Влияние различных режимов подключения электроакупунктуры на электрокардиограмму и нервный разряд у крыс

Резюме

До сих пор не существует единого метода подключения электроакупунктуры в клинических и фундаментальных исследованиях. Мы представили протокол, в котором была предпринята попытка сравнить влияние различных методов подключения на электрокардиограмму (ЭКГ) и нервный разряд у крыс, чтобы изучить наиболее подходящий способ подключения электроакупунктурного инструмента.

Аннотация

Электроакупунктура (ЭА) является одним из наиболее часто используемых методов в иглоукалывании и хорошо влияет на боль, депрессию, сенсорно-двигательные расстройства и другие заболевания. На эффективность ЭА влияет множество факторов, таких как точность выбора акупунктурных точек, продолжительность и курс лечения ЭА, а также параметры ЭА. Тем не менее, редко обсуждается, влияют ли положительные и отрицательные электроды прибора ЭА с акупунктурными точками в разных местах и расстояниях на лечебный эффект. В данном эксперименте мы наблюдали влияние подключения прибора ЭА к акупунктурным точкам в разных положениях и на разных расстояниях на ЭКГ и расплывчатый нервный разряд у крыс и предварительно объяснили, влияет ли на функцию организма электрическое поле, формируемое разными режимами связи ЭА. Режимы подключения ЭА в этом эксперименте включали в себя одни и те же акупунктурные точки с обеих сторон тела, один и тот же меридиан или разные акупунктурные точки меридианов на одной и той же стороне тела, а также две иглы в одной и той же области акупунктурных точек. Результаты показали, что когда положительный и отрицательный полюса были соединены с акупунктурными точками с обеих сторон тела, нарушалась запись ЭКГ и активность блуждающего нерва (те же передние и задние конечности); когда акупунктурные точки были соединены на одной стороне тела, чем меньше расстояние между двумя иглами, тем меньше влияние на ЭКГ и запись активности блуждающего нерва, причем эффект усиливался с увеличением тока; когда акупунктурные точки находились в одной и той же зоне акупунктурных точек, запись ЭКГ и активности блуждающего нерва не нарушалась, если две иглы не образовывали короткого замыкания.

Введение

Электроакупунктура (ЭА) – это разновидность акупунктурной терапии для лечения заболеваний путем подачи импульсного тока, выходящего от инструмента, в меридианные точки тела человека. ЭА обладает преимуществами стабильных и регулируемых параметров стимуляции, которые могут быть количественно определены, рассчитаны по времени и трудосберегающими, а также имеет особые преимущества при лечении и научных исследованиях некоторых заболеваний, таких как изучение механизма лечения различных невралгий и акупунктурных анестезий, акупунктурная анальгезия^{и так далее}.

На эффективность ЭА влияют некоторые факторы, такие как точность акупунктурных точек, продолжительность лечения и параметры ЭА, такие как форма сигнала, интенсивность и частота импульса. Обычно используемая клиническая ЭА представляет собой двустороннюю ЭА, которая вызывает меньшее повреждение тканей и меньше вмешивается в нормальные физиологические функции человеческого организма. Он также может предотвращать и лечить болезни. Ткани человека являются проводниками сложных электролитов, состоящих из воды, неорганических солей и заряженных коллоидов². Когда ЭА применяется к человеческому телу, заряженные частицы в электрическом поле будут двигаться и вызывать изменения в концентрации и распределении, которые влияют на функции человеческого организма. Изменения в движении, концентрации и распределении частиц являются основой ЭА-терапии¹.

За последнее десятилетие увеличилось количество исследований ЭА по ряду заболеваний ^1,2,3. Что касается соединения положительного и отрицательного электродов ЭА, то для детального уточнения этого было проведено мало исследований. Во время ЭА положительный и отрицательный электроды на инструменте ЭА должны быть соединены с двумя акупунктурными иглами, чтобы они действовали как электрическая стимуляция. В настоящее время распространенные режимы следующие: две иглы с каждой стороны тела соединяются с одними и теми же акупунктурными точками, а разные акупунктурные точки на одной и той же стороне тела подключаются¹. Однако эффективность этих способов подключения еще предстоит доказать. Некоторые ученые подсчитали, что две иглы с каждой стороны тела не могут быть соединены с положительным и отрицательным полюсами; В противном случае ток повлияет на работу сердца, но две разные точки на одной и той же стороне тела могут быть соединены с положительным и отрицательным полюсами^. Некоторые исследователи считают, что акупунктурные иглы, соединяющие положительные и отрицательные электроды, должны использоваться в одной акупунктурной области для формирования электрической стимуляции в акупунктурной точке для стимулирования восприятия меридианов².

