provoca meno danni ai tessuti e interferisce meno con le normali funzioni fisiologiche del corpo umano. Può anche prevenire e curare le malattie. I tessuti umani sono conduttori di elettroliti complessi composti da acqua, sali inorganici e colloidi carichi². Quando l'EA viene applicato al corpo umano, le particelle cariche nel campo elettrico si muoveranno e causeranno cambiamenti nella concentrazione e nella distribuzione che influenzano la funzione del corpo umano. I cambiamenti nel movimento, nella concentrazione e nella distribuzione delle particelle sono alla base della terapia EA¹.

Nell'ultimo decennio, il numero di studi EA è aumentato per un certo numero di malattie ^1,2,3. Per quanto riguarda la connessione degli elettrodi positivo e negativo dell'EA, sono stati condotti pochi studi per chiarirlo in dettaglio. Durante l'EA, gli elettrodi positivo e negativo sullo strumento EA devono essere collegati a due aghi per agopuntura per fungere da stimolazione elettrica. Attualmente, le modalità comuni sono le seguenti: due aghi su ciascun lato del corpo sono collegati agli stessi agopunti e diversi agopunti sullo stesso lato del corpo sono collegati¹. Tuttavia, l'efficacia di questi metodi di connessione deve ancora essere dimostrata. Alcuni scienziati hanno stimato che i due aghi su ciascun lato del corpo non possono essere collegati ai poli positivo e negativo; In caso contrario, la corrente influenzerebbe la funzione cardiaca, ma i due punti diversi sullo stesso lato del corpo possono essere collegati ai poli positivo e negativo³. Alcuni ricercatori ritengono che gli aghi per agopuntura che collegano gli elettrodi positivo e negativo dovrebbero essere utilizzati nell'area del singolo punto di agopuntura per formare una stimolazione elettrica nel punto di agopuntura per promuovere il rilevamento dei meridiani².

L'elettroagopuntura in vari punti di agopuntura può attivare o inibire la scarica nervosa ^4,5. Molti studi spiegano l'effetto stimolante dell'EA in Tsusanli (ST36) sul nervo vago ^6,7,8. Tuttavia, questi studi non hanno elaborato la connessione di EA e non hanno spiegato le differenze negli effetti delle diverse modalità di connessione EA. Data la lacuna in questa ricerca, questo studio ha utilizzato tecniche elettrofisiologiche per spiegare gli effetti di diverse connessioni EA sull'ECG e sull'attività nervosa. I risultati forniscono ulteriori prove della corretta connessione dell'EA.

Protocollo

Questo protocollo sperimentale è stato approvato dalla Standardized Laboratory Animal Ethics Review dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese di Pechino ed è stato condotto in piena conformità con il protocollo sperimentale (Codice di revisione etica: BUCM-2023110901-4046).

1. Animali e raggruppamento

1. Animali
   1. Procurati 48 ratti maschi sani con SPF (8 settimane) del peso di circa 200-240 g.
      NOTA: Per questo studio, gli animali sono stati forniti dalla Vital River Company [Numero di licenza: SYXK (Pechino) 2020-0033].
   2. Ospita tutti i ratti nel Centro Sperimentale Animale dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese di Pechino. Durante l'esperimento, assicurarsi che i ratti abbiano libero accesso al cibo e all'acqua.
   3. Mantenere l'ambiente di alimentazione in base a uno spostamento del ritmo circadiano di 12 ore e controllare la temperatura ambiente a 23 ± 2 °C.
   4. Immergere tutti gli strumenti chirurgici in alcool al 75% e in autoclave. Sterilizzare le sale di manipolazione degli animali con lampade UV.
   5. Eseguire tutti gli interventi chirurgici sugli animali in anestesia. Anestetizzare il ratto con un'iniezione intraperitoneale di uretano al 20% (1 g/kg) e assicurarsi che il ratto continui a respirare spontaneamente.
   6. Mantenere la temperatura corporea del ratto a 37 °C con piastre termostatiche durante l'intervento chirurgico.
   7. Mantieni gli occhi del ratto umidi con unguento all'eritromicina durante l'esperimento.
   8. Decapitare e uccidere i ratti sotto anestesia alla fine dell'esperimento e conservare i campioni/campioni secondo necessità.
2. Gruppi
   1. Raggruppa i ratti in modo casuale in base alle modalità di connessione. Assegna 8 ratti a ciascun gruppo in modo casuale.
   2. Gruppo di controllo (senza agopuntura): nutrire il topo normalmente senza alcun trattamento.
   3. Gruppo A, agopunto singolo nel gruppo degli arti anteriori sinistri: collegare gli elettrodi EA positivo e negativo rispettivamente al punto Quchi e a 3 mm dal punto Quchi (vedi Figura 1A). Individuare il punto Quchi (LI11) nella depressione anteriore laterale dell'articolazione del gomito e inserire l'ago perpendicolarmente a una profondità di ~5 mm dopo il posizionamento.
   4. Gruppo B, due agopunti nel gruppo degli arti anteriori sinistri: collegare gli elettrodi EA positivo e negativo rispettivamente ai punti Quchi (LI11) e Waiguan (TE5) (vedi Figura 1B). Individuare il punto Waiguan (TE5) al di fuori del punto inferiore di 1/6 di piega dell'avambraccio nelle suture radiali e ulnari. Inserire l'ago a una profondità di 2 mm.
   5. Gruppo C, i due agopunti nel gruppo degli arti anteriori e posteriori sinistri: collegare gli elettrodi EA positivi e negativi a Quchi (LI11) e Tsusanli (ST36) (vedi Figura 1C). Individuare il punto Tsusanli (ST36) 5 mm sotto la testa del perone e posterolateralmente al ginocchio e inserire l'ago perpendicolarmente a una profondità di ~1 cm.
   6. Gruppo D, gli stessi agopunti in entrambi gli arti posteriori: collegare gli elettrodi EA positivo e negativo con Tsusanli bilaterale (ST36) (vedi Figura 1D).
   7. Gruppo E, gli stessi agopunti su entrambi gli arti anteriori: collegare gli elettrodi EA positivo e negativo al Quchi bilaterale (vedi Figura 1E).