Электроакупунктура в различных акупунктурных точках может активировать или подавлять нервный разряд ^4,5. Многие исследования объясняют стимулирующее действие ЭА при Цусанли (ST36) на блуждающий нерв ^6,7,8. Однако в этих исследованиях не было подробно рассмотрено подключение советника и не объяснены различия в эффектах различных режимов подключения советника. Учитывая пробел в этом исследовании, в этом исследовании использовались электрофизиологические методы для объяснения влияния различных связей EA на ЭКГ и нервную активность. Полученные результаты являются еще одним доказательством правильности подключения советника.

протокол

Этот экспериментальный протокол был одобрен Стандартизированным обзором этики лабораторных животных Пекинского университета традиционной китайской медицины и проводился в полном соответствии с протоколом эксперимента (Код этического обзора: BUCM-2023110901-4046).

1. Животные и группировка

1. Животные
   1. Получить 48 здоровых самцов SPF крыс (8-недельного возраста) массой примерно 200-240 г.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для этого исследования животные были предоставлены компанией Vital River [номер лицензии: SYXK (Пекин) 2020-0033].
   2. Разместите всех крыс в Экспериментальном центре животных Пекинского университета традиционной китайской медицины. Во время эксперимента следите за тем, чтобы крысы имели свободный доступ к пище и воде.
   3. Поддерживайте среду кормления на основе сдвига циркадного ритма в течение 12 часов и контролируйте температуру окружающей среды на уровне 23 ± 2 °C.
   4. Замочите все хирургические инструменты в 75% спирте и автоклаве. Стерилизуйте помещения для содержания животных с помощью ультрафиолетовых ламп.
   5. Выполняйте все операции на животных под наркозом. Обезболите крысу с помощью 20% внутрибрюшинной инъекции уретана (1 г/кг) и обеспечьте самопроизвольное дыхание крысы.
   6. Поддерживайте температуру тела крысы на уровне 37 °C с помощью термостатических пластин во время операции.
   7. Поддерживайте глаза крысы во влажном состоянии с помощью эритромициновой мази во время эксперимента.
   8. Обезглавьте и убейте крыс под анестезией в конце эксперимента и храните образцы/образцы по мере необходимости.
2. Группы
   1. Сгруппируйте крысы случайным образом в соответствии с режимами соединения. Распределите по 8 крыс в каждую группу случайным образом.
   2. Контрольная группа (без иглоукалывания): Кормить крысу нормально без какого-либо лечения.
   3. Группа А, одна акупунктурная точка в левой группе передних конечностей: Соедините положительный и отрицательный электроды EA к точке Цучи и на расстоянии 3 мм от точки Цучи соответственно (см. Рисунок 1А). Найдите точку Цучи (LI11) в латеральном переднем углублении локтевого сустава и введите иглу перпендикулярно на глубину ~5 мм после позиционирования.
   4. Группа B, две акупунктурные точки в левой группе передних конечностей: Подключите положительный и отрицательный электроды EA к точкам Quchi (LI11) и Waiguan (TE5) соответственно (см. рисунок 1B). Найдите точку Вайгуана (TE5) за пределами нижней 1/6-кратной точки предплечья в лучевых и локтевых швах. Введите иглу на глубину 2 мм.
   5. Группа C, две акупунктурные точки в левой группе передних и задних конечностей: Подключите положительный и отрицательный электроды EA к Quchi (LI11) и Tsusanli (ST36) (см. рисунок 1C). Расположите точку Цусанли (ST36) на 5 мм ниже головки малоберцовой кости и заднелатерально к колену и введите иглу перпендикулярно на глубину ~1 см.
   6. Группа D, одинаковые акупунктурные точки в обеих задних конечностях: соедините положительный и отрицательный электроды EA с двусторонним Цусанли (ST36) (см. рисунок 1D).
   7. Группа E, одинаковые акупунктурные точки на обеих передних конечностях: Подключите положительный и отрицательный электроды EA к двустороннему Quchi (см. рисунок 1E).