2. Connessione ECG

1. Trattenere i ratti in posizione supina dopo essere stati accuratamente anestetizzati.
2. Inserire aghi per agopuntura da 1/2 pollice paralleli alla pelle del polso dell'arto anteriore destro, dell'arto posteriore destro e dell'arto posteriore sinistro dei ratti, evitando il muscolo.
3. Collegare le impugnature dell'ago agli elettrodi di registrazione: l'elettrodo positivo (bianco) sull'arto anteriore destro, l'elettrodo negativo (rosso) sull'arto posteriore sinistro e l'elettrodo di riferimento (nero) sull'arto posteriore destro del ratto (vedere la Figura 2).
4. Utilizzare un registratore di segnali fisiologici per registrare in tempo reale l'ECG di superficie standard dell'elettrocatetere II degli arti dei ratti (frequenza di campionamento: 1 KHz, intervallo di filtraggio: filtro low-cut, 200 Hz; filtro high-cut, 0,8 Hz).

3. Separazione del nervo vago e registrazione dei segnali di secrezione vagale

1. Praticare un'incisione di 2-4 cm lungo la linea mediana del collo tra la laringe e lo sterno dopo la fissazione supina dei ratti anestetizzati.
2. Recidere il tronco del nervo vago destro di circa 1-2 cm dopo aver individuato la guaina carotide destra (contenente l'arteria carotide, il nervo vago e la catena simpatica) (vedi Figura 3A).
   NOTA: Il nervo simpatico si trova lateralmente all'arteria carotide e accompagna il nervo vago. Il nervo simpatico cervicale è sottile rispetto al nervo vago.
3. Collegare il tronco nervoso con una coppia di elettrodi a uncino in rame e bloccare l'elettrodo di riferimento all'incisione per eliminare le interferenze. Utilizzare soluzione fisiologica per mantenere l'attività del nervo vago durante l'esperimento (vedere Figura 3B).
4. Coprire la superficie avvolta con olio minerale per mantenere l'isolamento tra l'elettrodo e il muscolo.
5. Utilizzare un registratore di segnali fisiologici per registrare le secrezioni nervose dei ratti in tempo reale (frequenza di campionamento: 5 KHz, intervallo di filtraggio: filtro low-cut, 100 Hz; filtro high-cut, 1000 Hz).

4. Intervento EA

NOTA: L'agopuntura dei ratti dopo l'ECG e la secrezione del nervo vago erano stabili.

1. Collegare le due maniglie dell'ago separatamente alle clip dell'ago dello strumento EA.
2. Impostare la stimolazione EA su un'onda quadra bidirezionale con un'ampiezza d'onda di 0,3 ms. Impostare l'intensità della stimolazione su 0,2 mA, la frequenza su 10 Hz e il tempo di stimolazione su 20 min.
3. Osserva in tempo reale i cambiamenti nell'ECG e nella scarica nervosa dei ratti in diverse modalità di connessione di EA. Raccogli i dati per 30 s senza alcuna stimolazione, 30 s prima di EA e 30 s dopo EA utilizzando il registratore di segnali fisiologici.
4. Registra i cambiamenti nella frequenza cardiaca, nelle forme d'onda ECG e nelle scariche vagali dei ratti utilizzando il software di registrazione.

5. Analisi statistica dei dati

1. Confrontare i cambiamenti nell'ECG e nella scarica nervosa nei ratti in diverse modalità di connessione EA (prima e dopo EA).
2. Esprimere tutti i dati sperimentali come media ± errore standard.
3. Eseguire il t-test di Student quando i dati superano il normale test di distribuzione. Eseguire un test t su campioni accoppiati per confrontare i cambiamenti prima e dopo EA e considerare p < 0,05 come statisticamente significativo.

Risultati

Effetti di diverse modalità di connessione EA sull'ECG nei ratti
Nel gruppo di controllo, è stato registrato l'ECG di ratti normali (vedi Figura 4A). È stato riscontrato che le condizioni di base dei ratti erano significativamente diverse. La frequenza cardiaca dei ratti variava da 258 a 473 bpm (vedi Tabella supplementare 1).

Discussione

In questo esperimento, abbiamo osservato gli effetti dei diversi modi di collegare gli elettrodi positivi e negativi, tra cui la frequenza cardiaca, la frequenza di attività del nervo vagale e l'ampiezza di scarica. I risultati hanno mostrato che quando i poli positivo e negativo erano collegati a entrambi gli arti anteriori del corpo, influenzavano l'emissione di bioelettricità. Quando i poli positivo e negativo erano collegati allo stesso lato del corpo, più vicina era la distanza t...

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accupuncture Needle	Hwato	N/A
BL-420N physiological signal recorder	Techman	LAB-0017-0002-CDTM
Electroacupucture instrument	HANS	200A
Erythromycin ointment	Shuangji	N/A
Mineral oil	Solarbio	8012-95-1
Thermostatic rat plate	Techman	JR-30