2. Подключение ЭКГ

1. Удерживайте крыс в лежачем положении после тщательной анестезии.
2. Введите 1/2-дюймовые акупунктурные иглы параллельно коже правого переднего запястья, правой задней конечности и левой задней конечности крыс, избегая мышцы.
3. Подсоедините ручки игл к записывающим электродам: положительный (белый) электрод — на правой передней конечности, отрицательный (красный) — на левой задней конечности, а электрод сравнения (черный) — на правой задней конечности крысы (см. рисунок 2).
4. Используйте регистратор физиологических сигналов для записи стандартной поверхностной ЭКГ в отведении II конечностей крыс в режиме реального времени (частота дискретизации: 1 кГц, диапазон фильтрации: фильтр низких частот, 200 Гц; фильтр высоких частот, 0,8 Гц).

3. Отделение блуждающего нерва и запись сигналов выделений из блуждающего нерва

1. Разрез длиной 2-4 см делают по средней линии шеи между гортанью и грудиной после фиксации лежа на спине крыс, находящихся под наркозом.
2. Разрежьте ствол правого блуждающего нерва примерно на 1-2 см после обнаружения правой сонной артерии, содержащей сонную артерию, блуждающий нерв и симпатическую цепь) (см. рисунок 3А).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Симпатический нерв расположен латерально к сонной артерии и сопровождает блуждающий нерв. Шейный симпатический нерв тонкий по сравнению с блуждающим нервом.
3. Соедините нервный ствол парой электродов с медным крючком и прижмите электрод сравнения к разрезу, чтобы исключить помехи. Используйте физиологический раствор для поддержания активности блуждающего нерва на протяжении всего эксперимента (см. рисунок 3B).
4. Покройте поверхностную рану минеральным маслом для поддержания изоляции между электродом и мышцей.
5. Используйте регистратор физиологических сигналов для записи нервного разряда крыс в режиме реального времени (частота дискретизации: 5 кГц, диапазон фильтрации: фильтр низких частот, 100 Гц; фильтр высоких частот, 1000 Гц).

4. Вмешательство EA

ПРИМЕЧАНИЕ: Иглоукалывание крыс после ЭКГ и выделение блуждающего нерва были стабильными.

1. Соедините две рукоятки игл отдельно с зажимами для игл инструмента EA.
2. Установите стимуляцию советника на двунаправленную прямоугольную волну с шириной волны 0,3 мс. Установите интенсивность стимуляции на 0,2 мА, частоту на 10 Гц, а время стимуляции на 20 минут.
3. Наблюдайте за изменениями ЭКГ и нервного разряда крыс при различных режимах связи ЭА в режиме реального времени. Соберите данные за 30 с без стимуляции, за 30 с до ЭА и за 30 с после ЭА с помощью регистратора физиологических сигналов.
4. Записывайте изменения частоты сердечных сокращений, формы волн ЭКГ и выделений из блуждающего нерва крыс с помощью записывающего программного обеспечения.

5. Статистический анализ данных

1. Сравните изменения ЭКГ и разряда нервов у крыс в разных режимах подключения ЭА (до и после ЭА).
2. Выразите все экспериментальные данные в виде среднего ± стандартной ошибки.
3. Выполните t-критерий Стьюдента, когда данные пройдут тест на нормальное распределение. Проведите t-критерий парных выборок для сравнения изменений до и после EA и сочтите p < 0,05 статистически значимым.

Результаты

Влияние различных режимов подключения ЭА на ЭКГ у крыс
В контрольной группе регистрировалась ЭКГ здоровых крыс (см. рисунок 4А). Было обнаружено, что исходные условия содержания крыс существенно отличались. Частота сердечн?...

Обсуждение

В этом эксперименте мы наблюдали эффекты различных способов подключения положительных и отрицательных электродов, включая частоту сердечных сокращений, частоту активности блуждающего нерва и амплитуду разряда. Результаты показали, что когда положительный и отрица...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accupuncture Needle	Hwato	N/A
BL-420N physiological signal recorder	Techman	LAB-0017-0002-CDTM
Electroacupucture instrument	HANS	200A
Erythromycin ointment	Shuangji	N/A
Mineral oil	Solarbio	8012-95-1
Thermostatic rat plate	Techman	JR-30